油菜花粉玛咖咀嚼片的制备及槲皮素和山奈酚的含量测定

【摘要】

目的：探究油菜花粉玛咖咀嚼片的制备工艺及槲皮素和山奈酚含量测定的方法。方法：通过湿法制粒工艺，制备油菜花粉玛咖咀嚼片；采用高效液相色谱（HPLC）法对油菜花粉玛咖咀嚼片中槲皮素和山奈酚的含量进行测定，色谱柱为ODS-C18柱，流动相为甲醇-水，进行等度洗脱，体积流量为1.0 mL/min；柱温为35 ℃，检测波长为370 nm，进样量为5 μL。结果：油菜花粉玛咖咀嚼片的制备工艺为油菜花粉∶玛咖提取物粉末∶填充剂=1∶1∶2，填充剂（微晶纤维素：木糖醇：乳糖=6∶4∶3）。所得咀嚼片表面光洁、甜度适中且质量稳定可控。槲皮素和山奈酚的线性范围分别为2.29～45.83 μg/mL、3.75～75 μg/mL，相关系数（r）分别为0.9996和0.9992；平均加样回收率分别为99.79%和101.02%，RSD分别为3.33%和2.56%。结论：油菜花粉玛咖咀嚼片制备工艺稳定可行，槲皮素和山奈酚含量测定方法准确可靠，可用于该咀嚼片的质量控制。

【关键词】

油菜花粉玛咖咀嚼片；HPLC；槲皮素；山奈酚

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2024）16-0031-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.16.zgmzmjyyzz202416008

Preparation of Rapeseed Pollen Maca Chewable Tablets and Determination of Quercetin and Caempferol Content

HUANG Xiaoqiang1ZHANG Yanwen1GUO Xiaona1RU Guohua1，2YANG Junjie1WANG Li1JIA An1*

1.Medical School， Huanghe Science & Technology College， Zhengzhou 450063， China;

2.College of Pharmacy，Henan University， Kaifeng 475004， China

Abstract：

Objective To establish the preparation process of rape pollen maca chewable tablets and the determination of quercetin and kaempferol contents.Methods Rape pollen maca chewable tablets were prepared by wet granulation process.Determination of quercetin and kaempferol in Rapeseed Pollen Maca Chewable Tablets by High Performance Liquid Chromatography （HPLC），the chromatographic column is an ODS-C18 column， and the mobile phase is methanol water for isocratic elution， with a volume flow rate of 1.0 mL/min， the column temperature is 35 ℃， the detection wavelength is 370 nm， and the injection amount is 5 μL.Results The preparation procedure of rapeseed pollen Maca chewable tablets was as follows： Rape pollen： Maca extract powder： filler ratio is 1∶1∶2， The ratio of microcrystalline cellulose to xylitol to lactose in the filler is 6∶4∶3.Wet granulation and tablet pressing were carried out.The obtained chewable tablets have a smooth surface， moderate sweetness， and stable and controllable quality.A method for the determination of quercetin and kaempferol was established.The linear ranges of quercetin and kaempferol were 2.29-45.83 μg/mL and 3.75-75 μg/mL， respectively， and the correlation coefficients were 0.9996 and 0.9992， respectively.The average recoveries of quercetin and kaempferol were 99.79% and 101.02%， respectively.Conclusion The preparation procedure of rapeseed pollen Maca chewable tablets is stable and feasible.The method for the determination of quercetin and kaempferol is accurate and reliable and can be used for the quality control of the chewable tablets.

