鸡传染性贫血（CIA）活疫苗免疫肛拭子排毒规律

李玉燕 张秀明 彭晓艳 曲秀娟 来庆梅 郭龙宗 张鹏

摘 要：为调查鸡传染性贫血（CIA）活疫苗免疫后的排毒规律，本研究在隔离器中免疫CIAV活疫苗，免疫后每隔一周采集肛拭子，持续采样至第7周，检测CIAV疫苗的排毒阳性率。结果显示：CIAV疫苗免疫后第10天排毒率为50%，免疫后第2周排毒率达到高峰为80%，免疫后第6周排毒率下降至27.27%，第7周不排毒，本研究为CIAV感染的监测提供了数据支持。

关键词：CIAV疫苗；肛拭子；排毒

中图分类号：S858.31文献标识码：B文章编号：1673-1085（2024）05-0025-03

基金项目：山东省重点研发计划（2021CXGC010805）

第一作者：李玉燕（1982—），女，硕士，高级兽医师，主要从事规模化种鸡场禽病监测防控研究，E-mail：lyuyan918@163.com；

并列第一作者：张秀明（1981—），男，汉族，硕士，兽医师，主要从事规模化种鸡场饲养及蛋鸡育种工作，E-mail：xmz1207@163.com

*通信作者：郭龙宗（1981—），男，硕士，高级兽医师，主要从事规模化种鸡场实验室管理和主要疫病防控净化，E-mail：guolongzong1981@163.com

*并列通信作者：张鹏（1980—），女，本科，兽医师，主要从事规模化种鸡场禽病监测防控研究，E-mail：zhangpeng80815@163.com

鸡传染性贫血病毒（chicken infectious anemia virus，CIAV），2015年划分于圆环病毒科环状病毒属，不含囊膜，基因组为单股负链环状DNA，基因组全长2 298 bp或2 319 bp，有3个开放阅读框，编码3种病毒蛋白（VPl、VP2和VP3），VP1是主要的结构蛋白，是变异率最大的蛋白；与VP2共同作用诱导产生中和抗体；VP3又称为凋亡素，会诱导鸡胸腺细胞和原始造血细胞凋亡，导致严重贫血、免疫抑制等症状[1-2] ，临床常引起2～4周龄雏鸡或育成鸡群发生传染性贫血综合征（CIA）。CIAV在鸡群中可水平传播和垂直传播，目前该病在规模化养殖场中感染压力较大，给养禽业造成严重的经济损失。目前尚无治疗CIAV的有效药物，临床推荐以活苗免疫预防为主，配合良好的生物安全等综合防控措施。本试验对隔离器中饲养鸡群CIAV活苗免疫后的排毒规律进行研究，可为临床CIAV的活苗免疫防控提供参考依据。

1  材料与方法

1.1  试验材料

1.1.1  试验对象和免疫程序   本试验所选试验鸡来自胶东某养殖集团祖代哈伯德肉种鸡场5#栋舍，该鸡舍存栏鸡数为9800只，选取30只放入隔离器中进行试验。

免疫程序：该鸡群于8周龄免疫CIAV活苗，免疫厂家为MSD，批号为02440066，免疫途徑：刺种。

1.1.2  试验试剂   2×Taq PCR MasterMix购自诺唯赞，生产批号为7E321B9；病毒DNA/RNA磁珠法机器提取试剂盒购自青岛英赛特生物科技有限公司，生产批号为2022305010；GelStain、50×TAE缓冲液、琼脂糖购自北京全式金生物技术有限公司。

1.1.3  试验仪器  全自动核酸提取纯化仪（青岛英赛特生物科技有限公司）、普通PCR基因扩增仪和凝胶成像系统（美国伯乐公司）；SPF鸡隔离器（苏州市冯氏实验动物设备有限公司）。

1.2  试验方法

1.2.1   样品采集  在CIAV疫苗免疫后1周、10日龄、2、3、4、5、6、7周采集肛拭子，采集30份肛拭子检测CIAV病原。肛拭子采集使用一次性无菌植绒棉签在鸡只肛门内旋转3圈，蘸取分泌物后放入1.5 mL无菌离心管中，剪去多余的部分、盖紧离心管的盖子并做好标记、冷藏保存。

