种猪场猪伪狂犬病净化探索

蒙炳超 马 萍 李照伟 何 毅 陆跃堂 柏 城 郑敏萍

(1 黔南州养殖业发展中心，贵州都匀 558000；2 贵州省动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550008；3 独山县养殖业发展中心，贵州独山 558200；4 贵州日泉农牧有限公司，贵州独山 558200；5 上海农林职业技术学院，上海 201600）

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒感染引起的一种以生殖系统、呼吸系统和神经系统出现临床症状的传染病，主要危害妊娠母猪和仔猪，造成母猪流产、产木乃伊胎、产死胎、仔猪死亡率升高等，病毒可通过母体垂直传播，也可通过犬、猫、鼠等储存宿主传播，还可通过被猪伪狂犬病病毒污染的工作人员服装、器具及空气等进行传播[1,2]。猪感染伪狂犬病病毒后没有特效治疗药物，预防和控制猪伪狂犬病的有效方法是净化猪群和疫苗免疫[3]。根据《动物疫病净化场评估管理指南》 《动物疫病净化场评估技术规范》的相关要求和标准[4]，应采用伪狂犬病的疫苗免疫、监测、规范饲养、生物安全管理的净化技术，推动种猪场通过省级以上动物疫病净化评估、实现猪伪狂犬病的免疫净化目标。贵州日泉农牧有限公司（以下简称“日泉公司”）泉兴种猪场开展了猪伪狂犬病免疫净化探索。

1 材料与方法

1.1 试验材料

国产商品化猪伪狂犬病gE抗体（简称“gE 抗体”）ELISA 检测试剂盒和猪伪狂犬病gB 抗体（简称“gB 抗体”）ELISA 检测试剂盒。猪伪狂犬病疫苗采用勃林格殷格翰公司生产的猪伪狂犬病弱毒疫苗（Bartha-K61）。

1.2 试验方法

1.2.1 建立保障措施

一是组织保障，成立由公司总经理担任组长、场长为副组长、种猪场内各部门负责人、实验室负责人为成员的疫病净化工作实施小组；二是技术保障，邀请当地动物疫病预防控制机构专家、集团公司养猪技术事业部专家及高校老师组成疫病净化技术指导专家，全面负责动物疫病净化的技术指导工作；三是经费保障，将疫苗、动物疫病检测、消毒等经费列入养猪企业的年度经费预算。

1.2.2 完善生物安全和饲养管理

按照动物疫病净化评估要求，结合生物安全和饲养管理实际情况，邀请当地动物疫病预防控制机构、集团公司、大专院校的专家帮助不断完善生物安全和饲养管理相关的制度、操作规程、消毒效果评估等，并督促、指导做好管理措施的落实。

1.2.3 建立gE 抗体阴性种猪群

⑴在引种前逐头采集猪只血清检测gE 抗体和gB 抗体，选择gE 抗体阴性、gB 抗体阳性猪作为引种猪只，引种猪只调入种猪场专用引种隔离舍隔离21 d，再做gE 抗体和gB 抗体检测。如果引种目标场未开展猪伪狂犬病疫苗免疫，则gB 抗体和gE 抗体均为阴性猪作为引种目标猪。通过引种建立gE 抗体阴性种猪群。

⑵逐头采集免疫猪伪狂犬病疫苗21 d 后的后备猪血清，检测gE 和gB 抗体，gE 抗体为阴性、gB 免疫抗体为阳性的猪只，可从后备舍转入种猪舍。gE 抗体阳性猪只立即复检，若复核结果仍为阳性猪只，则立即淘汰。

1.2.4 种猪群净化维持

⑴1年内分区域、分批次对种猪群进行1 次猪伪狂犬病gE抗体全覆盖检测，gE 抗体检测阴性的猪群不能与未经gE 抗体检测的猪群交叉混养，如果检出gE 抗体阳性猪，则对阳性猪进行淘汰处理。

