两种不同设备封片模块的应用体会

林齐立 陈永钦 施栋梁 郑宇辉 杨映红 福建医科大学附属协和医院病理科 （福建 福州 350001）

内容提要：目的：比较两种不同设备封片模块，对其单独运行的应用价值进行评估。方法：随机抽取福建医科大学附属协和医院病理科常规石蜡HE切片2000片，分别观察Roche ⅤENTANA H-E 600全自动染色封片一体机及Leica H&E Staining System Spectra WS二者封片模块的封片效果及产生的故障。结果：Roche ⅤENTANA H-E 600全自动染色封片一体机及Leica H&E Staining System Spectra WS二者均可单独运行封片模块，封片效果稳定，成片率高，设备故障率低。结论：Roche ⅤENTANA H-E 600全自动染色封片一体机：封片效果稳定、即用型耗材成本高但耗材质量稳定，对组织切片保护好。Leica H&E Staining System Spectra WS：封片效果稳定、即用型耗材成本较低且耗材质量稳定，对组织切片保护较差。

在病理组织切片过程中，封盖盖玻片是病理技术工作的一项重要工作，其特点为简单易操作但工作耗时较长，传统手工封片的方法不仅耗费的大量的人力资源还难以达到临床技术操作规范的要求。人工操作由于人员的技术水平参差不齐，对胶量控制及气泡控制均不理想。目前传统手工封片仍不可避免地接触到二甲苯等毒害物质，对人体健康造成不利影响。近年来自动化设备已大量应用到临床病理科日常工作中，自动化封片设备主要优势在于效率较高以及能最大程度保护操作者，但其对载玻片（样本）的保护和设备稳定性还需进一步研究。在寻求自动化设备代替人工封片工作的过程中，本文比较了两种不同设备的封片模块，取得一些心得体会。

1.材料与方法

1.1 一般材料

随机抽取2020年12月～2021年6月福建医科大学附属协和医院病理科由Roche ⅤENTANA H-E 600全自动染色封片一体机及Leica H&E Staining System Spectra WS完成的常规石蜡HE切片各1000片。

仪器设备：Roche ⅤENTANA H-E 600全自动染色封片一体机（简称：H-E 600），Leica H&E Staining System Spectra WS（简称Leica Spectra WS）其中封片模块为Leica Spectra CV。

主要耗材：ⅤENTANA H-E 600 Coverslip Activator（Roche公司，生产批号：H36438），ⅤENTANA H-E 600 Glass Coverslips（Roche公司，生产批号：220349），Spectra CⅤ X1（Leica公司，生产批号：022322），Spectra Cover Glass（Leica公司，生产批号：4910054316）。

1.2 方法

Roche ⅤENTANA H-E 600程序设置如下：填写程序名称为Coversliping，取消勾选Drying，选定Hematoxylin=1，选定Differentiation=0，选定Eosin=1，勾选Coverslip。切片经HE染色后需将载玻片喷漆面（须与组织面一致）朝上装载在特制的20片进样盘进行上机，运行上述设置的封片程序Coversliping。

Leica H&E Staining System Spectra WS为联机系统，单机Leica Spectra CⅤ可独立运行，无须单独设置程序。切片经HE染色后需将组织面朝切片架箭头方向装载，从Leica Spectra CⅤ进样仓上机，单独运行Leica Spectra CⅤ模块。根据《临床病理技术操作规范》进行评分，见表1。

表1.病理常规石蜡包埋HE染色切片质量标准及评分表

2.结果

2.1 封片效果

H-E 600的封片模块，大批量标本无或少量溢胶，出片干净，显微镜下无或极少气泡，无细小气泡，封片效果稳定（见表2），根据《临床病理技术操作规范》评分每片平均为9.676分。Leica Spectra WS封片模块（Leica Spectra CⅤ），大批量标本无或少量溢胶，出片干净，显微镜下无或极少气泡，可见少量细小气泡，封片效果稳定，根据《临床病理技术操作规范》评分每片平均为9.1分。见图1、图2。

图1.RocheVENTANAH-E600成片图示

图2.LeicaSpectraCV成片图示

表2.《临床病理技术操作规范》评分片数（张）

2.2 封片效率

H-E 600的封片模块为单通道模块，一次进样20张切片，至烤片风干完成，成片时间为1380s，封片速率为69s/片。Leica Spectra CⅤ为双通道模块，每次每个通道进样30张切片，至烤片风干完成，成片时间为780s，封片速率为13s/片。

2.3 故障及玻片保护

H-E 600的封片模块故障率较低，发生故障时设备停止运行，设备还原功能尝试修复设备时，对机上切片保护好。Leica Spectra CⅤ故障发生率较高，但双通道独立运行，当其中一个通道发生故障时另一个通道可继续运行，仅在尝试人工修复设备时暂停封片，设备自动还原功能尝试修复设备时可能破坏机上切片。见图3、图4。

