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肠道微生物与炎症性肠病靶标发现和检测

2024-02-29郑雪松张小飞

工业微生物 2024年1期
关键词:溃疡性脾脏结肠炎

郑雪松,张小飞,董 碟

武汉贝茵莱生物科技有限公司,湖北 武汉 430000

炎症性肠病是一类复杂、病因不明的慢性肠道疾病,主要类型为克罗恩病和溃疡性结肠炎。这两种疾病都表现为反复发作的肠道炎症,严重影响患者的生活质量。肠道微生物群落拥有巨大的生物多样性,与宿主的健康状况存在密切关联,且近年来已被证明在许多疾病的发生与发展中起着重要作用,包括肠道疾病、肠道相关的代谢性疾病和一些心脑血管疾病等[1-2]。葡聚糖硫酸钠盐(Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)是一种聚阴离子衍生物,其诱导结肠炎模型的机制虽未十分明确,但通常认为会引发巨噬细胞功能失调、肠道菌群失调。IFX 和Hydrostatin-SN10 在炎症性肠病治疗中显示出较好的疗效[3-4]。因此,研究利用DSS 对小鼠进行溃疡性结肠炎诱导,观察对照组、实验组和治疗组溃疡性结肠炎小鼠的体重变化、脾脏指数及生物标志物的表达情况,分析小鼠的炎症标志物表达水平与炎症性肠病的关系,有助于诊断IBD 和指导用药治疗。

1 资料和方法

1.1 一般资料

研究采用的实验动物为C57BL/6 小鼠,实验主要耗材包括DSS、组织固定液、生理盐水、苏木素伊红染色试剂盒、Chymotrypsin C 和Gelsolin ELISA 试剂盒、RhoGDI2 抗体等。实验使用的主要仪器包括制冰机、超净工作台、高压灭菌锅、离心机、超微量分光光度计、组织研磨仪、酶标仪、TS-200 脱色摇床、超纯水仪、GeL Image System。

1.2 研究方法

溃疡性结肠炎小鼠模型的构建步骤如下。第一,将C57BL/6 小鼠进行3~5 d 的预饲养,再随机分为7 个组,每组6~8 只小鼠,包括对照组,实验组,IFX和Hydrostatin-SN10 治疗处理组。第二,对照组以灭菌的纯净水及无菌饲料喂养,持续7 d[5-6];其他组以3%DSS 溶液喂养,持续7 d。第三,Hydrostatin-SN10处理组小鼠均进行腹腔注射给药,IFX 组、Hydrostatin-SN10、M1、M2 和M3 组的给药剂量分别是800 μg/kg/d、4 mg/kg/d、800 μg /kg/d,实验组注射100 μL/20g/d 的生理盐水7 d。第四,每日定时对每组小鼠称重并进行行为观察,记录小鼠的体重。第五,实验第7 天处死小鼠,取出小鼠的脾脏、结肠进行拍照并记录其重量[7],然后按照部位分段处理结肠,分别用于炎症标志物的检测和后续其他实验材料。

1.3 观察指标

溃疡性结肠炎的症状一般表现为腹泻、患者体重下降、脾脏异常肿大[8]。因此,探究肠病微生物在炎症肠病中的靶标时,将小鼠的体重变化、脾脏质量及肠道炎症标志物的表达情况作为观察指标进行分析,Chymotrypsin C 及Gelsolin 均采用ELISA 试剂盒进行检测,RhoGDI2 采用免疫印迹法进行检测。

1.4 统计学方法

研究对实验结果数据的统计学分析均采用SPSS 25.0 进行,值均为双侧检验,若P>0.05,则数据不具有统计学意义,反之则具有统计学意义。实验数据均采用表示,计量资料间的比较采用ANOVA检验。

2 结果

2.1 各组小鼠的体重结果分析

对各组小鼠进行处理后,对照组小鼠体重呈正常生长状态,实验组小鼠体重呈大幅下降状态,治疗组均有不同程度的体重下降(P<0.001)。开始实验的第1 天,所有小鼠的体重为19±1.0 g,分别在第1、3和7 天进行称重,小鼠体重变化见表1。

表1 小鼠体重变化结果

2.2 各组小鼠的脾脏指数结果分析

相较于实验组,其余组别的脾脏指数均有所下降(P<0.001)。相较于对照组,实验组小鼠的脾脏指数上升0.100%,IFX 组和Hydrostatin-SN10 治疗组小鼠的脾脏质量上升0.056%;小鼠脾脏质量变化结果见图1。

图1 小鼠脾脏指数变化结果

2.2 小鼠炎症标志物表达结果分析

相较于对照组,实验组的三种炎症标志物表达量均大幅上升,经过不同药物治疗后,小鼠肠道炎症标志物表达水平出现不同程度的下降。Hydrostatin-SN10-M1 组的炎症因子表达水平下降不明显,且与Hydrostatin-SN10 组相比,具有显著的统计学差异,Chymotrypsin C (P <0.001)、RhoGDI2 (P <0.001)、Gelsolin(P<0.001)。小鼠肠道炎症标志物表达水平结果见表2。

表2 小鼠肠道炎症标志物表达水平

3 讨论

IBD 是一种非常经典的与肠道微生物菌群相关的疾病,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。研究以C57BL/6 小鼠为实验对象,分析了小鼠治疗前后的体重、脾脏和炎症标志物表达水平与IBD 之间的联系,为IBD 治疗靶标的发现及检测提供相关实验资料。

实验组的小鼠肠道组织中三种生物标志物表达量均上升,其中实验组RhoGDI2 基因表达水平上升最明显,是对照组的82 倍,实验组Gelsolin 和Chymotrypsin C 分别是35 倍和8.9 倍。经过IFX 和Hydrostatin-SN10 治疗组的肠道炎症标志物表达水平均有明显下降。综上所述,小鼠结肠中Chymotrypsin C、RhoGDI2 及凝溶胶蛋白Gelsolin 表达水平与小鼠溃疡性结肠炎的严重程度密切相关,未来可能作为诊断指标用于IBD 的检测和治疗。

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