药材粒度对冷浸法提取水冬瓜伤科止痛酊中黄芩苷和总固体物收率的影响*

杨元凤,罗玉玲,代 欣,陈永敏,周训蓉▲

(1贵州中医药大学第二附属医院 药学部,贵州 贵阳 550003;2贵州中医药大学 中药制剂研发中心,贵州 贵阳 550003;3贵州中医药大学 制剂研究中心,贵州 贵阳 550003)

水冬瓜伤科止痛酊为我院骨伤科特色制剂,具有活血化瘀、消肿止痛的功效,临床上用于治疗各种跌打损伤、软组织损伤肿痛瘀血者[1]。其制备方法是冷浸法。而药材粒度是影响浸提的主要因素之一。药材粒径粗,表面积小,浸出效果低;药材粒度细,浸出效率高。但是药材粒度太小也不利于浸出,且浸出杂质多[2-3]。为优选出适宜的药材粉碎粒度制备酊剂,给患者提供疗效好的制剂,本研究以黄芩苷含量和总固体物收率为考察指标,采用高效液相色谱法测定不同粒度(最粗粉、粗粉、中粉、细粉)酊剂中黄芩苷含量,采用干燥失重法测定总固体物收率,由此优选出对制剂总固体物收率和黄芩苷影响最大的药材粒度,为完善水冬瓜伤科止痛酊制备工艺提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱仪(美国安捷伦 );2号筛、3号筛、4号筛、5号筛、6号筛(药典筛,台州三门跃阳筛网厂);FA2204N电子分析天平(上海菁海仪器有限公司);TP-320C型电子天平(湘仪天平仪器设备有限公司);DZKW-4型电子恒温水浴锅(上海金桥科析仪器厂);101-2AB型电热鼓风干燥箱(天津泰斯特仪器有限公司)。

1.2 试药

实验所用药材水冬瓜根皮、伸筋草、黄连、生栀子、黄柏、黄芩、天花粉、紫草、醋乳香、醋没药、姜黄、当归、红花、泽兰、川芎、 醋延胡索、生大黄、酒续断、烫骨碎补购自贵阳济仁堂中药饮片厂;冰片、薄荷脑、煅石膏购自贵州同济堂中药饮片有限公司。所有药材均由我院医院制剂研究中心赵海副主任中药师鉴定。黄芩苷对照品(含量以93.5%计,批号为110715-201720,中国食品药品检定研究院);95%乙醇(吉林省新天龙实业股份有限公司);色谱甲醇(美国天地有限公司);水(纯净水,贵阳娃哈哈食品有限公司);磷酸(国药集团化学试剂有限公司)。

2 方法与结果

2.1 样品制备

按处方称取饮片(冰片、薄荷脑除外)约180 g,共8份,2份粉碎成最粗粉,2份粉碎成粗粉,2份粉碎成中粉,2份粉碎成细粉,分别置密闭容器中,密闭浸渍2次,第一次加4.6倍60%乙醇,第二次加3倍60%乙醇,每次浸渍7天,每天搅拌一次,过滤弃渣,合并浸出液,混匀,加入冰片、薄荷脑,搅拌使完全溶解,加60%乙醇至1000 mL,搅匀,即得不同粒度药材制得的水冬瓜伤科止痛酊制剂。

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件[4]

以Welch Ultimate®XB-C18(直径为4.6 mm,柱长为250 mm,粒径为5 μm)为色谱柱;以甲醇为流动相(A),以0.2%磷酸水溶液为流动相(B),按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长为280 nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2500。

表1 流动相梯度洗脱

2.2.2 对照品溶液的配制

精密称定黄芩苷对照品0.02451 g置25 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀;再精密吸取1 mL置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得91.67 μg/mL对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的配制

精密量取“2.1”项下不同粒度药材制得的酊剂10 mL,分别置50 mL量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得各供试品溶液。

2.2.4 阴性对照溶液的配制

取缺黄芩的阴性样品,精密量取10 mL,按“2.2.3”项下方法制备,即得缺黄芩的阴性对照溶液。

2.2.5 黄芩苷含量测定

按“2.2.1”项下色谱条件分别吸取对照品溶液、各供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL进行测定。结果见图1、表2。阴性对照液在指标成分黄芩苷色谱峰对应的位置处无吸收,不干扰黄芩苷的测定。

图1 黄芩苷对照品、不同粒度制得酊剂供试品溶液和缺黄芩酊剂阴性对照溶液的HPLC

表2 不同粒度药材对酊剂总固体物收率和黄芩苷的影响(n=2)

2.3 总固体物收率测定

取“2.1”项下不同粒度浸提的药液,各精密量取25 mL至已恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,照 《中国药典》现行版四部通则0831干燥失重测定法测定总固体物重量,计算总固体物收率,平行2次,结果见表2。计算公式如下:

公式中,W为25 mL药液中固体物的重量,Wt为样品投料重量。

对总固体物收率和黄芩苷含量进行单样本t检验,结果见表3。根据单样本t检验结果可知,总固体物收率和黄芩苷含量的p值均小于0.05,说明不同粉碎粒度对总固体物收率和黄芩苷的含量均有一定影响,用最粗粉制成的酊剂黄芩苷含量和总固体物收率均最高,因此确定制备水冬瓜伤科止痛酊的饮片粉碎成最粗粉进行投料。

表3 单样本t检验结果

3 讨论

酊剂可用稀释、溶解、渗漉或浸渍等法制备。本文所研究对象水冬瓜伤科止痛酊是用冷浸法制备的。在《中国药典》2020年四部通则0120酊剂浸渍法中只提到饮片适当粉碎,但没有对饮片粉碎的程度进行描述[5]。然而药材的粒度对中药及制剂有效成分的溶出均有较大影响[6-7]。因此本研究探讨药材不同粒度(最粗粉、粗粉、中粉、细粉)对冷浸法提取水冬瓜伤科止痛酊中黄芩苷和总固体物收率的影响。结果发现,4种不同粉碎粒度对冷浸法提取水冬瓜伤科止痛酊的黄芩苷含量和总固体物收率差异较大,其最粗粉制得的酊剂供试品溶液的黄芩苷含量是细粉制得的酊剂供试品溶液的黄芩苷含量的2.3倍。最粗粉、粗粉、中粉制备的水冬瓜伤科止痛酊的总固体物收率差异不大,但是细粉制备的水冬瓜伤科止痛酊的总固体物收率降低明显,分析原因可能是过细的粉碎会增加粉末的总表面积,从而吸附作用增加,减慢扩散速度,最终导致药材有效成分的释放更困难。因此,综合总固体物收率和黄芩苷的结果,建议制备水冬瓜伤科止痛酊的药材粉碎成最粗粉进行投料。