黔产何首乌品质研究初探

蔡沙沙,曾裔腾,邓向点,张兴钰,何银银,邹树良,张亚洲*

(1.贵州中医药大学 药学院 何首乌研究中心,贵州 贵阳 550025;2.贵州理工学院 食品药品制造工程学院,贵州 贵阳 550003)

何首乌始载于宋朝时期的《开宝本草》,药典记载何首乌为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb．的干燥块根,其味苦、甘、涩,性微温[1]。目前其产量仍以野生为主,主要在我国南方多山地区适应性较高[2-4]。何首乌根据炮制与否分为生熟两用,其生品和炮制品虽然化学成分上基本一致,而仅在含量高低上有所差异,但是临床应用上两者之间却存在毒性和功效不相同的情况[5-7]。化学成分总结发现已从生、制何首乌中分离出来约100多种化合物,主要类别包括二苯乙烯苷类、蒽醌类衍生物、黄酮与黄酮苷类、对苯二酚类以及聚合原花青素,还有少量的二苯乙烯苷二聚体、二蒽酮苷、卵磷脂和多种微量元素等[8-9]。何首乌相关的药理研究中发现对兔、大鼠、鹌鹑等动物模型有明显的降脂、抗衰老、提高免疫力作用[10-13]。其毒性反应主要体现在免疫应激反应、氧化应激反应、线粒体功能紊乱和影响肝药酶代谢功能的肝毒性[10-12]。贵州产何首乌由于生长年限及野生等原因质量为大家所认可。为了促进我省对何首乌药材相关发展,以及确认本省产何首乌质量情况,本研究拟从贵州省内何首乌的主要产区铜仁市生产的相关何首乌样品与购买的相关市售样品进行分析,旨在对后期本省何首乌生产与种植中药材的品质进行了解。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1260 series高效液相色谱仪;色谱柱:(柱号:51234-9;菲罗门公司);分析天平(型号BSA124S);鼓风型热风循环干燥箱(吴江富成烘箱设备制造有限公司);粉碎机(型号:ZH-100A)。

1.2 试剂

乙腈,甲醇,乙醇(HPLC级;天津富宇精细化工试剂有限公司);水为娃哈哈纯净水;磷酸;大黄素对照品,含量>99%;大黄素甲醚对照品,含量>98%;二苯乙烯苷对照品,含量>99%(均购于成都德思特生物技术公司)。

1.3 材料

样品主要收集于贵阳的药店、医院药房及合作单位铜仁市供销联社提供;均由张亚洲鉴定为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb．的干燥块根(详细见表1)。

表1 铜仁及市面上收集的何首乌及水分含量情况

2 实验部分

2.1 样品水分测定

水分测定参照2020年版《中国药典》附录0832第二法(烘干法)测定。结果见表1。

依据2020版《中国药典》中规定的水分生何首乌不大于10.0%,制何首乌不大于12.0%。结果表明生何首乌样品中的水分均不符合要求;制何首乌样品中除一品药业-制何首乌水分含量为15.26%不合格,其余均符合标准。

2.2 含量测定

2.2.1 二苯乙烯苷测定

2.2.1.1 色谱条件

流速为1.0 mL/min,流动相为V[A相(水)]∶V[B相(乙腈)]=80∶20,波长320 nm,进样量10 μL。二苯乙烯苷及样品色谱图见图1、2。

图1 二苯乙烯苷对照

图2 二苯乙烯苷-铜仁-(01样品)

2.2.1.2 对照品及样品准备

二苯乙烯苷对照样品准备:取二苯乙烯苷对照品精密称取加入稀乙醇制成0.2 mg/mL的溶液,即得。

何首乌样品准备:参照药典方法中进行配制后微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。按照色谱条件进样,测定。

