苜草素对不同生长阶段蛋鸡血清细胞因子水平的影响

摘 要：本试验旨在探究苜草素对不同阶段蛋鸡血清细胞因子水平的影响，选择育成期、产蛋高峰期、产蛋后期蛋鸡各288只，每个阶段均随机分为4组，每组6个重复，每个重复12只鸡。对照组饲喂基础日粮，3个试验组分别在饮水中添加500、1 000、1 500 mg/L苜草素，每周每个试验组随机选取30只鸡采血，持续采血10周，通过ELISA法检测血清中白细胞介素2（Interleukin-2，IL-2）、白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）和肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）的水平。结果表明：添加1 000、1 500 mg/L苜草素显著提高不同生长阶段蛋鸡血清中IL-2和TNF-α的水平（P＜0.05），显著降低不同生长阶段蛋鸡血清中IL-6的水平（P＜0.05）；添加500 mg/L苜草素对以上细胞因子指标没有显著影响。综上所述，在不同生长阶段添加1 000 mg/L苜草素即可有效增强蛋鸡的细胞免疫应答。

关键词：苜草素，蛋鸡，细胞因子，免疫功能

中图分类号：S816.701.5 文献标识码：A 文章编号：1673-1085（2024）10-0020-08

4yDHgcvyQ6bM4MpBpVq3VxLrsTXaSYl220uYE6lx8qM=苜草素是一种从紫花苜蓿中分离提取出的活性物质，其中有效成分包括多糖、皂苷以及黄酮等[1-2]。在生产中，苜草素常被用作饲料添加剂[3-4]。本研究以不同生长阶段的蛋鸡（育成期、产蛋高峰期、产蛋后期）为试验对象，通过测定影响蛋鸡抗病能力的相关免疫指标，研究不同添加剂量对各个生长阶段蛋鸡血清相关细胞因子水平的影响，进而为蛋鸡生产中苜草素的使用提供实践依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

苜草素是由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所饲料添加剂研究室提供，是从紫花苜蓿中通过现代提取工艺技术生产的纯植物成分饲料添加剂，其主要有效成分水平为多糖18.63%、黄酮5.89%、皂苷5.68%。

1.2 主要仪器

台式离心机（型号：Nefuge15）：上海力申科学仪器有限公司生产；微量振荡器（型号：ZW-A）：华北实验仪器有限公司生产；电子天平（型号：AE260）：上海梅特勒托利多有限公司生产；微量移液器：Thermo公司生产；酶标仪（型号：TECAN SUNRISE）：TECAN公司生产；电热恒温培养箱（型号：9082）：上海一恒科技有限公司生产；自动酶标洗板机（型号：HYDROSPEED）：TECAN公司生产。

1.3 试验设计

本试验分为3个阶段：育成期（7～17周）、产蛋高峰期（22～32周）和产蛋后期（56～66周），每个阶段选取288只海兰褐蛋鸡，随机分为4组，即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组，每组6个重复，每个重复12只鸡。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在饮水中添加500、1 000、1 500 mg/L苜草素。

1.4 血样采集

每周对每个试验组鸡只通过翅静脉采血0.5 mL，室温放置1 h，使血清充分析出，然后于2 000 r/min离心10 min，收集血清。

采用上海双赢生物科技有限公司生产的鸡细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α酶联免疫分析（ELISA）试剂盒测定。

1.5 统计分析

用SPSS13.0软件中One-way ANOVA程序进行方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，以P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 不同生长阶段蛋鸡血清中IL-2水平检测结果

表1为饮水添加不同剂量苜草素对育成期蛋鸡血清中IL-2水平的影响。从表中可看出，在7～10周龄时，各处理组蛋鸡血清IL-2水平无显著差异。但是在11～17周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清IL-2水平显著高于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

表2为饮水添加不同剂量苜草素对产蛋高峰期蛋鸡血清中IL-2水平的影响。在22～29周龄时，各处理组蛋鸡血清IL-2水平无显著差异。但在30～32周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清IL-2水平显著高于对照组（P<0.05）。

表3为饮水添加不同剂量苜草素对产蛋后期蛋鸡血清中IL-2水平的影响。在56～59周龄时，各处理组蛋鸡血清IL-2水平无显著差异。但在60～66周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清IL-2水平显著高于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。以上结果说明，在当前试验条件下，血清IL-2水平与苜草素的添加剂量呈正相关，但是是否添加剂量越大，IL-2的水平越高，有待进一步研究。

2.2 不同生长阶段蛋鸡血清中白细胞介素IL-6水平检测结果

表4为饮水添加不同剂量苜草素对育成期蛋鸡血清中IL-6水平的影响。从表中可看出，在7～12周龄时，各处理组蛋鸡血清IL-6水平无显著差异。但是在13～17周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清IL-6水平显著低于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

表5为饮水添加不同剂量苜草素对产蛋高峰期蛋鸡血清中IL-6水平的影响。在22～26周龄时，各处理组蛋鸡血清IL-6水平无显著差异。但在27～32周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清IL-6水平显著低于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

表6为饮水添加不同剂量苜草素对产蛋后期蛋鸡血清中IL-6水平的影响。在56～60周龄时，各处理组蛋鸡血清IL-6水平无显著差异。但在61～66周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清IL-6水平显著低于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

