改进的QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中麦草畏及代谢物残留量

摘 要：目的：建立改进的QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱分析牛奶中麦草畏及代谢物残留的检测方法。方法：样品采用乙腈-0.1%乙酸的混合溶液提取，无水硫酸镁和C18净化，高效液相色谱-串联质谱仪的MRM模式进行测定。结果：在2.0～500.0 μg·L-1，3，6-二氯水杨酸和麦草畏的线性相关系数分别为

0.996 0和0.999 0，回收率分别为76.1%～98.5%和82.1%～103.9%，相对标准偏差分别为5.3%～7.3%和5.4%～8.6%，定量限为10 μg·kg-1。结论：该方法操作简便、结果准确，适用于牛奶中麦草畏农药残留的检测。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法；牛奶；麦草畏

Determination of Dicamla and Its Metabolite Residues in Milk with Modified QuEChERS-HPLC-MS/MS

BAI Guotao， MA Caixia， REN Caixia， ZHANG Hui， CHEN Limei， WANG Jing

（Hohhot Customs Technical Centre， Hohhot 010020， China）

Abstract： Objective： To establish an improved QuEChERS high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of dicamla and its metabolites in milk. Method： The samples were extracted with mixed solution of acetonitrile and 0.1% acetic acid， purified by anhydrous magnesium sulfate and C18， and determined by MRM mode of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometer. Result： The linear correlation coefficients of dichlorosalicylic acid and trivaloba in 2.0～500.0 μg·L-1， 3，6-dichlorosalicylic acid and trivaloba were 0.996 0 and 0.999 0， respectively. The recoveries were 76.1%～98.5% and 82.1%～103.9%， and relative standard deviation were 5.3%～7.3% and 5.4%～8.6%， respectively. The limit of quantification was 10 μg·kg-1. Conclusion： The method is simple and accurate， and suitable for the determination of dicamla pesticide residues of dicamba in milk.

Keywords： high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; milk; dicamla

麦草畏属安息香酸类除草剂，由美国威尔斯科尔化学公司研发[1]，适用于高粱和玉米等作物轮作中阔叶杂草的防治[2]。GONZALEZ等[3]通过对人类淋巴细胞进行体外培养发现，一定浓度的麦草畏可能会导致细胞中毒和干扰细胞循环进程。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）规定，麦草畏在动物源性食品中的残留物为麦草畏和3，6-二氯水杨酸之和，牛奶中的最大残留限量为0.2 mg·kg-1[4]。

麦草畏测定方法主要包括气相色谱法[5]、气相色谱-质谱法[6-7]、气相色谱-串联质谱法[8]、液相色谱法[9]和液相色谱-质谱/质谱法[10-14]等。采用气相色谱检测，前处理过程需要衍生化处理，液相色谱不适用于确证检测，而应用液相色谱-串联质谱仪进行测定，有前处理简便、定量限低、测试时间短等优点。牟仁祥等[10]建立了稻米中13种苯氧羧酸类除草剂残留检测方法，样品经乙腈提取，盐酸酸化，SCX阳离子吸附剂分散固相萃取净化，方法检出限达0.01 mg·kg-1；王可等[11]建立了液相色谱-串联质谱仪测定婴幼儿谷物食品中苯氧羧酸类除草剂残留检测方法，采用2%甲酸的乙腈溶液提取，以PSA和MgSO4净化，方法定量限为8.1 μg·kg-1；张立佳等[12]建立了牛乳中麦草畏残留的高效液相色谱-串联质谱测定方法，样品通过0.5%甲酸的乙腈溶液提取，氯化钠盐析，方法定量限为10 μg·kg-1。这些方法均未包含麦草畏代谢物3，6-二氯水杨酸。本方法采用QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱仪，建立了牛奶中麦草畏及其代谢物农药残留的检测方法。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

麦草畏、3，6-二氯水杨酸标准品，纯度均大于97.0%，阿尔塔科技公司；乙腈（色谱纯），美国Fisher公司；甲酸（分析纯），J.T.Baker公司；冰乙酸（分析纯），天津市天大化工实验厂；氯化钠、无水硫酸镁（分析纯），福晨（天津）化学试剂有限公司；C18填料（粒径40～63 μm），上海安普实验科技股份公司。

Agilent 6495型液相色谱-三重四极杆质谱仪，配ESI源，美国安捷伦科技公司；涡旋振荡器，日本EYELA公司；Thermo超纯水发生器，美国Thermo Fisher公司；3K-15冷冻离心机，德国SIGMA公司。

1.2 样品前处理

准确称取2 g牛奶（精确至0.01 g）样品，置于50 mL塑料离心管中，加入10 mL含0.1%乙酸的乙腈溶液，涡旋振荡提取10 min后，再加入2 g氯化钠，振荡混匀5 min，在4 ℃条件下10 000 r·min-1离心5 min。在10 mL离心管中分别加入C18填料150 mg、无水硫酸镁250 mg，再加入2 mL上清液，涡旋振荡净化2 min，在4 ℃条件下5 000 r·min-1离心5 min，取上清液过0.22 μm滤膜，待高效液相色谱-串联质谱仪测定。

1.3 LC-MS/MS检测条件

（1）色谱条件。色谱柱：Agilent SB C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱温箱温度：35 ℃；进样量：5.0 μL。流动相及线性洗脱梯度见表1。

（2）质谱条件。采用电喷雾离子源的负离子模式测定；离子源温度：250 ℃；去溶剂气温度：350 ℃；去溶剂气流量：11.0 L·min-1；四极杆温度：100 ℃。质谱参数见表2。

