腺样体肥大患儿腺样体组织中半胱氨酰白三烯受体1的表达及其影响因素

张冰 管仁政 金蓉 林荣军 王学海

［摘要］ 目的

分析半胱氨酰白三烯受体1（CysLTR1）在腺样体肥大（adenoid hypertrophy，AH）患儿腺样体组织中的表达特点，探究CysLTR1在AH形成中的作用机制及CysLTR1表达的影响因素。

方法 选取2020年10月1日—2021年10月1日在威海市立医院耳鼻咽喉科行腺样体切除术患儿71例，对其切除标本行CysLTR1免疫组化染色，根据染色结果分为CysLTR1高表达组及低表达组。收集两组患儿性别、年龄、腺样体肥大程度、有无变应性鼻炎、有无其他合并症（分泌性中耳炎、慢性鼻窦炎、呼吸睡眠暂停综合征）等资料并进行比较，通过多因素logistic回归分析影响AH患儿CysLTR1表达的危险因素。

结果 免疫组化染色结果显示，CysLTR1在71例AH患儿腺样体组织中均有表达，高表达组患儿的腺样体肥大程度、有无变应性鼻炎及有无其他合并症与低表达组相比差异有显著性（χ2=9.003～49.196，P＜0.05）。多因素logistic回归分析显示，重度腺样体肥大、变应性鼻炎以及有其他合并症均为影响AH患儿CysLTR1表达的独立危险因素（P＜0.05）。

结论

CysLTR1在AH患儿腺样体组织中表达与腺样体肥大程度、有无变应性鼻炎及其他合并症相关，且上述3指标为CysLTR1高表达的独立危险因素。

［关键词］ 鼻炎，变应性，季节性；增殖腺；肥大；受体，白三烯；免疫组织化学；因素分析，统计学

［中图分类号］ R766.3    ［文献标志码］ A

腺样体是感染性疾病的“警示灯”[1]，在人体液和细胞免疫中发挥重要的作用[2]。当腺样体过度增生时，可引起呼吸睡眠暂停综合征、分泌性中耳炎、阻塞性鼻窦炎等并发症[3]。引起腺样体肥大（adenoid hypertrophy，AH）的重要原因是反复的慢性炎症刺激，且AH的发生与变态反应性疾病密切相关[4]。因此早期诊断和治疗变态反应性疾病，有助于减少腺样体肥大的发生[5-6]。白三烯（LT）是参与变应性鼻炎、哮喘等气道炎症反应重要介质。在哮喘发病过程中，半胱氨酸白三烯受体1（CysLTR1）mRNA表达水平也明显升高[7]。研究发现AH所致打鼾儿童的外周血B、T细胞CysLTR呈较高表达[8]。陈荣等[9]研究也发现，特应性体质感染后咳嗽患儿的血清LT水平显著高于非特应性体质的患儿。手术是AH患儿首选治疗方式[10]，有中耳炎、鼻-鼻窦炎病史以及合并过敏性疾病的AH患儿手术以后复发率比较高[11-12]，因此积极治疗腺样体合并疾病及控制过敏性疾病发生也可减少腺样体肥大的术后复发率[13]。本研究探究AH患儿腺样体组织中CysLTR1表达特点，旨在为患儿的高效治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年10月1日—2021年10月1日于威海市立医院耳鼻咽喉科行腺样体切除术的患儿71例。患儿纳入标准：①通过鼻内镜检查确诊为AH，并符合手术指征，手术切除组织病理检查结果亦符合AH；②术前1个月内未行抗过敏药物治疗。排除标准：①支气管哮喘患儿；②患有特异反应性皮炎等其他严重系统性疾病患儿。

1.2 研究方法

1.2.1 患儿资料的收集 收集所有患儿的性别、年龄、AH程度、有无变应性鼻炎、有无其他合并症（包括呼吸睡眠暂停综合征、鼻窦炎、分泌性中耳炎）等一般资料及术后腺样体组织的病理切片。

1.2.2 试剂与器材 CysLTR1兔抗人多克隆抗体、生物素标记的羊抗兔IgG、辣根酶标记的链酶亲和素均购买于北京博奥森生物技术公司，SP免疫组化检测试剂盒（兔）购买于上海鼎杰生物科技有限公司，二氨基联苯胺/DAB染色试剂盒购买于上海雅吉生物科技公司，BMIX生物组织包埋机、冷冻台机购买于日本樱花公司，罗氏HE600HE染色机以及BenchMark ULTRA免疫组化仪均购买于美国罗氏公司。

1.2.3 免疫组化染色检测AH患儿腺样体组织中CysLTR1表达情况 将腺样体组织切片通过脱蜡、复水处理，以0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液冲洗后，以30 g/L过氧化氢溶液阻断内源性过氧化氢酶，用含体积分数0.10的山羊血清室温湿盒封闭20 min，并滴加浓度1∶200的CysLTR1兔抗人多克隆抗体4 ℃下孵育过夜。然后使用生物素标记的羊抗兔IgG、辣根酶标记的链霉亲和素按序各孵育20 min。滴加DAB显色，然后行苏木素复染、封片，于光学显微镜下观察。阴性对照采用PBS代替一抗，其他步骤相同。在高倍镜下于腺样体组织的免疫组化切片上随机选取上皮及生发中心以外的5个视野，采用Image ProPlus 6.0软件计算阳性细胞数以及高倍镜下视野总面积，CysLTR1表达情况以细胞阳性率表示，细胞阳性率=阳性细胞数/mm2，阳性率＜50%为低表达，以阳性率＞50%为高表达[14]。根据染色结果分为CysLTR1高表达组与低表达组。