Keywords：

Rape Pollen Maca Chewable Tablets; HPLC; Quercetin; Kaempferol

油菜花粉是我国最常见的蜂花粉之一，具有降血脂、抗前列腺增生、提高免疫力、改善记忆等功效［1-2］，目前临床上主要用于治疗慢性前列腺炎及前列腺增生等疾病［3-5］。玛咖素有“南美人参”的美誉［6-7］，其中玛咖酰胺、多糖、玛咖烯、芥子油苷、甾醇、类固醇等成分是玛咖的主要成分［8］，具有抗疲劳、抗衰老、调节内分泌系统、改善性功能、提高生育能力、抗前列腺增生等功效［9-11］，虽然两者均具有治疗前列腺相关疾病、提高免疫力和改善性功能等作用，但还没有关于油菜花粉与玛咖联合应用的报道。咀嚼片不仅具有实用方便、外观美观、口感好，而且药物溶出迅速、吸收快、生物利用度也高，深受消费者的喜爱。基于此，本研究首先利用药物制剂技术，以油菜花粉和玛咖为基础，制备油菜花粉玛咖咀嚼片；然后，利用HPLC技术测定槲皮素和山奈酚的含量，本研究可为该制剂的制备及其质量控制提供参考。

1仪器与材料

1.1仪器Agilent 1260 Infinity II液相色谱仪（美国安捷伦公司）；AL204型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；DZKW-4型水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；KQ‐250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2材料油菜花粉玛咖咀嚼片由实验室自制；槲皮素对照品（批号：B20527-20 mg，纯度≥98%）、山柰酚对照品（批号：B21126-20 mg，纯度≥98%）均购自上海源叶生物科技有限公司；色谱级磷酸（天津市科密欧化学试剂有限公司）；色谱级甲醇（德国默克公司）；水为超纯水；其他均为分析级试剂。

2方法与结果

2.1油菜花粉玛咖咀嚼片制备取玛咖原药材500 g，经粗粉后，加入10倍量蒸馏水，浸泡30 min后，加热回流2次，每次2 h，合并滤液，减压浓缩后，采用小型喷雾干燥机喷雾干燥，即为玛咖提取物粉末。油菜花粉玛咖咀嚼片处方中，油菜花粉采用全组分入药，处方配比为油菜花粉∶玛咖提取物粉末∶填充剂=1∶1∶2，填充剂为微晶纤维素∶木糖醇∶乳糖=6∶4∶3。采用湿法制粒制备片剂，以“握之成团，轻捏即散”为标准制备软材，然后制粒，并置于50 ℃烘箱中干燥、整粒，压制成片。

2.2色谱条件参考相关文献［12-15］并修改色谱条件。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（60∶40）；等度洗脱20 min；检测波长：370 nm；体积流量：1.0 mL/min；进样量：5 μL；柱温：35 ℃。

2.3溶液配制

2.3.1对照品溶液的制备精密称取适量对照品槲皮素和山奈酚，加入甲醇溶解制成质量浓度为45.83 μg/mL和75 μg/mL溶液，摇匀，备用。

2.3.2供试品溶液的制备精密称取油菜花粉玛咖咀嚼片粉末1 g，置于100 mL圆底烧瓶中，加入25 mL甲醇和5 mL 25%的盐酸溶液，称定重量，加热回流1 h，放冷，再次称重，并补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.4方法学考察

2.4.1系统适用性试验取混合对照品和供试品溶液，按照“2.1”色谱条件进样分析，记录色谱图，结果如图1。由图2可知，在该色谱条件下槲皮素和山奈酚的分离度均大于1.5，表明该方法系统适用性良好。

2.4.2线性关系考察取“2.2.1”项下混合对照品溶液，逐级稀释，槲皮素质量浓度分别为45.83 μg/mL、22.92 μg/mL、9.17 μg/mL、4.58 μg/mL、2.29 μg/mL，山奈酚质量浓度分别为75.00 μg/mL、37.50 μg/mL、15.00 μg/mL、7.50 μg/mL、3.75 μg/mL，按照“2.1”色谱条件依次进样分析，记录各色谱峰峰面积。以对照品质量浓度（μg/mL）为横坐标（X），峰面积（mAU）为纵坐标（Y），绘制线性回归方程，结果如图2所示，槲皮素和山奈酚的线性回归方程分别：Y=20.562X-6.853、Y=16.638X-10.411，r=0.9996、0.9992，表明槲皮素和山奈酚分别在2.29～45.83 μg/mL、3.75～75.00 μg/mL浓度范围内其浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.3精密度试验取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按照“2.1”色谱条件连续进样6次，每次进样5 μL，记录色谱峰面积，计算槲皮素和山奈酚色谱峰峰面积的RSD分别为1.66%、0.87%，表明该仪器的精密度良好。