1.2.2  样品前处理  肛拭子样品采用“3合一”混合样品检测方法，每个含肛拭子的离心管中加入450 L PBS，浸泡1 h左右后再进行机器提取加样。

1.2.3  CIAV-PCR检测  根据任志浩发表的文献引物[2]，由上海生工生物有限公司合成，上游序列为：GCAGGGGCAAGTAATTTCAA，下游序列为：GCCACACAGCGATAGAGTGA，扩增目的片段大小为164bp；PCR反应程序：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s， 72 ℃ 10 min，35个循环。

2  结果

2.1  CIAV病原检测结果

部分肛拭子样品PCR扩增的基因片段大小为164 bp，与预期的目的片段大小一致，说明CIAV检测结果呈阳性。结果见图1所示。

2.2  CIAV疫苗免疫后各周龄肛拭子排毒阳性率

CIAV疫苗免疫后第10天肛拭子开始排毒，阳性率为50%；免疫后2周排毒率最高，肛拭子CIAV阳性率达80%；免疫后3周开始下降，至第5周、第6周排毒率下降，肛拭子CIAV阳性率分别为10%和20%；免疫后第7周不再排毒，结果见表1。

3  讨论

CIAV既可以水平传播，也可垂直传播；种鸡在产蛋期感染后几乎无临床症状，受精率和孵化率也不会受影响；但若产蛋期感染，则可垂直传播到种蛋，导致后代雏鸡感染病毒[3]。CIAV感染会引起雏鸡全身淋巴组织萎缩，尤其是骨髓造血组织和胸腺等淋巴组织，进而导致雏鸡发生免疫抑制[4]，同时会引起继发感染，导致疫苗免疫失败。目前CIAV 防控主要以疫苗预防为主，通过疫苗接种使种鸡产生抗体，从而给子代提供高水平的母源抗体[5]。CIAV的疫苗主要为弱毒活疫苗，为了与野毒感染区分，需要摸清活疫苗免疫后的排毒规律。本研究结果显示：CIAV活疫苗免疫7周后不再排毒，临床规模化养殖场大群可采集肛拭子评估CIAV的野毒感染情况，免疫后超过7周采集的肛拭子样品若检出阳性，再结合现场鸡群表现，应判定为野毒感染群。

參考文献：

[1]  宋丽霞，包小萌，范磊，等.鸡传染性贫血病研究进展[J].山东畜牧兽医，2016，37（ 12）：82-84.

[2]  任志浩，房立春，赵鹏，等.鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用[J].畜牧兽医学报，2016，47（7）：1459-1464.

[3]  颜静蕊，刘珂飞.鸡传染性贫血病的诊断与防控[C]/ /第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞环杯”新思想、新方法、新观点论坛论文集，2014： 211- 213.

[4]  陈宗艳，徐大为，程安春，等. 鸡传染性贫血病毒引发的免疫抑制[J]. 养禽与禽病防治，2006（4）：2-5.

[5]  蔺文成，张新珩，谢青梅，等.4株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及其遗传进化分析[J]. 中国预防兽医学报，2016，38（9）：695-699.

The Detoxification Dattern of Anal Swabs Immunized with Chicken Infectious Anemia （CIAV） Vaccine

Li Yuyan，Zhang Xiuming ，Peng Xiaoyan ，Qu Xiujuan，Lai Qingmei，Guo Longzong， Zhang Peng

（Shandong Yisheng Animal and Poultry Breeding Company，Yantai  265508，China）

Abstract：  In order to investigate the detoxification pattern after immunization with the chicken infectious anemia （CIAV） live vaccine， this study immunized the CIAV live vaccine in a isolator. After immunization， anal swabs were collected continuously every week， and continued sampling until the 7th week to test the positive detoxification rate of the CIAV vaccine. The results showed that the detoxification rate of CIAV vaccine was 50% on the 10th day after immunization， reaching a peak of 80% in the 2nd week after immunization. The detoxification rate decreased to 27.27% in the 6th week after immunization， and did not detoxify in the 7th week. This study provides data support for monitoring CIAV infection.

Keywords：  CIAV vaccine; Anal swab; Detoxification