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miR-21 及miR-155 与妊娠期糖尿病患者血管内皮功能的相关性

2023-12-23陈丽霞禤文婷陈松锦黄广英张秀薇

分子诊断与治疗杂志 2023年11期
关键词:内皮受试者孕妇

陈丽霞 禤文婷 陈松锦 黄广英 张秀薇

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是孕妇在妊娠期间才会出现的一种糖尿病类型,通常孕妇在孕前糖代谢基本正常,是一种常见的妊娠期并发症。GDM 容易增加孕妇高血压、异常自然流产的发生率,同时影响孕妇的抵抗力,导致孕妇容易受到感染,甚至引起胎盘的基底膜发生改变,造成胎儿发育异常[1]。据国外流行病学[2]调查,GDM 的患病率最高可达30%,我国农村地区妇女2017 年至2019 年的GDM 患病率达12.08%,且近年来GDM 的发病率呈上升趋势[3]。GDM 也可引起血管硬化、斑块形成等情况,从而危害血管的内皮功能,引起患者血压异常[4]。微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)是一种由生物基因组编码、通过基因表达对机体进行调控的非编码RNAs。miR-21家族对于炎症反应和血管平衡调节有着重要的作用,近年来被广泛用于年龄相关疾病(包括糖尿病)的标志物研究。miR-155是由B 细胞整合簇转录的miRNA,在人体中的主要存在形式为miR-155-5p。本研究将通过观察孕妇血清miR-21及miR-155的水平,探究两指标与GDM 孕妇血管内皮功能的相关性,以期为今后GDM 孕妇的血管内皮功能研究提供一定的理论经验,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取东莞市人民医院2019 年9 月至2022 年8月收治的GDM 孕妇为研究对象,共102 例。纳入标准:①年龄分布21~35 岁;②符合《国际妇产科联盟妊娠期糖尿病实用指南》[5]所述标准,经临床诊断确诊为GDM 者;③孕期≥20 周或产后期≤12 周;④依从性良好,配合完成检查者;⑤精神、认知正常者,本人及家属熟悉本研究并自愿签署知情同意书。排除标准:①合并肿瘤、孕前糖尿病、孕前高血压、肾病及其他血管疾病;②合并妊娠期高血压等疾病者;③多胎妊娠者;④孕期服用影响糖代谢的药物者。根据患者的肱动脉的血管内皮依赖性舒张变化率(flow-mediated dilation,FMD)异常情况[6](FMD 值<6.0%为血管内皮功能异常,反之为正常)分为异常组(n=44)和正常组(n=58),同时选取同期于本院行体检的健康孕妇46名为对照组。本研究经东莞市人民医院伦理委员会审核批准开展。

1.2 方法

1.2.1 基本资料

收集所有受试者的一般资料,包括孕妇年龄、文化程度、身体质量指数(Body Mass Index,BMI)等资料。

1.2.2 血管内皮功能指标检测

采用高分辨率血管回声跟踪技术检测所有受试者的FMD,测量3 次,取其平均值。采用血压计检测所有受试者的平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),测量3 次,取其平均值。

1.2.3 血清指标检测

所有受试者于同一天清晨,空腹状态采集静脉血6 mL,平均分为两份,一份通过3 000 r/min,半径8 cm,进行离心10 min 后,分离提取上层血清,送至血检实验室进行空腹时血糖(Fasting Blood Sugar,FBS)、胰岛素(Fasting insulin,FINS)以及血清内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)水平检测。FBS 采用微量血糖仪检测;FINS、ET-1 均采用酶联免疫吸附法检测(试剂盒分别由上海酶联生物科技有限公司、上海酶仪生物科技有限公司提供)。

1.2.4 miRNAs 检测

取另一份空腹血液,于室温下静置30 min。通过4 450 r/min,半径10 cm 进行离心6 min,分离得到上层血清,密封后置于-80℃冰箱中,用于miR-21及miR-155的检测。采用RNA 分离试剂盒(由北京康润诚业生物科技有限公司提供)提取血清中的总RNA。通过分光光度计(型号BZ-SP-752,上海标卓科学仪器有限公司)检测后,将所提取的RNA 进行反转录,获得miR-21、miR-155的cNDA,以其为模板,进行荧光定量PCR 法检测二者的表达水平。各基因的引物序列见表1。

表1 基因引物序列Table 1 Sequence of gene primers

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料比较

两组年龄和BMI 比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组学历、血清FBS、FINS、ET-1、miR-21、miR-155、血管内皮功能FMD、MAP 比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 一般资料比较[n(%),()]Table 2 Comparison of general information[n(%),()]