2 结果与分析

2.1 质谱条件的优化

本文分别对3，6-二氯水杨酸和麦草畏标准溶液进行母离子正、负离子模式扫描，发现麦草畏、3，6-二氯水杨酸在负模式下均有较好的响应，正模式响应较差。麦草畏的二级碎片离子为m/z 175.0，其他离子响应较小；3，6二氯水杨酸的二级碎片离子为m/z 160.9和125.0，且m/z 160.9的响应值较高且稳定，因此选择204.9/160.9为定量离子对。

2.2 提取条件的优化

本文考察了乙腈、甲醇对麦草畏及其代谢物在牛奶基质中的提取效果。结果表明，用甲醇进行提取时，基质的沉降蛋白效果较差，用乙腈提取时，基质的蛋白沉降较充分。此外，在样品的提取体系中加入适量的酸可抑制羧酸类化合物的解离，增加有机相中的溶解度[10]。而负离子模式下，过多的酸会影响检测灵敏度。故本文采用含0.1%乙酸的乙腈溶液进行提取，且麦草畏和3，6-二氯水杨酸的回收率均在85%以上。

2.3 线性范围、相关系数、定量限和基质效应

采用空白牛奶基质溶液分别配制2.0 μg·mL-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1、50.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1、250.0 μg·L-1和500.0 μg·L-1的麦草畏及3，6-二氯水杨酸溶液，并用液相色谱-串联质谱仪进行分析。在上述测定条件下，以3，6-二氯水杨酸和麦草畏定量离子的色谱峰面积（Y）和相应的质量浓度（X）建立校准曲线。在2.0～500.0 μg·L-1，3，6-二氯水杨酸和麦草畏的线性相关系数分别为0.996 0和0.999 0。以10倍信噪比（S/N）得出麦草畏及3，6-二氯水杨酸在牛奶中的定量限均为10 μg·kg-1，结果详见表3。

用体积分数为1∶9的乙腈和0.1%甲酸水溶液配制2.3相同浓度的麦草畏及3，6-二氯水杨酸标准溶液，液相色谱-串联质谱仪分析，按照基质匹配校准曲线斜率与纯溶剂标准曲线斜率的比值评估基质效应。结果表明，麦草畏的基质效应为106%，3，6-二氯水杨酸的基质效应为90.8%。两者的基质效应不明显，可以采用溶剂标准溶液进行定量。

2.4 方法的准确度和精密度

向空白牛奶样品中分别添加10 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1的麦草畏及3，6-二氯水杨酸标准工作溶液，每个水平重复测定6次，按照1.2和1.3进行样品前处理以及液相色谱-串联质谱仪测定，计算回收率以及相对标准偏差。由表4可知，3，6-二氯水杨酸的回收率为76.1%～98.5%，相对标准偏差为5.3%～7.3%，麦草畏的回收率为82.1%～103.9%，相对标准偏差为5.4%～8.6%。

2.5 实际样品测定

按照本方法对市售的20批次牛奶样品进行麦草畏及3，6-二氯水杨酸测定。结果表明，20批次样品均未检出麦草畏及3，6-二氯水杨酸。

3 结论

本文采用改进的QuEChERS前处理方法，建立了测定牛奶中麦草畏及3，6-二氯水杨酸农药残留的高效液相色谱-串联质谱法。该方法的净化效果优、重复性好、灵敏度高，适用于牛奶中麦草畏及3，6-二氯水杨酸的测定，具有广泛的适用性。

参考文献

[1]陈勇，邵守言，黄诚，等.麦草畏市场现状及合成路线研究进展[J].安徽化工，2018，44（1）：26-30.

[2]谭海军，田琳.麦草畏的开发及应用进展研究[J].农药研究与应用，2010（6）：5-8.

[3]GONZÁLEZ N V，SOLONESKI S，LARRAMENDY M L.Genotoxicity analysis of the phenoxy herbicide dicamba in mammalian cells in vitro[J].Toxicology in Vitro，2006，20（8）：1481-1487.

[4]中华人民共和国国家卫生健康委员会，中华人民共和国农业农村部，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量：GB 2763—2021[S].北京：中国标准出版社，2021.

[5]丁立平.分散固相萃取-气相色谱法测定谷物中4种苯甲酸类除草剂[J].分析试验室，2023，42（4）：496-500.

[6]程寿峰，魏绍峰，王兴宁，等.气相色谱-质谱法测定大米中15种苯氧羧酸类除草剂的残留量[J].理化检验-化学分册，2017，53（11）：1281-1285.

[7]EGORCHENKOVA O E，SOBOLEV D N.Methodological reception for determination of dicamba residues in soybeans by GC-MS[J].Gigiena i Sanitariya，2018，97（6）：564-567.

[8]朱萌萌，叶群，胡松，等.气相色谱-串联质谱法测定茶叶中10种酸性除草剂的残留量[J].理化检验-化学分册，2019，55（7）：762-767.

[9]庞亚男，孙孟琳，苏龙，等.高效液相色谱法测定染毒饲料中麦草畏原药含量[J].农药，2015，54（11）：811-813.

[10]牟仁祥，陈铭学.稻米中13种苯氧羧酸类除草剂多残留的高效液相色谱-质谱测定[J].分析测试学报，2008，27（9）：973-976.

[11]王可，曹倩玉，赵灵芝，等.高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿谷物食品中11种苯氧羧酸类除草剂[J].分析测试学报，2018，37（11）：1349-1353.

[12]张立佳，刘丽君，白艳梅，等.高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳中麦草畏残留[J].乳业科学与技术，2023，46（3）：17-22.

[13]储晓刚，雍炜，凌云，等.超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定大豆中107种除草剂残留[J].分析化学，2008，36（3）：325-329.

[14]马有宁，陈铭学.高效液相色谱-串联质谱法分析蔬菜中残留的麦草畏[J].农药学学报，2012，14（3）：349-352.