外周血液中脂筏标记蛋白表达水平与重性抑郁障碍全病程相关性的研究

陈晓昕 王 巍 纪家武 张清如

1.福建省福州神经精神病防治院精神三科，福建福州 350007；2.福建省福州神经精神病防治院儿童老年科，福建福州 350007；3.福建省福州神经精神病防治院院长办公室，福建福州 350007；4.福建省福州神经精神病防治院精神二科，福建福州 350007

重性抑郁障碍（major depressive disorder，MDD）以情绪或心境低落为主要表现，患者可能伴有不同程度的认知和行为改变或幻觉、妄想等精神病性症状，但不能归因于某种生理效应或其他疾病[1]。生物标志物是一种客观可测量的生物学特征，可与一种或多种疾病相联系。一项新的研究集中在一种快速、客观的方法来诊断抑郁症和测量抗抑郁药物对个体的有效性，这一发现与脂筏中一种关键蛋白的捕获有关，这种蛋白质通常发生在抑郁症患者中[2]。脂筏标记蛋白（lipid rafts marker protein flotillin，FLOT）1是细胞膜上一类高度保守的FLOT[3]。本研究选取100例MDD患者为试验组，在MDD的不同时期（急性期、巩固期、稳定期）分别采取患者的外周血样本检测FLOT1的表达水平，并以汉密顿抑郁量表-17（Hamilton depression scale-17，HAMD-17）评估患者MDD的程度，寻找FLOT1表达水平与MDD全病程之间的关联，并选取50名健康体检者为对照组。检验经过规范化的抗抑郁治疗过程中（急性期、巩固期、稳定期）FLOT1表达水平的变化，并探讨MDD全病程中FLOT1表达水平变化规律。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取福建省福州神经精神病防治院（本院）2022年9月至2023年8月收治的100例MDD患者为试验组，其中男42例，女58例，平均年龄（38.26±9.52）岁，病程1.3个月至20年，平均（3.24±1.05）年。以同期50名健康体检者为对照组，男20例，女30例，平均年龄（37.98±9.24）岁。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05），具有可比性。所有患者及家属均知情同意本研究，且本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 诊断标准

将美国精神疾病协会的《精神障碍诊断与统计手册》第五版（diagnostic and statistical manual of mental disorders-5，DSM-5）作为诊断标准[4]：MDD患者必须在两周内持续出现至少以下5种症状：①情绪抑郁；②失去兴趣或愉悦；③明显的体重变化；④失眠；⑤精神运动性激动或迟钝；⑥低能量或乏力；⑦毫无价值的感觉；⑧思维和注意力的困难；⑨反复想到死亡。

1.3 纳入及排除标准

纳入标准：试验组患者均符合DSM-5中关于MDD的诊断标准；试验前所有患者均未使用抗抑郁药或停止使用抑郁药≥8周；HAMD-17评分≥24分。

排除标准：MDD外的DSM-5轴Ⅰ诊断；存在重大躯体疾病（神经系统疾病、糖尿病等）；妊娠期或哺乳期妇女。

1.4 方法

根据患者治疗全病程分为急性期、巩固期、稳定期3个时间段，分别采取不同时期（急性期、巩固期、稳定期）MDD患者及对照组的外周血样本，采用实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）法测定外周血单核细胞FLOT1表达水平。

使用乙二胺四乙酸抗凝管分别采集试验组急性期、巩固期、稳定期及对照组全血各5 ml，并在2 h内处理。qRT-PCR用TaqMan MicroRNA反转录试剂盒从外周血细胞中提取RNA，并逆转录成cDNA。mRNA生成cDNA时，RNA序列充当逆转录酶的模板。得到的单链DNA然后用作PCR的模板。使用qRT-PCR技术，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至合成新的DNA，重复，即可使目的DNA片段得以扩增，用以检测FLOT1的表达水平。

1.5 观察指标及评价标准

检验规范化的抗抑郁治疗过程中（急性期、巩固期、稳定期）FLOT1表达水平的变化，并寻求在MDD全病程中FLOT1表达水平变化规律。观察FLOT1表达水平是否能作为MDD发病的标志物；FLOT1表达水平与MDD全病程的相关性，以及是否能起到预测MDD复发与难治性MDD的作用。

采用HAMD-17评分量表对不同时期试验组的抑郁情绪进行评估，得分越低代表病情越轻。

分析FLOT1表达水平变化与生活事件（主要为负性事件）的相关性，引入生活事件量表（life event scale，LES），参照张明园等[5]文献。负性事件刺激量等于全部坏事刺激量之和，生活事件应激项目内容共48条，包括3个方面（家庭生活28条、工作学习13条、社交及其他7条），采用0～4分五级评分，生活事件应激总分越高表示承受的精神压力越大。

1.6 统计学处理

使用SPSS 26.0统计学软件进行数据处理，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，计量资料用均数±标准差（）表示，两组间比较采用t检验，三组间比较采用Mann-WhitneyU检验，相关性采用Spearman分析，P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 试验组治疗前后FLOT1表达水平比较

与治疗前[（3.04±0.42）2-△△Ct]相比，试验组治疗后的FLOT1 mRNA相对表达量[（1.56±0.35）2-△△Ct]明显下降，差异有统计学意义（t=9.015，P=0.000）。

2.2 试验组不同时期及对照组外周血的FLOT1 mRNA相对表达量比较

与对照组比较，试验组FLOT1 mRNA相对表达量明显升高（t=8.294，P=0.003）。对于试验组，急性期的FLOT1 mRNA相对表达量明显高于巩固期与稳定期，差异有统计学意义（F=10.467，P=0.000）；巩固期与稳定期FLOT1 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）。见表1。

