石南藤与混淆品小叶爬崖香的鉴别研究*

胡玉洁,杜富强,谢军丽,龚小见,李 玲,马江雄,李 栋,汤 瑾,黄 健,范东生▲

(1贵州中医药大学 药学院,贵州 贵阳 550025;2贵州中医药大学第一附属医院 药学部,贵州 贵阳 550001;3贵州威门药业股份有限公司,贵州 贵阳 550018;4贵州师范大学 贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室,贵州 贵阳 550001)

胡椒属Piper约有2000多种植物,多为灌木或攀援藤本植物,少为草本或小乔木,分布于泛热带地区[1-2]。我国有60余种胡椒属植物,主要分布于我国台湾省以及我国东南至西南部各省[3],约20种有药用价值,具有祛风、除湿、散寒、止痛、活血、舒筋等功效,主要用于治疗风寒湿痹、跌打损伤、风寒咳嗽、脘腹冷痛、牙痛等病症[4]。

石南藤Piper.wallichii(Miq.)Hand.-Mazz为胡椒属植物,地上部分为药用部位,作为民族药石南藤药材基原植物之一,收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2019版),具有袪风通络、补肾壮阳、止咳平喘、活血止痛的功效;用于治疗风寒湿痹、腰膝酸痛、阳痿、咳嗽气喘、痛经、跌扑肿痛[5]。石南藤化学成分复杂多样,包括木脂素、新木脂素、生物碱和有机酸等[6-7]。毛山蒟Piper.martiniiC.DC.与石南藤非常相似,仅在于叶、雄花序长、总花梗长等稍有不同而已[8],但《中国植物志》英文版已将其并于石南藤中[9]。在贵州少数民族地区,同属植物小叶爬崖香Piper.sintenenseHatusima也被用作石南藤,具有祛风除湿、散寒止痛、活血舒筋的功效;主要用于治疗风寒湿痹、脘腹冷痛、扭挫伤、牙痛、风疹[10]。小叶爬崖香与石南藤在性状方面有一定差异性,但未见对显微鉴别和薄层色谱鉴别研究的报道。本文通过对石南藤和小叶爬崖香茎、叶切片和粉末显微特征及薄层色谱方法进行研究,期望为二者的准确和快速鉴定提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LaiKaDMi1显微镜(莱卡显微系统(上海)有限公司),稀甘油(分析纯,西陇科学股份有限公司),硅胶GF254薄层色谱(青岛海洋化工),暗箱三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)。

1.2 试剂

水合氯醛(分析纯,阿拉丁上海有限公司),间苯三酚(分析纯,上海源叶生物科技有限公司),浓盐酸(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),FAA固定液(每100 mL含福尔马林5 mL、冰醋酸5 mL、70%乙醇90 mL),无水乙醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),甲醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),正己烷(分析纯,天津市致远化学试剂有限公司),乙酸乙酯(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),丙酮(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),实验室制备futoquinol(纯度>95%)。

1.3 药材

本实验所用药材采集于贵州遵义、赤水和都匀等地,经贵州中医药大学药学院魏升华教授鉴定为石南藤Piperwallichii(Miq.)Hand.-Mazz、毛山蒟PipermartiniiC.DC和小叶爬崖香Piper.sintenenseHatusima的干燥藤茎(表1)。

表1 不同产地胡椒属植物来源信息表

2 实验方法

2.1 石蜡切片

取茎、叶切成一定规格进行固定,按常规石蜡切片法(取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片),制作石蜡切片,置显微镜下观察并描述各植物茎和叶组织特征[11-12]。

2.2 粉末鉴别

茎、叶粉碎,过5号筛,分别取少许置于载玻片上,以稀甘油直接制成装片,加2～3滴水合氯醛加热透化,制作茎、叶的粉末片,置于显微镜下观察拍摄及图像处理[12]。

2.3 薄层色谱鉴别

取样品粉末1 g,加无水乙醇50 mL,超声提取30 min,过滤,滤液蒸干,残渣加5 mL甲醇完全溶解,作为供试品溶液。另取futoquinol对照品2 mg,加5 mL甲醇使溶解,作为对照品溶液。按照薄层色谱法(通则0502)试验,分别吸取上述溶液1 mL,分别点于同一GF254薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯-丙酮(8∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,再喷以5%硫酸乙醇显色剂,加热至斑点显色清晰,置日光下检视。

3 结果

3.1 茎叶石蜡切片显微鉴别

3.1.1 茎石蜡切片显微特征

石南藤茎横切面:表皮细胞1列,类圆形,紧密排列;皮层较厚,皮层内无纤维;薄壁细胞大小差异明显,类圆形或多角形,排列紧密,不规则;外韧型维管束12～14个,外侧有半月形韧皮纤维,与束间石细胞群连接成环,木质部较小;髓部较宽,环髓纤维连接成环,髓内有维管束4～6个散在(图1中A和B)。

