干燥冷藏和室温条件下韭菜花粉活力比较

张志轩 汪妮 王海英 董自梅

（濮阳职业技术学院，河南濮阳，457000）

干燥冷藏和室温条件下韭菜花粉活力比较

张志轩 汪妮 王海英 董自梅

（濮阳职业技术学院，河南濮阳，457000）

对在常温下及干燥冷藏条件下韭菜花粉活力进行了研究。试验结果表明，在常温下（28～30℃，RH 80%～85%）韭菜花粉活力能保持5 d；而在干燥（RH为45%）冷藏（4±2）℃条件下韭菜花粉活力保持时间更长，达45 d左右。

韭菜 花粉活力 保存时间

经多年观察发现，不同韭菜品种花期不同，同一个品种由于春化程度不同或春季收割次数不同，花期也有显著的差异。花期不遇是韭菜人工杂交育种工作中的一道障碍，克服这种障碍的有效办法就是将花粉贮藏起来，而花粉活力却受贮存条件的影响。本试验对韭菜在夏季常温状态下及干燥冷藏环境中的花粉活力变化进行了研究，以期寻找保持韭菜花粉活力的适宜贮存条件，用于指导育种实践，同时也为种质的保存提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验于2008年8月，在濮阳职业技术学院生物系校内实训基地进行，供试品种为濮韭。先采集含苞待放的韭菜花蕾，用镊子剥下花药，放在培养皿中，置于28℃的恒温箱中培养8～12 h，使花药充分开裂，花粉散出后收集，然后人工混匀，一分为二，分别作为处理A和B。

1.2 试验处理

处理A（CK）室温存放：室内常温下露置，8月1～20日，室内温度保持在28～30℃，RH为80%～85%。

处理B干燥冷藏：先用变色硅胶干燥1 h，随后装入0.5 mL离心管中，密封，放入冰箱冷藏室，温度保持在（4±2）℃，RH为45%。

1.3 试验方法

花粉活力采用离体萌发法，其方法步骤为：取一套培养皿，底盖内放1张滤纸，加入少许蒸馏水，将滴有培养基（15%蔗糖与1%硼酸）的双凹载玻片放入其中，用毛笔蘸取少量花粉，轻轻撒在培养基的表面，于30℃的恒温箱内培养4～8 h，用10×10倍显微镜随机选取10个视野进行观察，观察花粉萌发情况，以花粉管长度大于或等于花粉直径为标准萌发花粉，花粉管长度小于花粉直径的视同失活花粉粒。每个处理3次重复，每个样本至少3个视野，每个视野不少于30粒花粉，计算每处理每次视野中的花粉总数和萌发花粉数，取3个视野之平均数，萌发率（%）＝（已萌发的花粉粒数/花粉粒总数）×100%。

前5 d每天测1次花粉活力，5 d后每5 d测1次，直至花粉无活力（萌发率在5%以下）时为止。

图1 室温贮藏条件下花粉萌发率

2 结果与分析

2.1 花粉管萌发过程

韭菜花粉在含有15%蔗糖与1%硼酸的培养基上，在30℃的培养温度下，培养约30 min后开始萌发，从开始萌发到培养4 h的时间内，萌发率呈直线上升趋势，以后基本恒定不变。试验过程中发现，花粉活力的丧失是一个连续的过程，没有明确的界限。另外，随着时间推移花粉活力逐渐降低，花粉管的质量也不断下降，逐渐变得越来越细软，并且花粉管萌发一段时间后，多发生花粉管前端突然释放内容物的现象。

图2 冷藏条件下花粉萌发率

2.2 室温露置条件下的花粉活力保持时间

以花粉萌发率低于5%为失活标准，韭菜花粉在室温（28～30℃），RH为80%～85%条件下露置，花粉活力保存时间为5 d（图1）。

2.3 干燥冷藏条件下的花粉活力保持时间

干燥后在冰箱冷藏室，即温度 （4±2）℃，RH为45%条件下，密封保存，韭菜花粉的生活力可保持45 d左右（图2）。而干燥低温贮藏后萌发的花粉管变细，有时有分枝。

3 小结与讨论

离体萌发法是测定花粉生活力行之有效的方法。蔗糖是花粉萌发的营养物质和能量来源，蔗糖浓度对花粉生活力有一定的影响。离体萌发培养基中添加蔗糖，一方面是维持渗透压，另一方面是作为代谢的底物。培养基中添加1%的硼酸则可以促进糖的吸收和代谢，增加氧气的含量和吸收，参与果胶的合成，有利于花粉管的建造，能进一步促进花粉萌发。因为硼有显著促进花粉管生长，提高其质量的作用。

研究结果表明，韭菜花粉在温度 （4±2）℃，RH 45%条件下可以保持活力45 d。据此，采用韭菜花粉在（4±2）℃，RH 45%的条件下贮藏可解决花期不遇的问题。低温冷藏韭菜花粉，主要是引起花药内小孢子的营养饥饿，启动营养细胞DNA的复制、分裂和进一步发育，从而提高小孢子的生活力，延长花粉寿命。

为保存种质资源和克服植物育种中杂交亲本的花期不遇，世界上许多国家先后开展了花粉贮藏保鲜研究，尤其是超低温技术的运用，能够使贮藏了一年的花粉，在解冻复苏后仍保持生活力，通过人工辅助授粉后，其结实率与新鲜的花粉相比较，无显著差异。如果将韭菜花粉贮藏在更低的温度条件下，花粉的生活力保持时间是否更长，还有待于在今后的试验中进一步研究。

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Comparison of Pollen Vigour in Dry-cold Storage and under Normal Condition in Chinese Chieve

ZHANG Zhixuan,WANG Ni,WANG Haiying,DONG Zimei
(Puyang Vocational Technology College,Puyang,Henan 457000)

The pollen vigour of chinese chieve was studied under normal condition and in dry cold storage.The results showed that the life-span of pollen under normal condition (30±2)℃was 5 d,and was about 45 d in dry cold storge (4± 2)℃.

Chinese chieve;Pollen viability;Life-span

10.3865/j.issn.1001-3547.2009.12.015

河南濮阳市重点应用研究资助项目（编号：070510）之部分内容

张志轩（1963-），男，在读硕士研究生，研究方向为园艺作物育种、教学和技术推广，电话：0393-4677298

2008-11-14