表1 试验组不同时期及对照组外周血的FLOT1 mRNA相对表达量比较（2-△△Ct，）

表1 试验组不同时期及对照组外周血的FLOT1 mRNA相对表达量比较（2-△△Ct，）

注 FLOT1：脂筏标记蛋白1

组别nFLOT1 mRNA试验组1002.49±0.45试验组急性期1003.12±0.47试验组巩固期1001.54±0.32试验组稳定期1001.52±0.29对照组500.91±0.08 t试验组与对照组比较值8.294 P试验组与对照组比较值0.003 t试验组急性期与巩固期比较值9.673 P试验组急性期与巩固期比较值0.000 t试验组急性期与稳定期比较值9.803 P试验组急性期与稳定期比较值0.000 t试验组巩固期与稳定期比较值1.075 P试验组巩固期与稳定期比较值0.682

2.3 试验组不同时期的HAMD评分比较

试验组患者急性期、巩固期、稳定期的HAMD评分比较，差异有统计学意义（F=18.592，P=0.000）。与稳定期、巩固期比较，急性期HAMD评分升高，差异有统计学意义（P＜ 0.05）；稳定期与巩固期比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）。见表2。

表2 试验组不同时期的HAMD评分比较（分，）

表2 试验组不同时期的HAMD评分比较（分，）

注 HAMD-17：汉密顿抑郁量表-17

时期nHAMD-17评分急性期10040.29±4.92巩固期10020.36±3.05稳定期10018.58±2.75 t急性期与巩固期比较值12.385 P急性期与巩固期比较值0.000 t急性期与稳定期比较值12.971 P急性期与稳定期比较值0.000 t巩固期与稳定期比较值1.843 P巩固期与稳定期比较值0.512

2.4 两组负性事件刺激量及生活事件应激总分比较

试验组负性事件刺激量、生活事件应激总分均高于对照组，差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表3。

表3 两组负性事件刺激量及生活事件应激总分比较（分，）

表3 两组负性事件刺激量及生活事件应激总分比较（分，）

组别n负性事件刺激量生活事件应激总分试验组100172.24±24.25180.35±35.64对照组5010.31±3.1214.64±4.31 t值7.29310.264 P值0.0080.000

2.5 FLOT1表达水平与MDD全病程、生活事件应激总分的相关性分析

Spearman分析结果显示，FLOT1 mRNA相对表达量与MDD患者急性期、巩固期、稳定期的HAMD-17评分呈正相关（P＜ 0.05），急性期FLOT1 mRNA相对表达量偏高，且与MDD患者的HAMD-17评分呈正相关（P＜ 0.05）。FLOT1 mRNA相对表达量与负性事件刺激量、生活事件应激总分呈正相关，MDD患者FLOT1 mRNA相对表达量增加，负性事件刺激量及生活事件应激总分也相应升高（P＜ 0.05）。见表4。

表4 FLOT1表达水平与MDD全病程的相关性分析

3 讨论

MDD是一种常见的精神障碍，病因复杂。作为最普遍的精神障碍，MDD是造成全球残疾类疾病的主要原因，也是造成全球疾病负担的主要因素[6-7]。MDD的病因仍然未知，并且仍无法准确预测MDD的发病风险以及疗效，国内鲜有关于MDD治疗效果和复发风险可靠的、客观的生物学标志物的研究[8-9]。MDD一般包括急性期、巩固期、稳定期3个阶段。急性期的抑郁症会出现较明显的抑郁倾向，治疗周期一般为2～3个月，需要在这一时间内尽快控制抑郁症的症状[10]。巩固期可能维持4～9个月，受患者的病情程度影响，期间内患者的病情不稳定，容易复发。应保持急性期的治疗方案，并根据患者的表现及时调整用药和药量。稳定期前规范的治疗可以降低复发率，一般需要2～3年[11-12]。此时如果去除诱发疾病的原因，可以在医生指导下缓慢减药，甚至停药。一旦发现有急性期症状应该遵照恢复治疗。

FLOT广泛存在于体内不同的组织和细胞，由FLOT1和FLOT2组成[13]。FLOT1是FLOT主要组成部分，其编码基因位于染色体6p21.3区段，基因全长15 kb，含13个外显子和12个内含子，编码427个氨基酸组成分子质量为48 kd的蛋白质。近来研究发现，FLOT1表达的增高与多种肿瘤的发生、发展密切相关[14]。现有研究[15]表明FLOT1在不同恶性肿瘤的发生发展中发挥的作用不同，现有研究多是证明FLOT1在肿瘤细胞或组织中表达水平的变化，但并未证明FLOT1是否能作为有效的生物标志物。本研究结果显示，与对照组比较，试验组FLOT1 mRNA相对表达量明显升高；对于试验组，急性期的FLOT1 mRNA相对表达量明显高于巩固期与稳定期；Spearman分析结果显示，FLOT1 mRNA相对表达量与MDD患者的急性期、巩固期、稳定期呈正相关，急性期的FLOT1 mRNA相对表达量偏高，且与MDD患者的HAMD-17评分呈正相关。因此，外周血液中FLOT1表达水平与MDD全病程有相关性，可能是MDD发病的一种生物学标志物。但由于本研究时间限制，对稳定期的MDD患者观察的参数还不够严谨，需在后期研究中加长研究时间，以期得到更有说服力的临床支撑数据。