超高效液相色谱-串联质谱法同时检测预制菜中60 种药物残留的含量

◎ 林 绪，陈琼华，李冰虹

（广电计量检测集团股份有限公司，广东 广州 510065）

预制菜又称“方便菜”，一般是以各类农产品为原料，以调味料为辅料，经预选、调制等工艺加工而成的半成品或成品[1]。随着生活节奏越来越快，简单烹调就能食用的预制菜，对于时间紧凑、不擅长烹调的年轻人来说，越来越盛行[2]。预制菜中，蔬菜水果等原料会带入农药残留，肉蛋奶及水产品会带入兽药残留[3]，威胁人体的健康安全[4]。然而，目前预制菜缺乏药物残留的检测标准及相关安全标准[5]，在监管方面存在一定的困难。因此，本研究旨在开发一种经济、快速准确的预制菜药物残留检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

乙酸铵、甲酸，质谱纯（美国Thermofisher 公司）；乙腈、甲醇，色谱纯；N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基硅烷键合硅胶（C18）、中性氧化铝（ALN）、无水硫酸镁，分析纯（上海安谱实验科技股份有限公司）；氯化钠，分析纯（上海润捷科技发展有限公司）；实验用水为超纯水；标准品分别购于阿尔塔科技有限公司、德国 DrEhrenstorfer GmbH 公司、上海安谱实验科技股份有限公司。

AB 4500 超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪（配有ESI、Analyst 采集系统及MultiQuant 数据处理系统）（美国SCIEX 公司）；ME203E 电子分析天平、XS205DU 电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；TGL-21高速冷冻离心机（四川蜀科仪器有限公司）；T18 均质器（德国IKA 公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液配制

①分别准确称取60 种药物残留标准物质适量，用乙腈溶解并稀释成浓度为10 μg·mL-1的储备液。②分别吸取标准储备液，用空白基质提取液稀释至浓度为4、10、20、50、100 ng·mL-1。

1.2.2 前处理方法

①样品取可食部分，充分混匀粉碎后备用。②称取样品2.00 g（精确至0.01 g）于50 mL 离心管中，加入10 mL 0.8%甲酸水乙腈（体积比，下同）溶液，12 000 r·min-1均质提取1 min，加入1 g NaCl后剧烈振荡30 s，8 000 r·min-1离心5 min，放置冰箱-20 ℃冷冻1 h，立即取乙腈层1.5 mL 于装有50 mg ALN、30 mg C18、50 mg PSA 的净化管中，涡旋1 min，静置5 min，取上清液过0.22 μm，待测。

1.2.3 液相色谱条件

①XBridge BEH C18 色谱柱（2.5 μm，2.1×100 mm）；进样量5 μL；流速：0.35 mL·min-1；柱温40 ℃。②梯度洗脱：洗脱液A 为5 mmol·L-1乙酸铵含0.1%甲酸水；洗脱液B 为含乙腈。③洗脱程序：0～1.8 min，A 85%；1.8～5 min，A 85%～20%；5～8 min，A 20%～20%；8～8.1 min，A 20%～85%；8.1～10 min，A 85%～85%。

1.2.4 质谱条件

气帘气流速：30 L·min-1；雾化气流速（GS1）：55 L·min-1；辅助加热气流速（GS2）：55 L·min-1；碰撞气（CAD）：中等强度（medium）；辅助加热气温度：550 ℃；喷雾电压：5 000 V（ESI+）/－4 500 V（ESI-）；扫描模式：多反应监测模式。

2 结果与分析

2.1 流动相优化

为了获得良好的峰型和离子化效率，对比0.1%甲酸水-甲醇、0.1%甲酸水-乙腈、5 mmol·L-1乙酸铵含0.1%甲酸水-甲醇、5 mmol·L-1乙酸铵含0.1%甲酸水-乙腈、水-甲醇、水-乙腈。结果发现，5 mmol·L-1乙酸铵含0.1%甲酸水-乙腈作为流动相时，绝大部分药物残留响应较好，且峰型较好。因此，综合考虑，选此作为测试的流动相。在优化的色谱及质谱条件下，60种药物残留的总离子流色谱图见图1。