表2 一般资料比较[n(%),()]Table 2 Comparison of general information[n(%),()]

2.2 GDM 组不同血管内皮功能情况血清学指标比较

两组GDM 孕妇的年龄、BMI、ET-1、MAP、miR-21、miR-155比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 GDM组不同血管内皮功能情况血清学指标比较()Table 3 Comparison of serologic indexes of different vascular endothelial function in GDM group()

表3 GDM组不同血管内皮功能情况血清学指标比较()Table 3 Comparison of serologic indexes of different vascular endothelial function in GDM group()

2.3 相关性分析

Pearson 相关系数模型分析结果显示,miR-21、miR-155与GDM 孕妇血管内皮功能FMD 呈正相关性(r=0.372,0.406,P<0.05)。

2.4 多因素logistics 回归分析

以FMD 的异常(无=0,有=1)为因变量,以年龄、BMI、MAP、FMD、血清ET-1、miR-21、miR-155水平为自变量,进行多因素logistics 回归分析。结果显示年龄、BMI、MAP、血清ET-1、miR-21、miR-155水平均是影响FMD 异常的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 多因素logistics 回归分析Table 4 Multi-factor logistics regression analysis

2.5 miR-21、miR-155 对GDM 孕妇血管内皮功能的预测价值

ROC 曲线显示,miR-21、miR-155及二者联合预测GDM 孕妇血管内皮功能的AUC 值分别为0.761、0.883、0.906(P<0.05)。见表5、图1。

图1 ROC 曲线图Figure 1 ROC curve

表5 miR-21、miR-155 对GDM 孕妇血管内皮功能的预测价值Table 5 Predictive value of miR-21 and miR-155 on vascular endothelial function in pregnant women with GDM

3 讨论

GDM 的危害较大,其不仅可对孕妇的身体造成巨大影响,也增加了胎儿畸形、巨大儿等疾病风险[7]。许翔等[8]的研究结果表明,GDM 可导致孕妇的血管内皮功能不可逆性损伤。对GDM 孕妇的血管内皮功能进行监测,有助于保障孕妇的健康,降低相应血管疾病的风险。miRNA 是一种小分子单链RNA,其对于生物体的生理活动具有重要意义。近年来,对于miRNA 的研究陆续展开,主要研究集中在其对炎症反应、糖尿病、癌症等领域。血管内皮细胞可分泌大量活性因子参与许多生理调控,其功能损伤是许多心血管疾病的关键形成步骤。有研究显示[9],miRNA 可通过参与血管内皮生长因子的调控,进而干预糖尿病和其并发症的发生和发展过程。

本研究结果显示,GDM 组的血清FBS、FINS、ET-1、miR-21、miR-155、MAP 均高于对照组,FMD低于对照组,这与桑艳红等[10]的部分研究结果相近。同时GDM 组的miR-21、miR-155存在过度表达现象,且miR-21、miR-155与GDM 孕妇血管内皮功能存在正相关性。miR-21可通过调控NOX4 氧化酶来参与糖尿病肾病的发生[11],还可负向调控磷酸酶张力蛋白来提高血管内皮生长因子的表达量[12],引起血管内皮功能的损伤。有研究[13]指出,miR-155可诱导胰岛β 细胞的凋亡和人血管内皮细胞的表达,引起冠状动脉粥样硬化。张琳等[14]的研究显示,妊娠期糖尿病患者的血管内皮功能差于健康孕妇,且孕妇血清miR-27、miR-34c的水平与胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)之间也具有一定的相关性,与本研究结果接近。

此外,本研究通过FMD 来划分GDM 孕妇的血管内皮功能情况时,发现异常组的年龄、BMI、ET-1、MAP、miR-21、miR-155均高于正常组。多因素logistics 回归分析结果显示,年龄、BMI、MAP、血清ET-1、miR-21、miR-155水平均是影响FMD异常的独立危险因素。ROC曲线显示,miR-21、miR-155及二者联合均可有效地预测GDM 孕妇血管内皮功能的损伤情况,具有一定的预测价值。

另外,本研究在收集所有受试者的一般资料时,发现GDM 孕妇的学历与健康孕妇存在差异。田美玲等[15]的研究报告指出,本科及以上学历的孕妇GDM 的发生趋势升高,可能与高学历孕妇的产检意识强烈有关。

综上所述,miR-21、miR-155在GDM 孕妇中存在过度表达现象,两指标与GDM 孕妇血管内皮功能FMD、ET-1、MAP 呈正相关。miR-21、miR-155及二者联合均对于GDM 孕妇血管内皮功能异常情况有一定的预测价值,可通过联合预测提高其精确度和敏感度。

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