⑵全群检测阶段外的猪群，以不少于无疫公式（CL＝95%、P＝3%）的采样数量，每季度采集1 次种公猪、基础母猪及后备猪血清样品进行gE 抗体检测，检测出gE 抗体阳性猪则立即淘汰[4,5]。

⑶以不少于预估期望值公式（CL＝95%、P＝90、e＝10%），每季度采集1 次种公猪、基础母猪、后备猪血清进行gB 抗体检测，评估猪伪狂犬病群体免疫效果。检测结果出现群体免疫抗体合格率＜90%时，进行全群补免，补免后再次采集血清样品进行检测[4]。

⑷贵州省黔南州和独山县动物疫病预防控制机构按照《动物疫病净化评估技术规范》相关要求，每年对种猪场至少开展2 次监督检验，采样覆盖不同猪群，每次采样不少于30 头份，分别检测gE 抗体和gB 抗体[4]。

2 净化结果

2.1 引种

2018年日泉公司按照1年内引种的检测方案，引进PIC 种猪8 500 头，在隔离场对8 500 头种猪全部进行gE 和gB 抗体检测，检测结果均为阴性（引种前未进行猪伪狂犬病疫苗免疫）后转入种猪场，建立种猪场gE抗体阴性种猪群。

2.2 维持净化

2.2.1 监测抽检

种猪入场后，按程序开展猪伪狂犬病的疫苗免疫，并按照维持猪场伪狂犬病净化的方法，对gE 抗体和gB抗体进行检测。在2019年1月至2021年7月的抽检和监督检验中，共检测基础母猪、后备猪、公猪gE 抗体7 659 份，检测结果全为阴性；检测gB 抗体7 121 份，gB 抗体合格率为99.9%。

2.2.2 全群检测

2021年8月至2022年5月，分7 批完成全群种猪的gE 抗体检测，共检测8 427 份（含2 次监督检验），gE 抗体全为阴性；在开展gE 全群检测的同时，共抽检1 052 份猪血清样品进行gB 抗体检测（含2 次监督检验），gB 抗体合格率为97.1%。

4年来，在维持阶段，企业和官方对种猪场种公猪、基础母猪、后备猪进行猪伪狂犬病监测，共计检测gE抗体16 086 份，检测结果全为阴性，检测gB 抗体8 173 份，gB 免疫抗体平均合格率为99.5%，全场无猪伪狂犬病病例发生。

2.3 形成净化佐证资料

按照《动物疫病净化场评估技术规范》要求，对照《规模猪场主要动物疫病净化审查评分表》，建立或完善人员培训、净污道错时使用及消毒、无害化处理、消毒管理、生产管理、防疫管理、疫病监测等相关的制度、方案、操作规程，督促做好记录和资料的归档等，做到各评分项有充分的材料或实物支撑。

3 讨论与分析

根据国内外动物疫病净化探索和实践，在规模化种猪场开展猪伪狂犬病、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等疫病的净化，逐步形成一套我国规模化种猪场主要疫病净化技术方案和评估标准，也建设一批主要动物疫病净化示范场[6,7]。按照国家的动物疫病净化评估标准及相关的动物疫病检测技术标准，口蹄疫、猪瘟的净化需要采集活体猪扁桃体进行病原学检测，常规的口蹄疫、猪瘟和高致病性猪繁殖与呼吸综合征等的血清学检测难以区分野毒感染和疫苗免疫产生的抗体[5,6]。在工作实践中，由于活体采集猪扁桃体技术要求高，猪只易产生应激等影响种猪生产，养殖企业接受程度不高。猪伪狂犬病疫苗为gE 基因缺失苗，用商品化的gE 和gB 抗体检测试剂盒，即可快速、便捷和低成本地区分疫苗抗体和野毒感染抗体[8]。本文综合检测技术、养殖企业对采样方式的接受度、经费需求、技术要求等因素考虑，将猪伪狂犬病免疫净化作为本文净化探索的病种。