图1 茎横切面显微特征

毛山蒟茎横切面:表皮细胞1列,类圆形,紧密排列;皮层较厚含纤维,薄壁细胞大小差异明显,类圆形或多角形,排列紧密,不规则;韧皮部韧皮纤维较窄,与束间石细胞群连接呈环;木质部较宽大,导管多;外韧型维管束17～19个;髓部较窄,环髓纤维连接成环,髓内有维管束5～6个散在(图1中C和D)。

小叶爬崖香横切面:表皮细胞1列,类圆形,紧密排列,皮层较厚含纤维,薄壁细胞大小差异明显,类圆形或多角形,排列紧密,不规则;皮层较窄;外韧型维管束23～26个,韧皮纤维与束间石细胞群连接呈环;木质部较窄;髓部较宽,约占1/2以上,环髓纤维连接成环,髓内有维管束8～11个散在,髓维管束大小差异明显(图1中E)。

3.1.2 叶石蜡切片显微特征

石南藤叶表皮特征:叶表皮细胞存在大量非腺毛,非腺毛数量多,较短稍弯曲,壁薄(图2中A-C)。

图2 植物叶表皮显微图

毛山蒟叶表皮特征:叶表皮细胞含大量腺鳞;非腺毛多,长而弯曲,壁薄,分散,多数呈上尖下宽、基部稍圆的特征(图2中D-F)。

小叶爬崖香叶表皮特征:叶表皮细胞含腺鳞;非腺毛短而弯曲,壁厚,基部宽呈圆锯齿状(图2中G和H)。

3.2 粉末显微鉴别

3.2.1 茎粉末显微鉴别

石南藤茎粉末显微特征:粉末呈黄白色。薄壁细胞类方形,壁厚,壁孔明显;淀粉粒单粒或复粒;导管类型多样,常见螺纹、环纹、网纹、稀有具源纹孔导管;石细胞类方形或不规则形,壁厚,胞腔狭窄,孔沟明显;多细胞非腺毛较少,多碎断;纤维长梭形,多单个散在,壁厚,纹孔明显,偶见晶鞘纤维(图3A)。

图3 茎粉末显微鉴别图

毛山蒟茎粉末显微特征:粉末呈黄白色。薄壁细胞椭圆形,壁略厚,壁孔清晰;淀粉粒多为复粒;导管类型较多,以螺纹导管为主;石细胞短柱形,壁厚,胞腔较大;纤维多单个散在;多细胞非腺毛多碎断(图3B)。

小叶爬崖香茎粉末显微特征:粉末呈黄白色。薄壁细胞类方形,壁厚;淀粉粒多且多为单粒;导管以螺纹、环纹为主,偶见网纹;石细胞形态各异,壁厚;纤维束多单个散在,细长或呈规则长方形,壁薄;单细胞非腺毛多碎断(图3C)。

3.2.2 叶粉末显微鉴别

石南藤叶粉末特征:粉末呈黄褐色。薄壁细胞椭圆形,孔壁清晰;草酸钙方晶散在;淀粉粒单粒或复粒;螺纹、环纹、网纹导管散在;表皮细胞多边形紧密排列,不定式气孔;石细胞短柱形,壁较厚;多细胞非腺毛多碎断,纤维聚集,细长壁厚(图4A)。

图4 植物叶粉末显微鉴别图

毛山蒟叶粉末特征:粉末呈黄褐色。薄壁细胞类圆形,壁孔少;含草酸钙方晶和针晶,针晶数量多,成团或散在;淀粉粒多为复粒,偶见单粒淀粉粒散在;导管以螺纹、环纹为主;表皮细胞多边形紧密排列,不定式气孔,周围有棕色块集中;石细胞不规则型,数量少,非腺毛碎断,纤维多聚集,较细长壁厚(图4B)。

小叶爬崖香叶粉末特征:粉末呈黄褐色。薄壁细胞类圆形;草酸钙方晶散在;淀粉粒大量存在且多为单粒;导管较发达,具螺纹、环纹、网纹导管;表皮细胞多边形紧密排列,不定式气孔;石细胞长柱型,壁较厚;非腺毛完整,较小;纤维束多单个散在,较细长壁厚略卷曲(图4C)。

3.3 薄层色谱鉴别

石南藤和毛山蒟在与futoquinol对照品色谱相应位置上显相同的紫色斑点,而小叶爬崖香在该位置上未见紫色斑点(图5)。

图5 薄层色谱图

4 结论

石南藤和小叶爬崖香不仅在叶、花和果实等方面有一定的差别[13-14],本研究还发现二者在茎、叶显微结构有明显差别,如石南藤茎中髓维管束较少,大小均一,淀粉粒为单粒或复粒,非腺毛为多细胞非腺毛;而小叶爬崖香髓维管束较多,大小不等,淀粉粒多为单粒,非腺毛为单细胞非腺毛。建立了以futoquinol为对照品定容石南藤和小叶爬崖香薄层色谱鉴别方法,按照《中国药典》2010年版四部要求对方法的耐用性进行验证,方法重复性较好,此方法可有效的区分二者,为石南藤和小叶爬崖香的快速鉴别提供科学依据。