细菌鉴定药敏分析系统在院内获得性肺炎患者下呼吸道感染细菌分离鉴定中的应用

徐普辉 李细琴 黄志杰

1 抚州市临川区第一人民医院重症医学科 （江西 抚州 344000）

2 临川区连城乡卫生院检验科 （江西 抚州 344000）

内容提要： 目的：应用细菌鉴定药敏分析系统明确某医院院内获得性肺炎下呼吸道感染患者的病原菌分布，验证病原菌的耐药性，在现有常规抗菌药物情况下，为临床前期治疗合理使用抗菌药物提供参考。方法：将某医院2020年1月～2022年12月院内患者中肺炎合并下呼吸道感染患者135例作为研究对象，首先收集患有此病患者的痰液标本，之后再对标本进行普通培养及药敏试验分析。流程上需要对采集的患者痰液样本进行病原菌的分离，并且及时地观测病原菌的分布状况，之后则对从患者痰液内检测到的病原菌进行耐药性测试。结果：在收集到的135例患者的135份痰样本中共分离检测出了288株病原菌，有革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌以及真菌，其中数目最多的病原菌就是革兰阴性杆菌，共鉴定出231株，占80.21%，革兰阳性球菌位列第二，共有31株病原菌，占10.76%，真菌占比最少。在革兰阴性杆菌类群中，分布最为广泛的是肺炎克雷伯菌，共分离鉴定出98株，占42.42%；而在革兰阳性球菌中，所占比例最多的病原菌是金黄色葡萄球菌，共鉴定出17株，占54.84%；在本试验中进行的病原菌耐药性试验中，革兰阴性杆菌中的铜绿假单胞菌对本次试验中选取的抗菌药物的耐药性比较强，对临床常用药复方新诺明的耐药率为80.85%；革兰阳性球菌中数量最多的金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药性表现得也比较高，为82.35%。结论：应用细菌鉴定药敏分析系统可发现在本院院内获得性肺炎下呼吸道感染常见的病原菌主要是革兰阴性杆菌，细菌对抗菌药物的耐药性比较高，在临床上对患者进行治疗时，需要考虑到病原菌的耐药性，合理选择现有常规抗菌药物，提高患者的治疗疗效。

医院获得性肺炎的发生率在15.6%～38.9%[1]。如果肺炎患者出现下呼吸道感染，需要及时地对患者开展抗感染治疗，否则会危害患者的健康[2]。随着医药行业的发展，各种抗菌药物的滥用已经使病原菌耐药性问题不断严重，而医院内的感染正在逐渐增多，增加了医生在临床合理选择抗菌药物的难度[3]。及时监测医院获得性肺炎患者体内的病原菌分布以及其耐药性情况，对指导临床医生前期合理使用抗菌药物具有很重要的作用。康泰生物细菌鉴定药敏分析系统是根据在细菌代谢作用下物质产生pH变化，能释放色源产生颜色变化或经加入显色剂产生颜色变化，将反应结果按照说明书进行判读，通过鉴定软件检索得到细菌鉴定结果[4]。本文对2020年1月～2022年12月于某医院院内肺炎并伴有下呼吸道感染的患者应用细菌鉴定药敏分析系统，分析患者痰液标本中病原菌分布和耐药性情况，为临床治疗提供依据。

1.资料与方法

1.1 临床资料

收集2020年1月～2022年12月在某医院院内获得性肺炎下呼吸道感染的患者135例作为研究对象，收集此类患者的痰液标本进行鉴定分析，患者中男性72例，女性63例；患者年龄4～81岁，平均（44.19±5.92）岁；患者病程1～6d，平均（8.48±1.39）d；左肺感染患者21例，右肺感染患者23例，双肺感染患者91例。

纳入标准：①患者经过临床医生诊断患有肺炎，同时伴随有下呼吸道感染症状；②患者以及其家属均同意采集其痰液标本；③患者没有其他方面的感染性疾病或者精神类疾病。排除标准：①不能配合此次研究；②中途退出者。

1.2 方法

将收集到患者的痰液样本及时接种于血平板、巧克力平板及麦康凯平板中，将温箱温度调至（35±2）°C进行18～24h孵育，采集到的痰液样本先进行病原菌的培养，之后再对菌株进行分离鉴定。本实验采用温州康泰公司细菌生化板及鉴定系统及配套试剂对患者的痰液病原菌进行细菌鉴定。将本研究菌株接种于血平板上，培养后根据革兰染色和氧化酶及触酶等结果来选择检测板，挑取数个纯菌落，将其放置于无菌蒸馏水中制成2或4麦氏浓度的菌悬液。在细菌鉴定板鉴定孔中加入100μL菌悬液，以石蜡油封闭后，再培养，得到的反应结果按照说明书进行判读，通过鉴定软件检索得到细菌鉴定结果。本次药敏试验采用的是温州康泰公司药敏纸片，使用纸片扩散法。首先将肉汤菌液接种在M-H平板内，之后在肉汤菌液上面贴药敏纸片，放置在恒温箱中孵育16～24h，温箱的温度保持在（35±2）°C，测量出病原菌抑菌圈的直径，从而可以计算出细菌的敏感程度和耐药性。