2.4.4稳定性试验取“2.3.2”项下供试品溶液，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h在“2.1”色谱条件下进样分析，记录各色谱峰峰面积，计算槲皮素和山奈酚色谱峰峰面积RSD分别为0.89%、0.91%，表明供试品溶液在12 h内的稳定性良好。

2.4.5重复性试验取同一批油菜花粉玛咖咀嚼片粉末，6份，每份约1 g，精密称定，按“2.2.2”方法制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件进样分析，记录各色谱峰峰面积，计算结果显示，槲皮素和山奈酚的平均含量分别为0.1421 mg/g、0.5480 mg/g，RSD值分别为2.88%、2.47%，表明方法重复性良好。

2.4.6加样回收率试验取已知含量的油菜花粉玛咖咀嚼片粉末6份，每份约0.5 g，精密称定。分别精密加入等量的对照品，按照“2.2.2”方法制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件进样分析，记录各色谱峰峰面积，计算得出槲皮素和山奈酚的均回收率分别为98.97%、99.90%。结果见表1。

2.5样品的含量测定取3个批次油菜花粉玛咖咀嚼片样品粉末，按“2.3.2”方法制备供试品溶液，在“2.2”色谱条件进样分析，记录各色谱峰峰面积，计算含量，结果见表2。由表2可知，在油菜花粉玛咖咀嚼片中山奈酚的含量最高，含量为0.5510 mg/g，槲皮素的含量为0.1465 mg/g。

3讨论

3.1提取方法的选择本研究考察了超声波提取法和回流提取法2种不同的提取方式，结果发现热回流提取法供试品色谱峰较多，提取效果更好；在溶剂选择方面，考察了甲醇和25%盐酸甲醇2种溶液，结果发现25%盐酸甲醇作为提取溶剂时，槲皮素和山奈酚色谱峰面积更大，提取更加充分，其原因在于盐酸能够破坏油菜花粉细胞壁，促使细胞内的成分溶出，提取更加充分［16］。故本研究采用回流提取方式，以25%盐酸甲醇为提取溶剂。

3.2色谱条件的选择本研究考察了乙腈-水和甲醇-水两种流动相分别进行等度洗脱，结果发现当选择甲醇-水作为流动相时槲皮素和山奈酚色谱峰分离效果较好，满足分析要求；然后又考察了进样量，分别考察了5 μL、10 μL、15 μL 3种进样量，结果发现随着进样量的增大，色谱峰的峰面积也增大，但5 μL的进样量时色谱峰型更好，因此选择5 μL进样量。体积流量的选择上，考察了0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min 3种流速，结果发现流速为1.0 mL/min时，槲皮素和山奈酚的色谱峰分离度与峰型较好，故选择1.0 mL/min作为流动相的洗脱流速。

3.3指标成分的选择根据中药及其制剂分析中含量测定指标选择的原则，含量测定指标成分应确保药材及其制剂的安全性、有效性和专属性，研究首选有效成分作为含量测定指标成分。本研究，选择槲皮素和山奈酚作为测定指标成分，槲皮素是一种具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤和保护心血管等作用的天然黄酮类成分［17］，山奈酚也是一种天然的黄酮类成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎和抗抑郁等作用［18］。通过文献研究发现，槲皮素和山奈酚是油菜花粉的主要成分［12-15］，槲皮素也是玛咖的主要成分之一［15］。故选择槲皮素和山奈酚作为含量测定指标成分。

3.4检测波长的选择槲皮素和山奈酚的紫外最大吸收波长均在370 nm和265 nm附近，通过对比各色谱峰发现选择370 nm时，样品色谱峰杂峰较少，从而减少其他成分对检测成分的干扰，专属性更强。故选择370 nm处作为检测波长。

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（收稿日期：2023-11-22编辑：陶希睿）