以上结果说明，饮水中添加不同剂量的苜草素可以显著抑制白细胞介素IL-6的分泌量，提高机体本身的免疫力。

2.3 不同生长阶段蛋鸡血清中TNF-α水平检测结果

表7为饮水添加不同剂量苜草素对育成期蛋鸡血清中TNF-α水平的影响。从表中可看出，在7～13周龄时，各处理组蛋鸡血清TNF-α水平无显著差异。但是在14～17周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清TNF-α水平显著高于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

表8为饮水添加不同剂量苜草素对产蛋高峰期蛋鸡血清中TNF-α水平的影响。在22～25周龄时，各处理组蛋鸡血清TNF-α水平无显著差异。但在26～32周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清TNF-α水平显著高于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

表9为饮水添加不同剂量苜草素对产蛋后期蛋鸡血清中TNF-α水平的影响。在56～59周龄时，各处理组蛋鸡血清TNF-α水平无显著差异。但在60～66周龄时，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组蛋鸡血清TNF-α水平显著高于对照组和试验Ⅰ组（P<0.05）。

3 讨论

3.1 IL-2对蛋鸡免疫系统的影响

IL-2也叫做T细胞生长因子，是所有细胞因子佐剂中研究得最深入、最广泛的细胞因子之一，在机体免疫调节中发挥重要的作用。IL-2能够直接激活单核细胞，加快T、B细胞的分化及增殖，促进B细胞分泌抗体，激发LAK等细胞生长。不管是细胞免疫或者是体液免疫，IL-2都有正向促进作用，但对前者更有效用[5]。在人类医学上， IL-2常作为一种免疫增强剂应用到临床。本试验发现，添加1 000、1 500 mg/L苜草素可提高各阶段蛋鸡血清中IL-2的水平，表明苜草素可改善蛋鸡免疫功能。

3.2 IL-6对蛋鸡免疫系统的影响

IL-6是由单核巨噬细胞、Th2细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等产生的炎性细胞因子，如果机体中存在炎症时，IL-6水平会显著升高，促进机体炎症[7]。本试验结果表明，在不同生长阶段，三个试验组蛋鸡血清中IL-6的水平均低于对照组，这表ml5kqQnf8wlk5CYnAyfINYqEE3IzJ/P3aBcA9dR/CaM=明苜草素可以对蛋鸡的免疫系统有明显的增强作用。

3.3 TNF-α对蛋鸡免疫系统的影响

TNF-α对肿瘤细胞具有直接的细胞毒作用和生长抑制作用，还可提高中性粒细胞的吞噬能力，促进免疫细胞的增殖和分化[6-7]。本研究表明，在三个生长阶段，与对照组相比，添加1 000、1 500 mg/L苜草素可提高蛋鸡血清中TNF-α的水平，表明饮水添加1 000、1 500 mg/L苜草素对蛋鸡免疫功能有一定的改善作用。

4 结论

在本试验条件下，饮水中添加苜草素对不同生长阶段蛋鸡的机体免疫功能具有一定增强作用，其适宜添加水平为1 000 mg/L。

参考文献：

[1] 王成章，徐向阳，杨雨鑫，等.不同紫花苜蓿品种引种试验研究[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2002，30（3）：29-31.

[2] 王鑫，马永祥，李娟.紫花苜蓿营养成分及主要生物学特性[J].草业科学，2003，20（10）：39-40.

[3] 蔡辉益.优质环保饲料的营养理论基础与应用技术研究进展[C]//动物营养研究进展论文集，中国农业科学院饲料研究所，2004：9.

[4] 张跃林.天然植物性饲料添加剂的作用原理及其在生产上的应用[J].中国畜牧兽医，2006，33（10）：20-23.

[5] 江勇.苜草素对肉仔鸡生产性能的影响及其免疫学机理的研究[D].沈阳：沈阳农业大学，2005.

[6] 荣岳光.苜草素对小鼠巨噬细胞NO、IL-6、TNF-α分泌的影响及其机理研究[D].北京：中国农业科学院，2007.

[7] 翟钦辉，荣岳光，董晓芳，等.苜草素对巨噬细胞吞噬活性和 NO、IL-6、TNF-α 分泌的影响[J].营养学报， 2012. （02）：181-185.

Effects of Polysavone on Cytokine Secretion in Laying Hens at Different Growth Stages

Abstract： The effects of polysavone on cytokines of laying hens at different stages were investigated. A total of 288 laying hens at growing period， peak laying period and late laying period were selected and randomly divided into four groups. The control group was supplied with only basal diet， and different doses of polysavone were added to drinking water in experimental groups. The contents of IL-2， IL-6 and TNF-α in serum were detected by ELISA assay. The results showed as follows： supplementation of 1 000 mg/L and 1 500 mg/L polysavone significantly increased the contents of IL-2 and TNF-α in serum of laying hens at different growth stages （P<0.05）， and significantly decreased the content of IL-6 in serum （P<0.05）. The addition of 500 mg/L polysavone had no significant effect on the above cytokine indexes. According to the results of this experiment， adding 1 000 mg/L polysavone at different growth stages can effectively enhance the cellular immune response of laying hens.

Keywords： Polysavone; Laying hens; Cytokines; Immune function