绵羊胚胎移植技术

费椿尧

（甘肃省定西市安定区畜牧技术推广站，甘肃 定西 743000）

1 移植前准备

1.1 供体母羊与受体母羊 选择供体母羊应考虑其健康状况、妊娠史、遗传性状等，要求母羊在2～4 周岁内，具有较大的群体基数，以提升观察发情期的准确性。供体母羊膘情在70%左右，不宜过瘦，也不宜过肥。如果供体母羊处于哺乳期，必须提前断奶30 d，期间加强饲养管理，促进身体恢复。

受体母羊不需考虑遗传性状因素，只需要保证健康，繁殖性能良好即可。

1.2 胚胎移植季节 羊的发情周期会受外界环境的影响，尤其是气候条件的影响，气温、光照等条件的变化都会扰乱羊的发情周期。绵羊的发情周期具有明显的季节性，秋季是绵羊的发情季节，此时绵羊卵巢机能活跃度不断上升，卵泡发育成熟，会表现出发情的特征。其他季节绵羊卵巢机能下降，卵泡不发育，不会表现出发情状态。胚胎移植选择在绵羊发情季节进行效率更高。

1.3 供体羊授精 种公羊撤拴后隔离12 h再放入母羊群。此时处于发情期的母羊会与其进行交配，记录人员只需要记录交配羊的信息即可。完成一次交配后8 h 左右，再放入种公羊进行一次交配，直到母羊不再接受爬跨，以提升母羊受孕率。除采用自然交配方法，还可采用人工授精方法,如应用腹腔镜授精，直接将种公羊的精液输入母羊子宫角内，使母羊受孕率更高。保险起见，间隔12 h后可重新进行一次人工授精。

1.4 药品与手术工具 进行绵羊胚胎移植前准备好各种药品以及手术工具。药物的生产厂家应可靠，有效成分、含量准确合理。经过了实验验证的药品，整体性能更加稳定。相关药品包括肾上腺素、普鲁卡因、FSH（垂体促卵泡素）、PMSG（孕马血清促性腺激素）及常规的消毒液、止血药等。手术工具用前进行消毒，相关的手术工具包括外科手术剪、止血钳、镊子、缝合针及保定架等。

1.5 超数排卵 绵羊发情期内，通过注射一些激素药物，如上述FSH、PMSG，搭配阴道孕酮栓，降低羊发育卵泡的闭锁率，增加发育成熟卵泡的数量，让羊在发情周期内排出更多的成熟卵子。

1.6 同期发情 绵羊胚胎移植需要供体羊与受体羊身体情况保持一致，二者能够同期发情。一般情况下，二者发情时间越接近，胚胎移植成功率越高。胚胎移植后，所处的子宫环境与原子宫环境尽可能一致，胚胎才能更好地适应新的子宫环境，并继续生长发育，最终顺利产出。应用同期发情方法目前有两种形式，一种是延长黄体期，常用的方法包括孕酮直接注射法、小管埋植法等，二是缩短黄体期，可以采用氯前列烯醇等药物。

2 手术

2.1 准备工作 术前供体母羊、受体母羊禁食24 h，术前2 h禁止饮水。采用保定手术架对羊进行保定，羊处于仰卧体位，头倾斜向下45°～60°，将四肢捆绑牢固，避免手术时剧烈晃动。完成保定后备皮，备皮位置在羊乳房周围的腹部区域，先用肥皂水清洗，再将羊毛刮净，最后喷洒酒精进行消毒。备皮位置覆盖手术创巾，创巾用专用创巾钳固定。

在羊的乳静脉与腹中线区域切开皮肤以及连带的筋膜，然后用手术刀钝头一端将羊的腹直肌分离，露出腹股沟管位置。从该位置剖开羊的腹腔，注意切口不宜过大，否则不仅影响后续的伤口缝合，还会延长伤口愈合时间，增加术后感染风险。打开腹腔后，用食指与中指在羊的骨盆腔、膀胱周围进行摸索，找出子宫的位置，然后轻轻勾住子宫体，将子宫连带卵巢拉出，检查黄体的位置以及卵泡的大小，并做好信息记录。

