注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠细菌内毒素检查方法研究

王德才 鄂春华

[摘要] 建立注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠细菌内毒素检查方法研究.参照《中国药典》2005年版二部附录"细菌内毒素检查法"进行干扰试验和结果判断.样品最大无干扰浓度为10mg/ml。注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠可采用细菌内毒素检查法进行质量控制。

[关键词] 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠;细菌内毒素检查法;凝胶法;稀释倍数;限值;干扰试验

[中图分类号] R978.1+1 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8650(2009)05-115-02

注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠是一种广谱抗菌新药,活性强。现参照《中国药典》2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法和附录XLXF细菌内毒素检查法应用指导原则,研究注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中细菌内毒素试验的干扰情况,建立其细菌内毒素检查方法。

1试药与仪器

注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠供试品(批号:20080106,20080107,20080108。规格,1.0g/瓶,×××药业有限公司)。细菌内毒素工作标准品(WSE,批号:2008-2。效价:180EU/支。中国药品生物制品检定所。鲎试剂TALA(批号:20080414,λ=0.25 EU/ml,规格:0.1ml/支,厦门鲎试剂厂);TALB(批号:20080205,λ=0.25 EU/ml,规格:0.1ml/支,湛江博康海洋生物制品有限公司);细菌内毒素检查用水(批号:20080301,内毒素含量低于0.015 EU/ml,规格:10ml/支,上海信谊制药厂)。超净工作台(苏州净化设备有限公司)。ZH-2型漩涡混合器(上海精科实业有限公司)。试验所用玻璃器皿均经250℃干烤1小时以清除可能存在的内毒素。

2方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度复核

按《中国药典》2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法进行。结果见表1,两批鲎试剂的灵敏度测定值λc均在0.5λ-2.0λ之间,符合规定。

2.2供试品细菌内毒素限值(L)确定

L=K/M。式中K为按规定的给药途径不同,人每千克体重每小时可接受的内毒素最大剂量,注射剂的K=5EU/(kg·h)。M为人体每千克体重每小时给药的最大剂量。参考使用说明书以头孢哌酮钠计。人用最大剂量为3g/(kg·h)。人体重按60kg计,M=3g/(kg·h)/60kg=50mg/(kg·h),L=K/M=5EU/(kg·h)/50mg/(kg·h)=0.1 EU/mg。所以从严确定为L=0.025 EU/mg(以头孢哌酮钠计)。

2.3最大有效稀释倍数

供试品稀释倍数计算;按公式MVD=CL/λ计算,其中L为细菌内毒素限值0.025 EU/mg,λ为鲎试剂的标示灵敏度,目前市售鲎试剂灵敏度在0.5-0.03 EU/ml,MVD在20.0-1.5 mg/ml之间。

2.4供试品干扰试验

2.4.1供试品干扰试验取供试品,加细菌内毒素检查用水使溶解,分别制成含头孢哌酮钠80、40、20、10、5、2.5mg/ml的溶液(记此系列溶液为NPC),并用其分别将细菌内毒素标准品制成含0.5 EU/ml的系列浓度(记此系列溶液为PPC),用两批鲎试剂(λ=0.25EU/ml)考察每个供试品浓度下的干扰情况,并设阴性对照和阳性对照。结果见表2。预试验结果表明头孢哌酮钠在20mg/ml以下浓度时,对鲎试剂的凝集反应无增强或抑制作用。

2.4.2供试品干扰试验根据预试验的结果,用细菌内毒素检查用水和10mg/ml供试品(以头孢哌酮钠计)分别将内毒素工作标准品制成0.5、0.25、0.125、0.0625 EU/ml的一系列浓度,分别用2个厂家的鲎试剂同时考察3批供试品每个浓度下的干扰情况,每一浓度做4管,同时作阴性对照和供试品阴性对照,结果见表3、表4,干扰试验结果表明;注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠10mg/ml(以头孢哌酮钠计)对鲎试剂的凝集反应无增强或抑制作用。

3讨论

TAL用于细菌内毒素的检测具有操作简单,灵敏度高,重现性好,实用性强等优点。一种新药是否可用细菌内毒素检查法替代热原检查法进行细菌内毒素的检测,首先要证实该样品本身是否存在干扰因素,进行干扰试验的目的就是要确定该品种在何种有效浓度范围内进行细菌内毒素检查时既可克服干扰因素,又能客观反映其所含的细菌内毒素量是否符合规定限值。

本试验用2个厂家的TAL对3批注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠供试品溶液进行干扰试验,结果表明其最大不干扰浓度为10mg/ml,其内毒素限值为以头孢哌酮钠计每1mg含内毒素量应小于0.025 EU/mg。试验中3批供试品进行细菌内毒素检查结果符合规定。

因此我认为注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠可以用细菌内毒素法进行细菌内毒素检测。

参考文献:

[1] 中国药典[s]二部.2005:附录XIE

[2] 中国药典[s]二部.2005:附录XIXF

(收稿日期2009-03-20)