馥芳艾纳香组培快繁体系的初步研究

黄若干 周淑瑶 蓝晓东 江紫薇 吴禄祥

1.广西白云山盈康药业有限公司，广西 南宁 530002；2.广东汉潮中药科技有限公司，广东 广州 510145

0 引言

馥芳艾纳香（Blumea aromaticaDC.）为菊科艾纳香属的粗壮草本或亚灌木状的植物，全草可入药，味辛、微苦，性温，具有祛风消肿、活血止痒的功效，主治风湿关节痛、湿疹、皮肤瘙痒及外伤出血等［1］。馥芳艾纳香主要分布于我国云南省、四川省、贵州省、广西壮族自治区（以下简称广西）等地，多生长于低山林缘、荒坡或山谷路旁［2］。馥芳艾纳香在广西有着悠久的用药历史，民间常用于风湿骨痛、皮肤瘙痒等症的治疗，广西白云山盈康药业有限公司以馥芳艾纳香为主药开发了风湿骨痛纯壮药制剂——华佗风痛宝片（胶囊）、祛风湿药酒等品种。近年来，随着市场和产业的发展，馥芳艾纳香市场需求量逐年增加，加剧了人们对馥芳艾纳香野生资源的过度开采。在自然条件下馥芳艾纳香种子发芽率极低，种子寿命较短，不利于馥芳艾纳香的推广种植。因此，资源紧缺现已成为制约馥芳艾纳香药材及制剂产业发展的关键问题之一［3］。

目前，国内尚未大面积开展馥芳艾纳香人工栽培，关于馥芳艾纳香人工栽培的研究报道也较少。因此，笔者以馥芳艾纳香种子为外植体，探索外植体消毒最佳时间，继代增殖、生根培养适宜的培养基，初步建立馥芳艾纳香组培快繁技术体系，为实现馥芳艾纳香大面积人工栽培生产、提高药材产量和品质奠定基础。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

2023年1月，于广西河池市采集馥芳艾纳香种子，要求采种母株生长健壮、无病虫害。种子采收后，晾晒干燥，筛除杂质，于阴凉处贮藏备用。

试验试剂有无水乙醇（分析纯），由天津市大茂化学试剂厂生产；氯化汞溶液（分析纯），由天津市富宇精细化工有限公司生产；α-萘乙酸（α-Naphthaleneacetic acid，NAA），由阿拉丁化学试剂公司生产；6-苄氨基嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA），由阿拉丁化学试剂公司生产；蔗糖，由天津市大茂化学试剂厂生产；琼脂，由天津市大茂化学试剂厂生产。

1.2 试验方法

1.2.1 培养基配制

以MS 为基本培养基，添加琼脂7.5 g/L、蔗糖30.0 g/L、pH 值调为6.0～6.2，配制分装后，于116 ℃、0.1 MPa的条件下灭菌30 min。

1.2.2 初代培养

将馥芳艾纳香种子用自来水冲洗5 min，滤纸吸干水分。于超净工作台中，将种子用75%乙醇浸泡30 s，再用0.1%氯化汞溶液浸泡消毒8 min，消毒时不断摇动烧杯。消毒后，用无菌水清洗3 次，每次清洗1 min，期间不断摇晃烧杯。将消毒后的种子接种于添加2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的1/2 MS 培养基中进行初代培养［4］。

1.2.3 继代培养

挑选健壮、长势较好的丛生芽，以MS 为基本培养基，探索6-BA（1.0、1.5、2.0、3.0 mg/L）和NAA（0.1、0.2 mg/L）不同植物生长调节剂组合（共8个处理）对馥芳艾纳香继代培养的影响。每瓶接种1 个丛生芽，每个处理接种20瓶，重复3次。

1.2.4 生根培养

挑选生长至1.5 cm 的健壮不定芽，将其接种于不同的生根培养基中进行生根诱导。以1/2 MS 为基本培养基，研究不同质量浓度的NAA（0.1、0.3、0.8、1.5、2.0 mg/L）对馥芳艾纳香生根培养的影响。每瓶接种1个不定芽，每个处理接种20瓶，重复3次。

