染发剂二羟吲哚毒理学验证实验与分析

李忠军　徐建人　李镇军　胡烨敏　樊丽妃　李奇　焦红

二羟吲哚合成应用在国外已有30 多年历史。国内外多年研究发现，二羟吲哚有天然黑色染发作用，还具有抗菌、清除自由基和抗紫外辐射等功效。SCCP 早在18 年前就公布了二羟吲哚的染发剂安全性评价结果和使用推荐浓度。本文通过对国产二羟吲哚进行相关毒理学项目的重复验证，将实验结果同国际实验室相应项目的结果进行比较，为中国化妆品新原料的批准提供科学依据。根据中国《化妆品新原料申报与审评指南》规定，本实验采用《化妆品技术规范2015 版》中动物急性经口和经皮毒性、皮肤和眼刺激性/ 腐蚀性、皮肤变态反应性、皮肤光毒性、皮肤光变态反应性、基因突变、染色体畸变和90 天经皮染毒实验方法，进行相关毒理学实验，对结果进行比较评价。实验结果显示，小鼠经口急性毒性，雄性LD50 ＞ 3.690g/kg BW，雌性LD50 ＞3.160g/kg BW，毒性分级为低毒。急性经皮毒性试验LD50>2.180g/kg BW，毒性分级为微毒性。急性眼刺激性/ 腐蚀性试验反应分级为微刺激性。皮肤变态反应试验致敏强度为轻致敏性。皮肤刺激性/ 腐蚀性试验反应分级为轻刺激性。基因突变和染色体畸变试验均为阴性。皮肤光毒性和皮肤光变态反应均为阴性。亚慢性经皮毒性最大无作用剂量为20 mg/kg bw/day。所验项目同国际组织SCCP 公布的结果比较基本一致，大部分项目的结果优于国外。实验结果显示，本土相关产品二羟吲哚在染发剂中以0.5% 浓度添加使用是安全的。

关键词：二羟吲哚；染发剂；动物毒理学试验；结果比较

Part 1

前言

据国内外多年研究发现，二羟吲哚有天然黑色染发作用，同时具有抗菌、清除自由基和抗紫外辐射、以及作为抗氧化剂制备各类应急性疾病的预防或治疗药物等功效。二羟吲哚作为新一代染发护发用品中的有效活性成分已成为发展趋势，也是国内外关注的研究热点[1]。二羟吲哚目前在日本称作为“空气氧化性染发剂”[2]。欧盟委员会健康和消费者保护总局公共卫生及风险评估委员会（以下简称：“SCCP”）0952/05 《关于对二羟基吲哚的意见》报道了多个国际实验室依据GLP程序和OECD 方法指南，对物质代码为P36和P39 的二羟吲哚样品开展毒理学实验，据此做出安全性评估意见和推荐使用浓度[3]。近10 年来， 随着精细化学新产品的发展，中国在二羟吲哚合成方法和用途方面的报道也不断出现，但是尚未被批准使用。根据中国《化妆品新原料申报与审评指南》要求[4]，申请注册化妆品新原料，应符合情景II 要求的项目进行毒理学评价。本文对相关二羟吲哚原料分别进行了急性经口、经皮毒性、急性眼刺激、皮肤刺激性/ 腐蚀性、皮肤变态反应、皮肤光毒性、皮肤光变态反应和基因突变、染色体畸变和90 天经皮染毒等10 项毒理学实验，并將实验结果与SCCP/0952/05 的同项实验结果进行比较，为本土二羟吲哚原料开发的毒理学评价提供科学依据。

Part 2

材料和方法

1. 实验样品来源

广州市骄子日化有限公司提供产品染发剂原料二羟吲哚（批号研2023001-1） 共500mg。来源于3，4- 二烷氧基苯乙胺同溶剂乙酸在催化剂三溴化硼作用下，加氧化剂五氧化二磷和溶剂四氢呋喃进行氧化反应，加还原剂连二亚硫酸钠进行还原反应生成二羟吲哚液体。再经乙酸乙酯萃取、盐水洗涤、减压浓缩、冷冻结晶、真空干燥得到单一化合物二羟吲哚，纯度高达97% 以上。500mg 二羟吲哚由铝箔真空袋封存为5 袋，每袋100mg，外包装完整无残缺无泄漏。开袋后样品为黑灰色固体粉末状，见空气颜色加深，二羟吲哚纯度≥ 97.5%。实验二次取样后充氮封存，加套自封袋再次充氮4℃保存。

2. 实验环境

急性经口毒性试验、急性经皮毒性试验、急性眼刺激性/ 腐蚀性试验、皮肤刺激性/ 腐蚀性试验、皮肤变态反应试验在广州市黄埔区瑞发路16 号2 栋一楼动物毒理实验室完成，实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2021-0270。室温18℃～ 26℃，湿度40% ～ 70%。上述动物实验设计经过广州市宜健医学技术发展有限公司实验动物福利和伦理委员会批准。

皮肤光毒性试验、皮肤光变态反应试验、基因突变和染色体畸变实验在广州市黄埔区科学城尖塔山路1 号普通环境动物毒理实验室和体外实验室完成，实验动物使用许可证号：SYXK（ 粤）2022-0194。室温18℃～ 26℃，湿度40% ～ 70%。上述动物实验设计经过广州市微生物研究所集团股份有限公司实验动物伦理委员会批准。

3. 实验动物和饲料来源

急性经口毒性试验使用SPF 级KM小鼠（ 雌雄各半）；实验动物生产许可证号∶SCXK（粤）2022-0002；动物合格证号：44007200113413。饲料购自广东省医学实验动物中心，批号：20220907。质量合格证：No.4420030028392。急性经皮毒性试验使用SPF 级SD 大鼠（雌雄各半），实验动物、饲料来源和批号同1.3.1。动物合格证号：NO.44007200113412。

急性眼刺激性/ 腐蚀性试验使用普通级新西兰兔，实验动物生产许