TRPC1 在食管胃结合部腺癌中的表达及临床病理意义

摘要：目的" "探讨TRPC1在食管胃结合部腺癌（AEG）中的表达情况及其与患者临床病理特征、肿瘤免疫微环境的关系。方法选取2017年8月-2022年7月汕头大学医学院附属肿瘤医院病理科接收的AEG标本83例，以及27例正常胃黏膜组织。采用免疫组化检测AEG患者肿瘤组织和正常胃黏膜组织TRPC1的表达；分析TRPC1在肿瘤组织和正常胃黏膜组织表达的差异及其与临床病理特征及肿瘤免疫微环境的关系。结果" AEG患者正常胃黏膜组织有不同程度TRPC1表达，肿瘤组织TRPC1存在异常表达；83例患者TRPC1表达的H评分均值为84，其中低表达TRPC1有50例（60.24%），高表达TRPC1有33例（39.76%）。TRPC1表达与患者性别、年龄、病理T分期、淋巴结转移、神经侵犯、脉管侵犯、组织学分化程度、免疫指标均无相关性（P＞0.05）；Spearman等级相关检验分析显示，TRPC1表达与CD8、CD163、LAG-3均无相关性（P＞0.05），但CD8与LAG-3呈负相关（r=-0.226，P=0.040）。结论" AEG中TRPC1的异常表达与患者临床病理特征、肿瘤浸润淋巴细胞均无相关性。

关键词：食管胃结合部腺癌；TRPC1；肿瘤免疫微环境

中图分类号：R735.1" " " " " " " " " " " " " " " " 文献标识码：A" " " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.18.011

文章编号：1006-1959（2024）18-0065-05

Abstract：Objective" To investigate the expression of TRPC1 in adenocarcinoma of esophagogastric junction （AEG） and its relationship with clinicopathological features and tumor immune microenvironment.Methods" A total of 83 AEG specimens and 27 normal gastric mucosa tissues were selected from the Department of Pathology， Cancer Hospital of Shantou University Medical College from August 2017 to July 2022. The expression of TRPC1 in tumor tissues and normal gastric mucosa tissues of AEG patients was detected by immunohistochemistry. The difference of TRPC1 expression between tumor tissues and normal gastric mucosa tissues and its relationship with clinicopathological features and tumor immune microenvironment were analyzed.Results" TRPC1 was expressed in different degrees in normal gastric mucosa tissues of AEG patients， and abnormal expression of TRPC1 was found in tumor tissues. The mean H score of TRPC1 expression in 83 patients was 84， including 50 cases （60.24%） with low expression of TRPC1 and 33 cases （39.76%） with high expression of TRPC1. The expression of TRPC1 was not correlated with gender， age， pathological T stage， lymph node metastasis， nerve invasion， vascular invasion， histological differentiation and immune index （Pgt;0.05）. Spearman rank correlation test showed that TRPC1 expression was not correlated with CD8， CD163 and LAG-3 （Pgt;0.05）， but CD8 was negatively correlated with LAG-3 （r=-0.226， P=0.040）.Conclusion" The abnormal expression of TRPC1 in adenocarcinoma of esophagogastric junction is not related to clinicopathological features and tumor infiltrating lymphocytes.

Key words：Adenocarcinoma of esophagogastric junction;TRPC1;Tumor immune microenvironment

作为TRP蛋白超家族成员之一的瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员1（TRPC1），在大多数组织中普遍表达[1]。TRPC1的异常表达与各种癌症的发展相关，包括乳腺癌[2， 3]、胰腺癌[4]、肝癌[5]、结肠癌[6]、胶质母细胞瘤[7]、肺癌[8]和甲状腺癌[9]等。本团队前期研究显示[10， 11]，TRPC1在乳腺癌、食管鳞状细胞癌中异常表达。然而，关于TRPC1在食管胃结合部癌（adenocarcinoma of esophagogastric junction， AEG）的表达情况研究较少。基于此，本研究旨在探讨TRPC1在AEG中的表达情况及其与患者临床病理特征、肿瘤免疫微环境的关系，现报道如下。

1资料与方法

1.1资料来源" 选取2017年8月-2022年7月汕头大学医学院附属肿瘤医院病理科接收的AEG标本83例，以及27例正常胃黏膜组织。正常胃黏膜组织取材方法[12]：距离癌症病变边缘5 cm以上的切缘。

1.2方法" 试剂：浓缩型Anti-TRPC1山羊多克隆抗体（ab110837）购于英国Abcam公司；即用型快捷免疫组化MaxVision TM试剂盒（兔抗羊IgG）（Kit-5107）、DAB显色试剂盒（DAB-0031）购于福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本均采用10%中性缓冲福尔马林固定，石蜡包埋，3 μm连续切片，65 ℃烤片1 h，二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10 min，无水乙醇、95%酒精、75%酒精、蒸馏水各2 min，PBS洗3×3 min，抗原修复（EDTA热修复），室温冷却，PBS洗3×3 min，一抗4 ℃孵育过夜，PBS洗3×3 min，二抗室温孵育15 min，PBS洗 3×3 min，DAB显色5 min，流水终止显色，苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照，用已知的阳性组织作为阳性对照。

1.3结果判读" TRPC1蛋白主要在细胞浆/膜中表达。采用半定量H评分法[13， 14]进行评分，该方法同时考虑了染色强度和该强度下细胞的百分比。在高倍镜（×400）下随机选择10个视野，将特异性染色强度评分为0分无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为棕褐色；计数染色细胞所占百分比（每个强度染色的细胞数/每个区域的细胞总数）。应用公式：H评分=（强度类别1×1染色细胞的百分比）+（强度类别2×2染色细胞的百分比）+（强度类别3×3染色细胞的百分比）。H评分在0～300，当100%的肿瘤细胞染色强度为3分时，即获得300的H评分。