1.3 观察指标

观察135例患者痰液标本的病原菌分布情况，统计检测到的病原菌株数，并对其进行整理分类，对比不同的病原菌的耐药性。

1.4 统计学分析

以SPSS 22.0统计学软件进行数据处理统计分析，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料以%表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 患者下呼吸道病原菌分布

本次研究经过对获得性肺炎患者的痰液样本进行鉴定，一共检出288株病原菌，类型分别为革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌以及真菌，革兰阴性杆菌所占比例为80.21%，革兰阳性球菌为10.76%，真菌占比为9.03%。在革兰阴性杆菌中，分布最广的是肺炎克雷伯菌，所占比例为42.42%；在革兰阳性球菌中占比最大的是金黄色葡萄球菌，分布比例为54.84%；真菌中白念球菌分布最广泛，所占比例为53.85%，见表1。

表1.下呼吸道感染病原菌分布

2.2 病原菌的耐药性分析

耐药性试验中结果表明，在此次获得性肺炎患者痰液中鉴定出来的病原菌菌株对常见的抗菌药物都存在着一些或多或少的耐药性。在革兰阴性杆菌株种类中，铜绿假单胞菌对本次试验中使用的抗菌药物都存在着一定的耐药性，其中它对复方新诺明的耐药性为80.85%；肺炎克伯菌对头孢噻肟的耐药性为63.27%，见表2。在革兰阳性球菌病原菌种类中，金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药性为82.35%；实验结果中肺炎链球菌在本次试验中，对青霉素的耐药性达到100%，见表3。

表2.革兰阴性杆菌耐药性统计(n/%)

表3.革兰阳性杆菌耐药性统计(n/%)

3.讨论

近年来，临床中存在着抗菌药过度使用甚至滥用的现象，这种问题发展加剧造成了临床中许多病原菌对药物产生耐药性，许多抗生素药物对患者的治疗效果逐渐变低[5]。有研究表明，尽管全国常见细菌的耐药趋势基本一致，但是在不同时期、不同的地区或者不同等级的医院，病原菌的耐药性都会存在一定的差异，此次研究选择某医院院内的肺炎下呼吸道感染患者进行研究在于了解本地区的细菌耐药风险[6]。目前，临床对细菌鉴定和药敏分析的要求不断提高，各种细菌鉴定方法及技术也得到了发展，传统手工操作受人的主观影响较大，过程复杂，技术水平和经验的不同会影响鉴定结果。近年来，随着临床微生物检测技术不断发展，国内外逐渐出现各种商品化细菌鉴定系统，可以缩短鉴定时间，具有简单化、规范化、自动化和智能化的特点[7]。康泰公司细菌鉴定药敏分析系统是借鉴国外微生物检验分析系统基础上结合国内实际情况，自主研发生产，采用中文菜单对话，用户界面友好，该系统4～6h快速试条鉴定结合18～24h药敏试验。通过细菌生化反应和耐药性结果人工判读，输入微机自动处理，系统处理能力强大，并按照不同的数据类型进行统计，强大的细菌数据库国际最新细菌分类方案保证细菌编码鉴定结果准确性，具有科学的药敏专家分析系统，不仅能全面报告定性、定量完成药敏试验分析，而且可以MRS、HLAR、PRSP、VRE、ESBIS并报告合理的用药方案，可以自动打印完美的实验报告。全套系统具有结果准确、可靠，流程标准化、操作简易、快速检测的优点，并且与进口仪器试剂相比更为经济高效。

本次试验的结果表明，在本院院内获得性肺炎下呼吸道感染的患者，其痰液内存在3种病原菌类型，分别为革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌和真菌。而革兰阴性杆菌分布最广，它在鉴定到的全部病原菌占80.21%，革兰阳性球菌排在第二位，占到总病原菌的10.25%，而真菌的占比为9.03%。本次研究的结果与熊雪芳等[8]研究的结果基本保持一致，更加验证了本次试验的准确性。

本次研究的病原菌耐药性试验结果表明，基本上所有的病原菌都对抗菌药表现出了耐药性。在本次实验中，对抗菌剂药物表现的耐药性最高的就是肺炎链球菌对青霉素，可能是因为青霉素是生活中最常用的一类抗菌药物，与临床使用时间长久有关；其次是金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药，铜绿假单胞杆菌对复方新诺明的耐药率高达80.85%；在临床合理选用抗菌药物上，临床医生应当根据患者的实际情况考虑是否可以对患者采用多种抗菌药联合用药，联合用药能否达到更好的治疗效果。

综上所述，细菌鉴定药敏分析软件操作简单，成本较低，适合基层医院。通过细菌鉴定药敏分析系统可以明确本院院内获得性肺炎下呼吸道感染患者的病原菌分布，验证病原菌的耐药性，提醒在进行临床治疗的过程中，医院应该加强对患者的耐药监测，确保临床抗生素用药的合理性，提高对患者的治疗效率。