2.2.1.3 二苯乙烯苷对照品标准曲线的绘制

分别精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液配置成八种不同浓度的溶液,分别吸取10 μL进样,按照色谱条件进行检测,以对照品的浓度为横坐标(X),峰面积(A)为纵坐标(Y),进行回归处理,得回归方程为Y= 3 379.6X+ 154.62(r= 0.999 7),表明二苯乙烯苷在0.234～7.02 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.1.4 二苯乙烯苷含量测定结果

样品中二苯乙烯苷含量测定结果见表2。

表2 样品中二苯乙烯苷含量

根据2020 《中国药典》一部中生何首乌对二苯乙烯苷的要求,不少于1.00%。结果所有批次样品中的二苯乙烯苷含量结果均为合格。

2.2.2 蒽醌的含量测定

2.2.2.1 色谱条件

流速1.0 mL/min,流动相为V[A相(0.1 %磷酸水)]∶V[B相(甲醇)]=20∶80,波长为254 nm,进样量20 μL。对照品及样品色谱图见图3、4。

图3 大黄素与大黄素甲醚对照HPLC图

图4 样品中大黄素与大黄素甲醚对照HPLC图

2.2.2.2 对照品及样品准备

对照样品处理[1]:精密称取大黄素、大黄素甲醚对照品适量,加入甲醇制成每1 mL含大黄素80 μg,大黄素甲醚40 μg的对照溶液,即得。

样品处理[1]:取收集的各何首乌样品粉末按药黄中方法配制后,用微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。

2.2.2.3 大黄素对照品标准曲线的绘制

分别精密把大黄素对照品配置成八种不同浓度的溶液,分别20 μL进样,按照色谱条件进行检测,以对照品的浓度为横坐标(X),峰面积(A)为纵坐标(Y),回归处理,得回归方程为Y= 3.691 7X- 36.262(r= 0.999 4),表明大黄素质量在21.25～1 700 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.2.4 大黄甲醚对照品标准曲线的绘制

分别精密把大黄甲醚对照品配置成八种不同浓度的溶液,分别20 μL进样,按照色谱条件进行检测,以对照品的浓度为横坐标(X),峰面积(A)为纵坐标(Y),进行回归处理,得回归方程为Y= 3.398 3X- 14.647(r= 0.999 2),表明大黄素甲醚在9.2～736 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2.2.5 大黄素和大黄素甲醚含量测定结果以及游离蒽醌的含量

测定结果见表3。

表3 样品中大黄素、大黄素甲醚和游离蒽醌的含量

根据2020 《中国药典》一部中生首乌测定结合型蒽醌总量计不少于0.05%;结果铜仁提供的何首乌(2)和它的何首乌(1-茎)为不合格外,其他均为合格。

制何首乌中游离蒽醌不少于0.10%;结果,制何首乌中共有3个批次未合格,分别为铜仁供销联社提供和一品药业所购。

3 结论与讨论

本次研究中铜仁提供何首乌二苯乙烯苷含量分别为4.48%,3.04%,铜仁何首乌的二苯乙烯苷含量属于较高水平;铜仁来源的制何首乌二苯乙烯苷含量分别为2.79%,3.65%,也比其他市售制何首乌样品高。通过实验结果可以得出生何首乌中二苯乙烯苷含量普遍要高于制何首乌中的含量,其原因应该是因为炮制中反复多次的高温加热的加工条件可能会使何首乌中二苯乙烯苷发生转化或降解。药典要求生何首乌结合蒽醌不少于0.10%,制何首乌中的游离蒽醌不少于0.10%。制何首乌中大黄素和大黄甲醚的总量大于生何首乌。一品药业制何首乌和铜仁自制何首乌的游离蒽醌量较小,更接近生何首乌中结合蒽醌的含量特征,可能原因是其炮制工艺未达到炮制要求;铜仁何首乌-1由于生长年限及野生等原因,其结合蒽醌(0.10%)满足制何首乌中相关要求标准,是否说明对何首乌中游离蒽醌的含量可通过栽培技术来控制其品质,甚至可达到制何首乌标准还值得进一步的研究;如果其质量标准一致,那么药理作用是否等同于制何首乌也值得关注。