1.3 统计学方法

采用SPSS 25.0软件进行统计学分析。计数资料以例（率）表示，组间比较采用卡方检验，卡方检验有统计学意义的指标采用多因素logistic回归进行危险因素分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结  果

2.1 患儿腺样体组织中CysLTR1表达情况

71例AH患儿中，男54例，女17例；年龄1～14岁，平均（5.45±3.25）岁；其中CysLTR1高表达组35例，低表达组36例。对所有患儿的腺样体组织切片及阴性对照切片进行免疫组化染色，其中阴性对照切片未见染色（图1A），CysLTR1阳性表达切片的细胞膜和细胞浆均呈现棕黄色染色（图1B）。

2.2 两组患儿腺样体组织CysLTR1表达情况比较

高表达组患儿的AH程度、有无变应性鼻炎及有无其他合并症与低表达组相比有显著差异（χ2=9.003～49.196，P＜0.05），而性别、年龄与低表达组比较无显著差异（P＞0.05）。见表1。

2.3 影响AH患儿腺样体组织CysLTR1高表达的多因素logistic回归分析

对两组中差异显著指标进行多因素logistic回归分析，以CysLTR1在腺样体组织的阳性率

表达作为因变量，将高阳性率表达赋值为1，而将低阳性率表达赋值为0，以AH程度、有无变应性鼻炎、有无其他合并症三因素作为自变量，其结果显示重度AH、有变应性鼻炎、有其他合并症均为AH患儿腺样体组织中CysLTR1高表达的独立危险因素（P＜0.05）。见表2。

3 讨  论

组胺、LT等炎性分子是参与气道炎症反应的重要介质[15]。研究发现重度变应性鼻炎患者鼻气道阻力在LTD4鼻激发试验后显著升高[16]。半胱氨酸白三烯（CysLTs）被认为是病毒感染激发哮喘发作的关键介质，LT受体拮抗剂孟鲁司特能明显减轻哮喘所致的嗜酸性粒细胞浸润，并降低血清白细胞介素-13（IL-13）、IL-9和趋化因子3水平，从而减轻气道高反应性[17]。云靖婷等[18]研究显示，通过下调CysLTR1 mRNA的表达及干预CysLTR1介导的哮喘炎症通路，可达到防治哮喘的目的。本研究中CysLTR1高表达组患儿的性别、年龄与低表达组无显著差异，而随着AH程度增高，CysLTR1表达水平显著提高。这与既往研究中腺样体组织及外周血清中LT（LTB4、LTC4）水平的高低与AH程度呈正相关的结论一致[3]，表明CysLTs参与了AH的形成。而CysLTs可能是嗜酸性粒细胞-嗜碱性粒细胞克隆单位形成的促进因子，还能引起鼻黏膜上皮内嗜酸性粒细胞浸润及腺体分泌亢进[19]，故推测使用CysLTR1阻滞剂可能减少嗜酸性粒细胞浸润，缓解炎症反应的发生，进而减轻AH程度。

变应性鼻炎发生时，其鼻黏膜炎症反应产生的分泌物及变应性鼻炎后期鼻后滴漏综合征产生的分泌物反复刺激腺样体，导致AH[20]。研究结果显示CysLTR1在人鼻黏膜多种细胞（包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等）中呈高表达[21]。CysLTs合成蛋白及CysLTR在季节性变应性鼻炎患者的鼻腔灌洗液中也呈现出高表达[22]。上述结果与本研究合并变应性鼻炎的AH患儿腺样体组织中CysLTR1高表达的结果相一致，印证了变应性鼻炎促进AH发生的理论，因此在治疗合并变应性鼻炎的AH患儿时，可首选CysLTR1阻滞剂。

本研究71例患儿中49例伴随其他合并症，其中包括呼吸睡眠暂停综合征[23]、慢性鼻窦炎、分泌性中耳炎等。研究显示上述疾病的发生发展与AH以及CysLTs水平相关[24-27]。本研究亦证实伴有其他合并症的AH患儿CysLTR1的表达水平更高。有研究结果显示，孟鲁司特治疗可使76%的呼吸睡眠暂停综合征患儿腺样体缩小，改善睡眠不适、打鼾以及张口呼吸等症状[28]。同时孟鲁司特还可以抑制CysLTs信号转导，降低细胞因子以及黏蛋白的表达，进而促进伴有鼻息肉的慢性鼻炎窦炎患者的恢复[29-30]。当AH合并分泌性中耳炎时，往往采取综合治疗的方式。

CysLTR1在AH患儿腺样体组织中的表达与重度AH、变应性鼻炎及有其他合并症相关，这与既往研究结果基本一致[31-32]，说明CysLTR1是参与AH形成的重要因素，研究CysLTR1的表达情况，对研究AH的形成机制有重要意义。本研究对上述因素进行了多因素logistic回归分析，发现这3个因素是CysLTR1在AH患儿腺样体组织中高表达的独立危险因素。因此，临床上对AH程度高、有变应性鼻炎及有其他合并症的AH患儿，或可首选CysLTR1阻滞剂作为非手术治疗的一线药物。本研究也存在一定局限性，比如样本量不足，病例对照研究的证据等级较低等，因此还需后续进行更深入研究以进一步探究和验证以上结论。

伦理批准和知情同意：本研究涉及的所有试验均已通过威海市立医院伦理委员会的审核批准（文件号2023019）。所有试验过程均遵照《临床试验质量管理规范》 的条例进行。受试对象或其亲属已经签署知情同意书。

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