妊娠及围产因素对子代脐带血CD34+造血干细胞的影响分析

仝晓鑫，李惠敏，翟青梅，张璐涵，丁桂凤

子代脐带血中的造血干细胞具有强大的造血重建能力， 目前脐带血造血干细胞已在临床上广泛应用，可用于治疗免疫缺陷性疾病、血液病、代谢类疾病等[1，2]。 脐带血的质量直接关乎于干细胞移植治疗效果[3]。 研究表明，有核细胞总数和白细胞分化抗原34+（cluster differentiation 34+，CD34+） 造血干细胞数量是反映脐带血质量的重要指标[4]，其数量主要与移植机体接受速度、患者生存期长短和中性粒细胞恢复显著相关。 因此脐带血库应优先选择有核细胞总数和CD34+造血干细胞数量较高的脐带血，具体标准应由各个脐带血库因具体情况制定。笔者探究妊娠及围产期因素对子代脐带血CD34+造血干细胞的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择乌鲁木齐市妇幼保健院2021 年5 月至2022 年5 月收治的无先天性疾病的健康孕妇120例，采取其分娩新生儿的脐带血作为研究对象，其中男性60 例，女性60 例；新生儿体质量2500 ～4000 g。 所有入组孕妇均签署知情同意书，该研究已获笔者所在医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 脐带血采集

子代脐带血由固定护士在医院手术室或者产房收集120 份， 在新生儿断脐后10 s 内进行脐带血采集，每份大约2 ～3 mL。采集子代脐带血时，穿刺位置选取距离胎盘断端约5 ～8 cm 的位置， 用碘伏消毒2 遍后，用穿刺针头呈小角度或斜头朝下刺入，出血后沿血管壁顺行1 ～2 cm，采集子代脐带血。 采集完成后用止血钳夹闭穿刺位置双端的血管，采血过程中进行混匀以防血液凝固，记录好样品基本信息，暂时储存于4 ℃冰箱中，尽快在24 h 内进行检测。

1.2.2 有核细胞计数

采用XE-2100 全自动血液分析仪对子代脐带血中的有核细胞进行计数。每个样本进行3 次及以上测量，取平均值作为数据。

1.2.3 流式细胞术检测CD34+造血干细胞

采用流式细胞分析仪（美国，DxP Athena）进行检测。 流式细胞术至少需要约2×106个细胞进行上机操作，因此，首先使用细胞计数仪对样品进行计数，计算出样品所需量。 向样品中加入20 μL 藻红蛋白（phycoerythrin，PE）标记CD34（CD34-PE）和10 μL多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物（peridinin-chlorophyll-protein complex，PercP）标记CD45（CD45-Per-CP），用涡旋振荡仪进行振荡混匀， 避光条件下静置10 min。 在1000 g 条件下离心5 min，吸弃上清液，加入1 mL 磷酸盐缓冲溶液重悬细胞，之后上机检测。用Flow Jo 软件对数据进行分析，若CD34 阳性、CD45 弱阳性、 前向角散射较淋巴细胞较大的细胞则判定为CD34+细胞，计算CD34+细胞的占比，则为CD34+细胞占有核细胞的比例。 CD34+细胞数量则为有核细胞总数×CD34+细胞占有核细胞比例。

1.2.4 信息采集与分析

收集新生儿及产妇的临床资料，主要包括孕母年龄、孕母血型（A 型/B 型/O 型/AB 型）、孕母身体质量指数（body mass index，BMI）、孕母过敏史、妊娠期糖尿病（有/无）、妊娠期高血压（有/无）、分娩方式（剖宫产/顺产）、产次（1/2/3）、孕周（＜37 周/＞37 周）、新生儿性别（男/女）、新生儿体质量、胎盘质量、胎膜早破（有/无）、羊水污染（有/无）、脐带绕颈（有/无）等信息。其中妊娠期因素由笔者所在医院产科医生进行诊断，围产期因素由产科医生和新生儿科医生共同诊断。

1.3 统计学方法

所有数据采用SPSS 25.0 软件进行统计学分析。正态分布计量资料以均值± 标准差，组间采取成组t检验，非正态分布计量资料采用中位数表示，组间采用Kruskal-Wallis H 检验。 皮尔逊卡方检验则描述两个连续变量之间的相关性。 P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 妊娠期因素对脐带血CD34+造血干细胞的影响