1.3 测定项目及方法

1.3.1 继代培养阶段

接种20 d后，统计馥芳艾纳香的增殖系数、玻璃化率，观察不定芽的生长状况，筛选出馥芳艾纳香适宜的继代增殖培养基。

1.3.2 生根培养阶段

接种20 d后，统计馥芳艾纳香的生根率、平均主根数、平均主根长、平均株高，观察组培苗的生长情况，筛选出馥芳艾纳香适宜的生根诱导培养基。

1.4 数据处理

试验数据采用SPSS 28.0软件进行统计分析。

2 试验结果与分析

2.1 不同植物生长调节剂组合对馥芳艾纳香继代培养的影响

由表1 可知，不同植物生长调节剂组合下，馥芳艾纳香的继代增殖效果存在较大差异。各处理不定芽生长情况如图1 所示。以增殖系数为主要指标，发现H2处理馥芳艾纳香的增殖系数最高（9.4），且不定芽生长健壮，呈嫩绿色。其次为H3处理，增值系数为2.3。综合考虑馥芳艾纳香的增值系数及生长情况，最终选择添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的MS 培养基为馥芳艾纳香适宜的继代增殖培养基。

表1 馥芳艾纳香的继代培养效果

图1 不同植物生长调节剂组合下馥芳艾纳香生长情况

2.2 不同质量浓度NAA 对馥芳艾纳香生根培养的影响

由表2 可知，随着NAA 质量浓度的升高，馥芳艾纳香的生根率呈先下降后升高的趋势。F1、F2组培苗生长状况如图2 所示。其中，NAA 质量浓度为0.1、1.5、2.0 mg/L时，馥芳艾纳香的生根率均为100%，生根效果较好。以生根率为主要指标，综合考虑馥芳艾纳香组培苗的平均主根长和根的生长情况，最终选择添加0.1 mg/L NAA 的1/2 MS 培养基为馥芳艾纳香适宜的生根诱导培养基。

表2 馥芳艾纳香的生根培养效果

图2 不同质量浓度NAA处理下馥芳艾纳香生根情况

3 讨论与结论

近年来，馥芳艾纳香市场需求量不断增加，但馥芳艾纳香种子在自然条件下自我繁殖困难，且新优品种难以采用扦插、嫁接、播种等方式进行繁殖。一般通过组培繁殖技术实现具有优良特性的馥芳艾纳香种苗的培育。应用组培快繁技术可以短时间内生产出无菌、无毒、健康、性状一致的优质种苗，是解决馥芳艾纳香种苗短缺、实现规模化生产的有效方法之一［5］。

植物生长调节剂是促进植物组织分化的重要调节物质，不同组合及质量浓度的植物生长调节剂可能会刺激植物不同控制基因的酶类，从而影响植物内源激素的水平，进而影响植物不定芽的增殖效果和植株的生长状态［6-7］。因此，筛选适宜的植物生长调节剂组合及质量浓度是建立植物组培快繁技术的关键。此次研究发现，在馥芳艾纳香外植体诱导培养过程中，6-BA的质量浓度对外植体的增殖系数起着关键作用。外植体在诱导培养30 d 后，其增殖系数随着6-BA 质量浓度的增加而下降，说明高质量浓度的6-BA 不利于馥芳艾纳香的继代增殖。此次试验中，以增殖系数为主要指标，结合不定芽的生长情况，筛选出添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的MS 培养基为馥芳艾纳香适宜的继代增殖培养基。

植物生长调节剂的质量浓度也是影响植物组培苗生根的关键因素。此次研究发现，随着NAA质量浓度的升高，馥芳艾纳香的生根率和平均主根长均呈先下降后升高的趋势，最终筛选出添加0.1 mg/L NAA 的1/2 MS 培养基为馥芳艾纳香不定芽适宜的生根诱导培养基，组培苗的平均主根长达5.9 cm，且主根粗壮，有利于组培苗后期顺利经过炼苗阶段。

综上所述，馥芳艾纳香种子以75%乙醇和0.1%氯化汞溶液消毒后，于无菌条件下接种在添加2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的1/2 MS 培养基中进行初代培养可得到丛生芽。切下诱导出的丛生芽，将其接种于添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的MS 培养基进行继代培养，诱导形成不定芽。将不定芽接种于添加0.1 mg/L NAA 的1/2 MS 培养基中可诱导其生根。此次试验可为构建馥芳艾纳香组培快繁体系奠定基础。