图1 60 种药物残留的总离子流色谱图

2.2 前处理条件优化

2.2.1 提取溶剂的选择及其条件的优化

相关研究表明，乙腈不仅是农药残留检测方法中的最优提取溶剂，也是兽药残留检测中的优选提取溶剂[6-7]。因此，本研究不再进行有机溶剂的对比实验，而是通过对比不用pH 的乙腈对药物残留的提取效果。本研究比较0.1%甲酸乙腈、0.3%甲酸乙腈、0.5%甲酸乙腈、0.8%甲酸乙腈、1%甲酸乙腈、0.5%氨水、1%氨水、3%氨水、5%氨水、8%氨水的提取效果，称取预制菜试样2 g 于50 mL 离心管中，以30 μg·kg-1进行加标回收实验（提取溶液未做净化）。60 种药物残留的提取效率见图2。

图2 不同提取溶剂平均回收率分布图

由上述数据可知，用0.8%甲酸乙腈作为提取溶剂时，有多种药物残留的回收率在60%～100%，效果最好。因此，采用0.8%甲酸乙腈作为60 种药物残留的提取溶剂。

2.2.2 提取方式的选择

目前，广泛应用于食品样品中药物残留分析的提取方法主要有微波辅助萃取[8]、高速匀浆提取[9]、超声提取[10]等。本研究通过微波辅助萃取的提取方法，发现微波提取时会使溶剂温度升高，使得热不稳定的药物残留降解。选取腐霉利、多菌灵、恩诺沙星阳性样品对比超声提取和高速匀浆提取的前处理方式，通过比较其回收率，结果显示，高速匀浆提取相比超声提取的效率更高，原因可能在于超声提取未能完全提取已经跟基质结合的药物，而高速匀浆提取时间快、能使细胞膜破裂至核分离，进而目标物更容易被提取。因此，本文选择高速匀浆提取的方式。

2.2.3 净化方法的选择及优化

一般预制菜都含有大量的蛋白质及油脂，而乙腈可以沉淀蛋白质，同时，冷冻可以去除一定量的脂肪和蛋白质。因此，本研究将乙腈提取液在-20 ℃以下冷冻1 h，发现脂肪和蛋白质会在提取液表面凝结成块状。通过对乙腈溶液氮吹后发现，对于油脂含量高的样品乙腈仍会溶解部分油脂。这说明，仅使用低温冷冻净化的效果不佳，仍需进一步净化。

为达到更佳的净化效果，对比净化填料PSA、C18、ALN、GCB单个及组合用量的净化效果，配比如下：

A.30 mg GCB+100 mg MgSO4

B.50 mg ALN+30 mg C18+30 mg PSA+100 mg MgSO4

C.100 mg ALN+50 mg C18+50 mg PSA+100 mg MgSO4

D.100 mg ALN+100 mg C18+100 mg PSA+100 mg MgSO4

E.100 mg ALN+30 mg C18+30 mg PSA+100 mg MgSO4

5 种组合填料对预制菜中60 种药物残留回收率的影响分布见表1。

表1 不同净化填料的净化效果表

通过比对实验，说明在0.8%甲酸水乙腈提取溶剂下，以B 组分散萃取净化填料，对于预制菜中60 种药物残留的净化效果和回收率最佳。同时，对比发现B 组跟E 组填料净化比较接近，而ALN 可以除去油脂，因此，对于油脂含量较大的样品，可适当增加ALN 的用量。

2.3 检出限和定量限

按本前处理在空白基质添加一定浓度的标液，以信噪比为3 时的浓度作为检出限，信噪比为10时的浓度作为定量限，60 种药物残留的检出限均≤20 μg·kg-1，定量限均≤50 μg·kg-1，检出限和定量限均较低。

2.4 方法准确度和精密度

以阴性样品小炒肉为基质，以50、100、150μg·kg-13 个添加水平进行添加回收率和精密度的实验。按试样制备的方法加入适量的对照品，按照优化好前处理检测方法进行平行测定6 次，计算回收率。结果表明，样品检测平行性良好，RSD 小于10%，回收率在60%～120%，符合相关方法验证要求。

2.5 实际样品测定

在市场采购了咖喱鸡、青豆炒肉、梅菜扣肉、牛肉牛筋方便菜、东坡扣肉、招牌卤肉各一批，按照该方法开展检测工作。结果显示，青豆炒肉检出噻虫嗪及灭线磷，含量分别为54 μg·kg-1和21 μg·kg-1，为不合格产品。因此，预制菜相关安全及检测标准亟须完善。

3 结语

本研究经过对预制菜样品提取方式及净化方式进行优化，有效除去了样品中的杂质，并采用空白样品基质配制标准曲线，利用液相色谱-串联三重四极杆质谱仪同时测定预制菜中60 种药物残留。本研究覆盖项目种类广，且灵敏度高、选择性好、结果准确可靠，可用于市场上预制菜的抽查，进而为预制菜的市场监管提供技术支持。