调查的妊娠期因素主要有孕母年龄、 孕母血型、孕母BMI、孕母过敏史、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、分娩方式、产次和孕周。 其中孕母平均年龄为30 岁，因此将孕母年龄按照30 岁进行分组，相关性分析发现孕母年龄和脐带血中有核细胞数和CD34+细胞数呈正相关， 即孕母年龄＞30 岁时， 脐带血的CD34+细胞数较多；另外，孕周也与脐带血的有核细胞数和CD34+细胞数呈正相关。而其他妊娠期因素与脐带血的有核细胞数和CD34+细胞数比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。 见表1。

表1 妊娠期因素与脐带血中有核细胞数和CD34+造血干细胞数的关系[M（P25，P75）]Tab.1 Relationship between pregnancy factors and number of nucleated cells and CD34+hematopoietic stem cells in umbilical cord blood[M(P25,P75)]

2.2 围产期因素对脐带血CD34+造血干细胞的影响

围产期因素主要包括新生儿性别、 新生儿体质量、胎盘质量、胎膜早破、羊水污染、脐带绕颈。其中新生儿体质量和胎盘质量分别按照平均值进行分组比较，其他因素则为定性资料。经相关性分析发现，围产期因素与脐带血的有核细胞数和CD34+造血干细胞数均无关。 见表2。

表2 围产期因素与脐带血中有核细胞数和CD34+造血干细胞数的关系[M（P25，P75）]Tab. 2 Relationship between perinatal factors and number of nucleated cells and CD34+hematopoietic stem cells in umbilical cord blood[M(P25,P75)]

3 讨论

脐带血造血干细胞的首次成功移植是在1988 年由Gluckman E 等[5]对范科尼贫血患儿进行的治疗。目前脐带血在临床上应用广泛，从脐带血中获得的造血干细胞已治愈许多例血液系统恶性肿瘤或其他影响造血功能的遗传性疾病[6～8]。 子代脐带血已成为替代骨髓的造血干细胞的重要来源。 脐带血具有多种优点，例如可简单快速获得、可长期保存、被外界环境污染的发生率低、排异反应发生率较低、被移植患者的生存质量高等[9～11]。 目前，中国多地已构建有脐带血库， 其很大程度上促进了造血干细胞移植的发展，增强了其移植成功率和覆盖面，且降低了治疗费用。 因此，在各方面提高收集到的子代脐带血治疗具有重要意义[12]。

笔者研究分析妊娠因素和围产因素对子代脐带血中有核细胞数和CD34+造血干细胞数的影响，以进一步提高脐带血库收集样品的质量。有研究报道产妇年龄与CD34+造血干细胞数无明显的相关性，但贺晶等[13]研究发现孕母年龄与脐带血的CD34+造血细胞计数呈正相关关系， 笔者研究得出结果与之一致，据此分析，可能孕母年龄越大、体内自由基较多，则刺激脐带血产生造血干细胞则较多。 另外，多项研究表明妊娠期高血压或糖尿病等并不会影响脐带血的有核细胞数和CD34+造血干细胞数[14]。 影响脐带血造血干细胞的妊娠期因素据报道还有分娩方式等，有研究表明剖宫产患者的脐带血CD34+造血干细胞数多于顺产，但也有研究得出相反的结论[15]，或者得出生产方式并不影响脐带血造血干细胞的结果[16]。 在笔者研究中，调查结果表明生产方式等其他因素并不影响脐带血造血干细胞数量，这与部分研究结果一致。另外，笔者研究发现孕周越大，则有核细胞数和CD34+造血干细胞数越多，分析其原因可能是随着孕周的增加胎儿的血液循环发育愈发完善。 另一方面，笔者研究发现围产期因素包括新生儿性别、新生儿体质量、胎盘质量、胎膜早破、羊水污染、脐带绕颈均不影响脐带血的有核细胞数和CD34+造血干细胞数量，这与部分研究结果一致[17]，但也有研究表明新生儿体质量与CD34+造血干细胞数呈正相关[18]，还有研究表明脐带绕颈的新生儿的CD34+造血干细胞数更多[19]。 分析不同研究得出不一致的原因有收样规模和样品之间存在个体差异性，笔者研究中纳入新生儿发生脐带绕颈的例数较少，且大多数仅绕颈1 周，很少可以引起脐带压迫，也因此很少引起脐带血的血流动力学的改变。笔者研究仍存在一些不足，纳入样本量较少，另外还有很多其他影响因素例如胎龄[20]、单双胎[21]、胎盘形态、受孕方式、孕母烟酒史、分娩时间等未纳入研究。

综上所述，笔者研究发现脐带血中CD34+造血干细胞数量随孕母年龄和孕周增加而增多，这为提高脐带血库的样品质量提供了理论依据。因此脐带血库在筛选脐带血造血干细胞提供者时，也可将孕周和孕母年龄纳入作为考量因素。