动物疫病净化是一项长期的工作，为此公司高度重视，统筹做好组织保障、经费保障和技术保障工作。通过成立猪伪狂犬病净化工作小组、做好疫病净化经费保障、建立专家指导机制和养猪技术外部审计机制等4 方面开展工作。为了通过省级以上猪伪狂犬病净化评估和实现猪伪狂犬病免疫净化的目标，在实施种猪场猪伪狂犬病免疫和检测净化技术的基础上，按照《动物疫病净化示范场评估标准（试行）》，将疫病净化检测与综合防控措施同步建立、同步实施，由资料组负责人员管理、卫生环保、无害化处理、消毒管理和疫病监测等相关的制度、方案、操作规程、记录表格的制定和资料归档等，确保4年来动物疫病净化资料的完整，做到各打分项有材料或实物作为支撑。黔南州和独山县动物疫病预防控制机构从2019年开始，将种猪场猪伪狂犬病净化的监督检验列入年度动物疫病监测计划，每年开展不少于2次的监督检验[9]。根据《规模化种猪场主要疫病净化评估标准》，猪场在开展猪伪狂犬病净化的同时，积极推动开展猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪口蹄疫等疫病的净化探索，制定并落实净化监测方案，按照非洲猪瘟无疫小区的管理要求，做好非洲猪瘟病毒的监测和防控[10]。

由于泉兴种猪场是新建场，且引种猪只全部为猪伪狂犬病gE抗体阴性个体，因此，在净化策略上，主要是实施免疫净化，做好维持和证明无猪伪狂犬病病毒感染。在净化的维持阶段，每次采集不少于100 头份血清样品进行gE 抗体检测，基于本文选用的几种国产gE 和gB ELISA 抗体检测试剂都没有标注试剂的敏感性和特异性，抽样方法存在误差等，为更全面地评估和掌握猪场的猪伪狂犬病维持情况，决定分批次开展一次gE 抗体的全群采样检测。但是全群采样检测对时间、人力、财力要求较高，同行在开展无疫证明时，根据时间、人力、经费等情况，可增加抽检频次、调整证明无疫公式中的预期流行率等参数，或者在gE 抗体检测的基础上，对流产母猪、有疑似临床症状猪只、种猪场内部环境、病死猪无害化处理区环境等高风险环节，引入猪伪狂犬病荧光RT-PCR、病毒分离等病原学检测方法，增加抽样检测的准确性，也可较为科学地评估猪场猪伪狂犬病的流行情况[11-13]。该场在开展猪伪狂犬病净化之初，即按照《动物疫病净化场评估技术规范》，建立并不断完善饲养和生物安全管理的相关制度、方案、记录等，有完整的猪场健康巡栏、诊疗、无害化处理、引种、淘汰、销售等记录，科学的生产性能指标统计和分析方法，当地动物疫病预防控制机构严格做好监督检验等，可更全面地加以佐证猪场的净化效果，同时也为净化评估做好支撑。在严峻的非洲猪瘟防控形势下，猪场建立了全面的生物安全管理体系，提升生物安全管理水平，2020年该种猪场通过“国家首批非洲猪瘟无疫小区”评估认证[14-17]。在完整的资料支撑和科学的检测保障下，2023年该种猪场的猪伪狂犬病免疫净化通过“国家级动物疫病净化场”评估认证。因此，建议在开展动物疫病净化工作中，应提前谋划，重视相关资料收集和做好疫病监测。

4 结论

在4年的猪伪狂犬病净化过程中，通过gE 抗体抽检和全群采样检测，gE 抗体检测都为阴性，抽检gB 抗体合格率都大于90%，且在临床观察中，未发现猪伪狂犬病临床病例。此外，加以完整的健康巡栏、诊疗、无害化处理、引种、淘汰、销售等记录和科学的生产数据及实验室检测等的佐证，较为全面反映了种猪场猪伪狂犬病的监测净化情况，严格落实重大动物疫病防控措施，该种猪场于2022年通过“国家级猪伪狂犬病动物疫病净化场”评估认证，实现猪伪狂犬病的免疫净化目标。