生化益母口服液提取工艺研究

【摘要】目的：优选生化益母口服液提取工艺。方法：在单因素考察基础上，采用正交试验，以苦杏仁苷、阿魏酸、浸出物为指标，变异系数权重综合评分，考察加水量、提取次数、提取时间对提取结果的影响。结果：生化益母口服液最佳提取工艺为加10倍量的水，提取2次，每次1.5 h。结论：该工艺简单、稳定、可靠，可以用于生化益母口服液提取工艺，为生化汤进一步开发研究提供参考。

【关键词】生化汤；苦杏仁苷；阿魏酸；正交试验；变异系数

【中图分类号】R284.2

【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2024）21-0019-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.21.zgmzmjyyzz202421005

Study on the Extraction Process of Shenghua Yimu Oral Liquid

FAN FengMA DeqiangWANG ZhongsanZHGANG Su

Taihe County Traditional Chinese Medicine Hospital，Taihe 236600，China

Abstract：Objective To optimize the extraction process of Shenghua Yimu oral liquid.Methods On the basis of single factor investigation， orthogonal test was used to investigate the influence of water addition， extraction times and extraction time on the extraction results by taking amygdalin， Ferulic acid and extracts as indicators and comprehensive scoring of coefficient of variation weight.Results The optimal extraction process for Shenghua Yimu Oral Liquid： Add 10 times the amount of water and extract twice， each time for 1.5 hour. Conclusion The process is simple， stable， and reliable， and can be used for the production and extraction of biochemical Yimu oral liquid. Provide reference for further development and research of Shenghua Tang.

Keywords：Shenghua Decoction；Amygdalin；Ferulic acid；Orthogonal test；Coefficient of Variation

生化益母口服液是我院妇产科在《傅青主女科》名方生化汤基础方上加益母草而成。主要用于产后瘀阻腹痛及妇科炎症。方中君药当归，具有温中补血、活血调经、止痛、润肠通便的作用，臣药川芎、桃仁，活血止痛，桃仁兼有润肠通便的作用。佐药益母草，有活血化瘀、利水消肿的作用。对妇女产后易患虚寒腹痛、津血亏虚便秘尤为适用。现代临床研究^［1-2］表明：气血亏虚是产生瘀阻的原因。妇女生产时耗伤气血，从而产生瘀阻。生化汤治疗气虚血瘀作用机制是抗炎、抗凝^［3］，对于各种血瘀和妇科炎症具有广泛的治疗作用^［4］。为了适应现代人生活节奏和用药习惯，现改为口服液。对君臣药主要成分进行控制，确保制剂质量。

1试药与仪器

1.1材料当归、川芎、炒桃仁、益母草、炮姜、炙甘草等购于安徽守正中药饮片有限公司，生化益母口服液（批号：20230508、20230511、20230514），苦杏仁苷（购于中国生物制品研究院）、阿魏酸（购于中国生物制品研究院）。甲醇、纯化水、磷酸。

1.2仪器DXY-6T数显恒温水浴锅（深圳鼎鑫宜实验室器材有限公司），DHG-9055A电热恒温干燥箱（上海一恒仪器科技有限公司），FA2004电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），XSE105电子天平（梅特勒科学仪器有限公司），TU-1810紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

2方法

2.1含量测定^［5］

2.1.1对照品溶液的配制取苦杏仁苷10.02 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，苦杏仁苷浓度为0.4008 mg/mL，作为贮备液。取阿魏酸10.71 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，阿魏酸浓度为0.4283 mg/mL，作为贮备液。

精密量取苦杏仁苷贮备液1 mL和阿魏酸0.5 mL于5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。得对照品溶液。同法精密量取苦杏仁苷贮备液4 mL，阿魏酸1 mL于5 mL量瓶中，摇匀。从中精密量取2 mL于5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。依次稀释得5个不同级别浓度的溶液，用于线性关系考察。

2.1.2样品溶液的配制取处方各饮片，按处方对应量1/8称取：当归2.501 g、川芎1.502 g、炒桃仁1.508 g、益母草3.751 g、炮姜0.756 g、炙甘草0.502 g，加10倍量煎煮提取2次，合并滤液，浓缩，定容于100 mL量瓶。精密量取5 mL，置水浴锅上烝近干，加70%甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，摇匀。同法制成阴性对照溶液。

同上取处方各饮片，按处方对应量1/8称取6份，同法制成重复性试验溶液。

精密量取样品溶液5 mL 6份，分别精密加入苦杏仁苷贮备液1 mL，阿魏酸贮备液0.3 mL，置水浴锅烝至近干，加70%甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，摇匀。用于加样回收试验。

2.2单因素考察分别对影响提取效果的加水量、提取时间、提取次数进行考察。按加10倍量的水，提取1次，每次提取1 h。取处方各饮片，按处方对应量1/8每次称取4份，改变其中1个因素，设立4个水平，按上述方法制成样品溶液，考察不同因素水平对苦杏仁苷和阿魏酸的含量影响。

2.3正交试验^［6］在单因素的基础上，对影响提取效果的3因素设立3个水平，采用L9（34），以苦杏仁苷、阿魏酸、浸出物为评价指标，用变异系数法综合权重综合评分分析。见表1。

3结果

3.1高效液相色谱法方法学考察结果

3.1.1系统使用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂C18柱；以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相，采用梯度洗脱；检测波长为210 nm。柱温33 ℃，理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于25000。不对称性分别为1.02、1.05，分离度为1.7、1.8，阴性对照无干扰。如图1～3。