2.2 冲胚 冲胚常用输卵管法和子宫角冲胚法。采用输卵管法时，从输卵管伞部喇叭口入手，插入头皮针，插入深度为2～3 cm，然后用钝圆夹子进行固定。冲卵管的一端连接头皮针，另一端与集卵器连接，然后用消毒注射器吸取5～10 mL左右的冲卵液，一只手捏紧羊的子宫角，另一只手推动注射器，将冲卵液注入集卵器。这种冲胚方法的优点是可提升卵的回收率，需要的冲卵液也较少，缺点是易出现输卵管伞部粘连问题。

应用第二种方法时，需用肠钳将羊的子宫角分叉位置夹住，然后用注射器吸入15～30 mL 冲卵液，再将冲卵针头插入子宫角尖端，并将针头与注射器进行连接，最后完成冲卵液的注入。随着冲卵液注入量增加，子宫角逐步撑大、膨胀，然后用冲卵针头插入肠钳上方，将冲卵液输入集卵杯内。采用同法对另一侧子宫进行冲卵。这种冲胚方法的优点是可减少对输卵管的损伤，缺点是胚胎回收率较低。

2.3 胚胎鉴别 完成冲胚后需要鉴别胚胎是否可以正常发育。如果发现胚卵裂球轮廓清晰，球体饱满、自然，表面光滑，表明是优质可用胚胎。如果胚卵裂球轮廓模糊，球体干瘪，表面有毛边，表明是劣质胚胎，不适合进行胚胎移植。

2.4 胚胎移植 绵羊胚胎移植有两种方法可供选择。

2.4.1 常规手术法 打开绵羊腹腔，掏出子宫与卵巢后，检查黄体发育状况，采用钝形针头对受体绵羊子宫角进行穿孔处理，然后将移植管通过子宫角的孔洞插入宫腔，通过移植管向受体羊子宫内注射胚胎，最后将子宫复位，并进行缝合。

2.4.2 腹腔镜法 即在腹腔镜的帮助下找到子宫后，从另一侧入手，将移植针插入腹腔直达子宫，完成胚胎注射。与第一种方法相比，其操作更简单，但要求操作人员具备丰富的经验，可以准确找出子宫的位置，并选择恰当的位置插入移植针。

完成胚胎移植后进行缝合，缝合要仔细，加强对子宫的保护。缝合前做好检查工作，然后采用2 层缝合法进行缝合，即缝合肌肉层后在缝合创口处撒一些青霉素、链霉素粉预防感染，再缝合皮肤层，最后用碘酒对缝合处进行消毒。如发生术后感染，需要重新缝合。重新缝合时，先用消毒纱布擦掉感染后产生的脓液，再用生理盐水对感染部位进行冲洗，最后进行全层间断缝合。完成缝合后，在感染处注入用蒸馏水稀释的青霉素、链霉素防重复感染，后续加强观察，做好抗感染工作，直到伤口愈合。

3 术后管理

3.1 术后饲养管理 供体羊与受体羊术后加强饲养管理，初期给予温饮水，并提供易消化的饲料，随着羊体逐渐恢复，可逐步补充一些全价饲料。饲料循序渐进添加，避免造成过食现象。术后可驱赶羊只适当运动，并加强观察，以及时发现异常情况。术后羊饲料中加入维生素，提升免疫能力，促进伤口愈合。只有保障羊只体况良好，移植的胚胎才能继续发育成活。

此外，还应加强返情观察。返情羊需重新进行移植，防止空怀。如果羊没有返情，需加强补饲，除饲喂全价优质饲料外，可在饲料中加入蛋白质、矿物质等，满足胚胎成长发育需求。羊妊娠前期防发生应激，应营造安静、舒适的环境，避免母羊发生流产，羊舍应宽敞，避免拥挤。

3.2 术后护理 供体羊排卵后，进行消除黄体处理，如进行手术缝合时，可注射前列腺素，预防供体羊卵巢上黄体过多，下一轮发情受到影响。此外，应等待供体羊自然发情后再进行下一次配种，如此更有利于供体羊身体恢复。

受体羊手术后，可以注射黄体酮，加强饲喂，以利胚胎着床发育。

防术后感染必须加强饲养环境的清理、消毒，可每天给羊注射抗生素，降低术后感染概率。如发现感染病例，可以延长用药期，加大用药量。