图3.H-E600封片故障

图4.LeicaSpectraCV故障

3.讨论

封片技术是病理切片制片的最终环节，也是《临床病理技术操作规范》要求的质量控制的重要项目。根据《临床病理技术操作规范》，HE染色切片质量中对封片技术的评分为0～10分[1]。2018年叶恩如等[2]报道了H-E 600与与Leica XL全自动染色机的染色质量差异，但未对二者封片功能进行详细介绍。传统手工封片由于人工操作的不确定性导致封片效果较差，溢胶及气泡均较多，并且耗时较长。长期接触二甲苯对呼吸、中枢神经及心血管系统造成危害[3]。大多病理科尤其是技术室有不同程度的二甲苯污染，由自动化设备替代手工封片已是大势所趋[4]。市面上越来越多的自动化封片设备其封片效果、封片效率及其设备稳定性（指设备的故障与修复和维护难度）是临床工作中最需要关注的参数，主流的自动化封片设备有以H-E 600封片系统为代表的激活剂盖片法、Leica Spectra CⅤ为代表的模拟手工盖片法及日本樱花Tissue-Tek®Film™封片系统为代表的胶带封片法。由于缺乏日本樱花Tissue-Tek®Film™封片系统的设备支持，因此实验仅进行了H-E 600封片系统和Leica Spectra CⅤ的比较。

冉志远等[5]对日本樱花全自动染色封片一体机的封片系统（Tissue-Tek®Film™）进行了详尽的描述，其封片方式与本文两台设备均有差异。本文介绍的两台设备均在本实验室有大量实验数据基础上进行分析：①从成本上H-E 600的配套试剂价格较高，对耗材质量要求高，其配套的盖玻片耗材在保存条件欠缺时易发生重片导致封片失败。②从上机方式上H-E 600对上机操作要求更为严格，操作较为复杂。③设备的维护与保养，H-E 600在每次关机时运行自动保养功能对封片模块无须特别操作。Leica Spectra CⅤ在休眠后重新使用时需进行“快速灌注”以清洁出胶管道，在更换速干胶时需进行“延长灌注”以排空气泡，需定期更换作为出胶针清洗剂的二甲苯试剂。H-E 600盖玻片装载量为7单位，每个单位为170片，总计1190片，当装载量少于5单位时需添加盖玻片方可进行进样操作。Leica Spectra CⅤ的盖玻片装载量为单通道300片，双通道则为600片，当任意一通道盖玻片低于警戒值时需更换盖玻片。④H-E 600的封片模块使用的封片试剂为样本保存液Coverslip Activator，为无苯的专用试剂（主要含柠檬烯成分），对操作者保护较好。Leica Spectra CⅤ的封片试剂为高清透明树胶，其中还需用到二甲苯来保养设备，这就大大增加了操作者受有毒试剂侵害的风险。⑤从实验数据表明，H-E 600的封片模块与Leica Spectra CⅤ封片效果均较好，在组织不平整产生的大气泡方面二者均得到一致的结果，Leica Spectra CⅤ出现的细小气泡与封片剂浓度，喷胶压力及出胶枪口径有关，环境温湿度对其有一定影响[6,7]。

封片效率H-E 600的封片模块低于Leica Spectra CⅤ。故障率上H-E 600发生故障次数略少于Leica Spectra CⅤ，但Leica Spectra CⅤ较高的故障率也与其处理速度快有关，此外两个通道发生的故障均计算为一次故障，平均每通道故障率则与H-E 600的封片模块是接近的。鉴于设备对组织切片的保护作用，对于一些珍贵切片如会诊切片、室间质评切片、带标签的免疫组织化学染色切片在H-E 600染色封片一体机的封片模块上可以得到更为稳定的封片效果。H-E 600的封片模块由于严格的上机操作对大批量的工作标本单独使用封片功能产生了限制，对未染色的标本使用其染色封片一体化功能更有意义。而Leica Spectra CⅤ更适合处理大批量的无标签或标签粘贴整齐的切片，其封片效果及安全性均可得到保障，在处理带标签的切片上极易发生故障，应该尽量避免。在H-E 600封片模块的使用中注意到，其封片时使用的样本保存液Coverslip Activator其主要成分为柠檬烯，对保存条件要求较高，在高温高湿状态下易发生变质，因此使用H-E 600封片模块对切片保存条件产生的影响还需进一步的实验加以研究。

综上所述，Roche ⅤENTANA H-E 600与Leica Spectra WS二者的封片功能均适用于临床病理科工作中大批量HE标本的染色封片工作。Roche ⅤENTANA H-E 600在封片质量上更有优势，特别适用于会诊切片、室间质评切片、带标签的免疫组织化学染色切片等珍贵组织切片。无标签或标签粘贴整齐的切片应用在Leica Spectra CⅤ上同样能得到良好的封片效果和封片效率且经济效益较好。