3.1.2 ;精密度取对照品溶液连续进样6针，得苦杏仁苷峰面积分别为7.4391、7.4520、7.4419、7.4479、7.4556，平均为7.4473，相对标准偏差RSD为0.08；阿魏酸峰面积为13.5036、13.8349、13.7978、13.8282、13.8093、13.7961，平均为13.7625，相对标准偏差为0.91%。

3.1.3线性取线性关系考察5个不同浓度级别的溶液进样，进样量5 μL。峰面积对浓度进行线性回归，结果苦杏仁苷线性回归方程为y=0.0864x+0.2046，r2=0.9999，在8.20～320.64 μg/mL范围内有良好的线性关系；阿魏酸线性回归方程为y=0.3137x+0.0366，r2=1，在2.19～85.66 μg/mL范围内有良好的线性关系。如图4、图5。

3.1.4重复性对6份重复性试验样品进行测定，测得样品溶液苦杏仁苷的浓度分别为：340.98 mg/L、342.10 mg/L、329.34 mg/L、327.32 mg/L、340.92 mg/L、332.52 mg/L，平均为335.52 mg/L，相对标准偏差RSD为1.93%；样品溶液阿魏酸的浓度分别为28.01 mg/L、28.31 mg/L、26.54 mg/L、28.03 mg/L、27.79 mg/L、27.15 mg/L，平均为27.64 mg/L，相对标准偏差为2.38%。表面重复性良好。

3.1.5稳定性试验将对照品溶液每隔6 h进样一次，进样6针，得到苦杏仁苷峰面积分别为：7.4252、7.4511、7.4479、7.4451、7.4782、7.4797，平均7.4564，相对标准偏差RSD为0.26%；阿魏酸峰面积分别为：13.6044、13.8153、13.8282、13.8177、13.6193、13.6106、13.5714，平均为13.6953，相对标准偏差为0.86%。表明苦杏仁苷、阿魏酸在36 h内稳定。

3.1.6加样回收试验按加样回收试验测得数据，进行计算结果如表2。试验结果表明：回收率符合要求。

3.2单因素考察结果

3.2.1加水量对苦杏仁苷和阿魏酸提取结果的影响 在提取时间1 h、提取1次时，试验结果表明：随着加水量的增加苦杏仁苷、阿魏酸提取浓度有逐渐增大的趋势，并趋于平稳。如图6。

3.2.2提取次数对苦杏仁苷和阿魏酸提取结果的影响在加水量10倍，提取时间1 h， 试验结果表明：随着提取次数的增加苦杏仁苷、阿魏酸提取浓度有逐渐增大的趋势，但趋于平稳。如图7。

3.2.3提取时间对苦杏仁苷和阿魏酸提取结果的影响在加水量10倍，提取1次，试验结果表明：随着提取时间的增加苦杏仁苷有逐渐减小的趋势，并趋于稳定；阿魏酸提取时间逐渐增大，基本处于平稳状态。如图8。

3.3正交试验结果

3.3.1变异系数法权重评分根据正交试验测定苦杏仁苷、阿魏酸、浸出物3指标数值，按照变异系数权重计算方法计算评分权重。结果如表3。

3.3.2正交试验结果按照正交试验设计表，依次试验，测定数据记录如表4。从表观上看，因素B极差最大，因素C极差最小，因此3因素对生化益母口服液提取效果影响比较，结果是：B>A>C，工艺应为A2B3C1，根据方差分析，因素B提取次数对生化益母口服液提取效果有显著的影响（P<0.01），同时提取时间对提取效果影响较显著（P<0.05），结合单因素考察，尽管苦杏仁苷与阿魏酸随提取次数增加而提取量增多，但2次提取以后已趋于稳定，提取工艺修正为A2B2C2，故最佳提取工艺为A2B2C2。即加10倍量的水，提取2次，每次1.5 h。

3.4验证试验按照上述提取工艺，加10倍量的水，提取2次，每次1.5 h，连续进行3批实验，结果如表5。验证试验结果，苦杏仁苷相对标准偏差为0.86%，阿魏酸相对标准偏差为1.86%，表明：优选的提取工艺稳定、可靠。

4讨论

4.1高效液相色谱法含量测定系统使用性条件选择^［7］波长的选择：分别制备苦杏仁苷、阿魏酸对照品甲醇稀释液，在紫外分光光度计下进行光谱扫描，结果在210 nm处两者均有最大吸收，故作为检测波长。流动相选择：当选择甲醇-水时，阿魏酸色谱表现为双峰，乙腈-水时，样品峰不能得到很好分离；经过多次试验，当用甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱时，色谱峰不对称性、分离度、理论塔板数均符合要求。柱温的选择：当柱温箱温度制33 ℃时，苦杏仁苷色谱峰不对称性更佳。

4.2指标成分的选择长期以来，生化汤的研究很少有同时测定苦杏仁苷和阿魏酸作为其制剂质量标准或提取质量控制指标。阿魏酸和苦杏仁苷分别是生化汤君臣药主要化学成分，以其作为提取质量控制指标，能够反应提取溶液质量。

4.3变异系数法确定权重评分变异系数反应不同因素条件2527ee40e2ad5b9bd8fb631e360985bd对指标成分数值大小的影响，能够客观地反映各因素对提取结果的影响，比人为评分要有科学价值。

生化汤具有活血化瘀、调经止痛的功效，在临床上具有广泛的应用。对生化汤的开发，可使其更好地为人类服务。实验系统研究了生化益母口服液提取方法，最佳提取工艺为加10倍量的水，提取2次，每次1.5 h。该工艺简单、稳定、可靠，可以用于生化益母口服液提取。为生化汤生产提供理论依据，为进一步开发研究提供参考。

参考文献

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（收稿日期：2024-02-25编辑：刘斌）