1.4统计学方法" 应用SPSS 24.0统计学软件进行数据处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验；Spearman等级相关检验分析TRPC1表达与CD8、CD163、LAG-3的关系。P值均采用双侧检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1 TRPC1在AEG患者正常胃黏膜组织中的表达" 27例AEG患者正常胃黏膜组织均存在不同程度的TRPC1表达，见图1。

2.2 TRPC1在AEG患者肿瘤组织中的表达" TRPCI蛋白主要表达于细胞浆/膜，采用半定量H评分法评估AEG患者肿瘤组织的TRPC1表达，83例患者TRPC1表达的H评分均值为84，将TRPC1 H评分＜84定义为低表达，将TRPC1 H评分≥84定义为高表达，其中低表达TRPC1有50例（60.24%），高表达TRPC1有33例（39.76%），见图2。

2.3 TRPC1在AEG患者正常胃黏膜组织和肿瘤组织中表达的差异" 通过对27例AEG患者的正常胃黏膜组织和其肿瘤组织的TRPC1表达进行比较，其中12例患者的肿瘤组织TRPC1表达比其正常胃黏膜组织的表达强，而有15例患者的肿瘤组织TRPC1表达比其正常胃黏膜组织的表达弱，见图3。

2.4 TRPC1表达与AEG患者肿瘤免疫微环境的关系" 采用Spearman等级相关检验分析TRPC1表达与CD8、CD163、LAG-3的相关性，结果显示TRPC1表达与CD8、CD163、LAG-3均无相关性（P＞0.05），但CD8与LAG-3呈负相关（r=-0.226，P=0.040），见图4。

2.5 TRPC1表达与AEG患者临床病理特征的关系" TRPC1表达与患者性别、年龄、病理T分期、淋巴结转移、神经侵犯、脉管侵犯、组织学分化程度、免疫指标均无相关性（P＞0.05），见表1。

3讨论

虽然我国胃癌的发病率逐年缓慢下降，但食管胃结合部（esophagogastric junction， EGJ）肿瘤的发病率却有逐年上升趋势[15]。EGJ肿瘤主要有腺癌和鳞状细胞癌。AEG是指肿瘤中心位于EGJ上、下 5 cm内且累及EGJ的腺癌，其位置特殊，预后差且发病率在世界范围内呈逐年上升趋势[16]。不少文献报道TRPC1在多种肿瘤细胞或组织中普遍表达，并且提出TRPC1的异常表达与肿瘤的增殖和侵袭转移等密切相关。本团队前期也发现[11]，食管鳞状细胞癌中TRPC1表达下调，低表达患者的预后更差。且TRPC1的表达在雌激素受体阳性（ER+）和阴性（ER-）乳腺癌之间存在差异，在管腔A和管腔B亚型患者中，TRPC1表达高的患者预后较好，而在基底样和三阴性乳腺癌（TNBC）亚型中其对预后的影响却相反[17]。

本研究检测了27例AEG患者正常胃黏膜组织及肿瘤组织的TRPC1表达，结果发现27例患者的正常胃黏膜组织均有不同程度的TRPC1表达，同时患者的肿瘤组织中TRPC1存在异常表达。但在研究的83例AEG患者中，TRPC1的表达与患者性别、年龄、病理T分期、淋巴结转移、神经侵犯、脉管侵犯、组织学分化程度、免疫指标均无相关性（P＞0.05）。免疫细胞作为肿瘤免疫微环境（tumor immune microenvironment， TIME）的主要组成部分，在肿瘤的发生发展、治疗以及预后中起重要的作用。研究表明[17]，TIME中不同免疫细胞的比例可用于癌症监测、预后及治疗反应的评估。肿瘤浸润CD8+T淋巴细（CD8+TILs）是参与抗肿瘤细胞免疫应答机制的主要效应细胞，在肿瘤免疫稳态中扮演着重要角色[18]。CD163是M2型巨噬细胞特异性的分子标志物，M2型巨噬细胞又被称为肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages， TAM），其通过分泌多种细胞因子、趋化因子和蛋白酶，促进肿瘤生长、转移及血管和淋巴管生成。淋巴细胞激活基因3（lymphocyte activation gene-3， LAG-3， CD223）是另一个较新的免疫检查点，对淋巴细胞具有抑制作用[19]。本研究采用Spearman等级相关检验分析TRPC1表达与CD8、CD163、LAG-3的相关性，结果发现TRPC1表达与CD8、CD163、LAG-3均无相关行（P＞0.05），而CD8与LAG-3呈负相关关系（r=-0.226，P=0.040），提示LAG-3通过与配体结合，抑制T淋巴细胞的激活，进而抑制T淋巴细胞的抗肿瘤作用[20，21]。

综上所述，AEG中TRPC1的异常表达与患者临床病理特征、肿瘤浸润淋巴细胞均无相关性。但因本研究入组标本数量有限，后期团队将扩大入组人群数量，并从细胞学层面进一步研究。

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收稿日期：2023-09-19；修回日期：2023-10-04

编辑/杜帆

基金项目：1.市医学科技人才培训及临床技术提升计划项目（编号：汕府科〔2019﹞106号）；2.汕头大学医学院附属肿瘤医院院内青年科研基金项目（编号：2020A009）

作者简介：黄少敏（1984.4-），女，广东饶平县人，专科，主管技师，主要从事免疫组化检测技术的研究

通讯作者：曾芸珠（1983.2-），女，广东汕头人，硕士，主管技师，主要从事肿瘤分子病理的研究