血浆8-羟基脱氧鸟苷、丙二醛在川崎病冠状动脉损害及血管内皮功能障碍中的变化及意义

张慎荣 邵启民* 周芳 陈东 张琳

川崎病（kawasaki disease，KD）是一种以全身血管炎为主要病变的急性发热出疹性疾病，主要危害是冠状动脉病变（coronary arteries lesions，CAL）。随着治疗方案多样化［1-2］，川崎病急性期血管炎症反应得到有效的控制，但CAL 的发生率仍居高不下，约为20%左右［3］，可合并巨大冠状动脉瘤，远期动脉硬化、心肌缺血、心肌梗死等严重心血管事件的发生率也明显增加［4-7］，其机制尚不清楚。氧化应激可造成血管内皮细胞损伤与功能障碍［8］，被认为可能参与KD 的血管损伤过程［9］。8-羟基脱氧鸟苷（8-OHDG）、丙二醛（MDA）是氧化应激损伤的重要标志物［10］。肱动脉血流介导的血管扩张反应（flow-mediated vasodilation，FMD）可反映血管内皮功能状态。本文探讨KD 患儿血浆8-OhdG、MDA与冠状动脉损害及血管内皮功能障碍的相关性，为临床及早发现CAL、改善远期预后提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2021 年1 月至2022 年6 月本院住院治疗确诊为KD 患儿60 例为KD 组，其中男37 例，女23 例；发病年龄2 个月～9 岁1 个月。所有患儿均符合2020 年日本川崎病研究委员会修订的第六版诊断标准［11］，依据是否合并冠状动脉损害分为冠状动脉损害组（CAL 组，12 例）、无冠状动脉损害组（NCAL 组，48 例）。KD 合并CAL 诊断标准［12］：冠状动脉内径是相邻段的1.5 倍及以上（年龄≥5 岁），冠状动脉内径≥4.0 mm；冠状动脉内径Z 值≥2.0。另选取同期15例发热患儿为发热组（发热时间为5～10 d），其中男9例，女6 例；年龄3 个月～9 岁4 个月，病种包括急性上呼吸道感染（6 例）、急性支气管炎（4 例）、肺炎（5例）。健康体检儿童15 例为对照组（男9 例，女6 例；年龄5 个月～9 岁5 个月）。发热组、对照组与KD 组在性别、年龄构成上差异无统计学意义（P＞0.05）。均排除肝肾疾病及免疫功能缺陷等病患。本研究经本院医学伦理委员会批准，儿童监护人均签署知情同意书。

1.2 方法 （1）治疗方法：所有KD 患儿发热第5～10 天确诊后给予静脉注射丙种球蛋白（IVIG）2 g/（kg·d）；阿司匹林肠溶片30～50 mg/（kg·d）口服，体温正常3 d 后减量至3～5 mg/（kg·d）；NCAL 组予以阿司匹林维持口服6～8 周，CAL 组予以阿司匹林片持续服用直至冠状动脉恢复正常。KD 患儿分为急性期（IVIG治疗前）、缓解期（IVIG 治疗后4 周）、恢复期（出院后3 个月）。其中随机20 例KD 患儿IVIG 后给予维生素C 口服，因需排除药物干预因素影响，这些患儿缓解期及恢复期均不被纳入。（2）标本采集：清晨空腹抽取外周静脉血3 mL，2%乙二胺四乙酸钠抗凝，离心取上清液，-70℃冻存待测。血浆8-OHDG 测定采用双抗体夹心ABC-ELISA 法，血浆MDA 测定采用酶联免疫吸附（ELISA）法，酶标仪分别在450 nm、405 nm 处测定吸光值后计算。试剂盒均采自上海西唐实业有限公司（8-OHDG 试剂盒货号F02165、MDA 试剂盒货号F01963），严格按照试剂盒说明书操作。（3）超声检查：除常规进行心脏超声检查外，缓解期、恢复期KD 患儿及对照组儿童测定肱动脉血流介导的血管扩张反应（flow-mediated vasodilation，FMD），采用Philips EPIQ5型超声诊断仪，线阵探头频率5～18 MHz，在血管舒张末期测量肱动脉前后内膜间距离（肱动脉内径），记录患儿基础状态及反应性充血状态下右臂肱动脉二维图像及血流速度，肱动脉反应性充血前后的内径差除以基础状态时肱动脉的内径即为肱动脉FMD（%）。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计软件。符合正态分布计量资料以（±s）表示。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD 检验，方差不齐者进行Tamhane 检验。绘制ROC 曲线分析血浆8-OHDG、MDA诊断KD 并发CAL 的效能。FMD（%）与8-OHDG、MDA 的相关性采用Pearson 检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患儿血浆8-OHDG、MDA 水平比较 KD 急性期血浆8-OHDG、MDA 均高于KD 缓解期、KD 恢复期、发热组及对照组；KD 缓解期、KD 恢复期及发热组血浆8-OHDG 均高于对照组；KD 缓解期及发热组血浆MDA 高于对照组；KD 缓解期血浆8-OHDG、MDA 高于恢复期；差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组患儿血浆8-OHDG、MDA比较（±s）

2.2 CAL 组与NCAL 组血浆8-OhdG、MDA 水平比较 KD 急性期CAL 组血浆8-OHDG、MDA 高于NCAL组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 急性期CAL组与NCAL组KD患儿的8-OHDG、MDA含量比较（±s）

表2 急性期CAL组与NCAL组KD患儿的8-OHDG、MDA含量比较（±s）

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2.3 血浆8-OHDG、MDA对于诊断KD并发CAL的价值比较 以8-OHDG ≥1.241 ng/mL 作为KD 并发CAL 的诊断界值，ROC 曲线下面积为0.899，灵敏度为83.3%，特异度为91.7%；以MDA ≥0.456 nmol/mL 诊断KD 并发CAL 的界值，ROC 曲线下面积为0.748，灵敏度为100%，特异度为39.6%。见图1。

图1 血浆8-OHDG、MDA对于KD并发CAL预测界值ROC曲线比较

2.4 KD 缓解期、恢复期肱动脉FMD 与血浆8-OHDG、MDA 的相关性KD 缓解期、恢复期肱动脉FMD 分别为2.362%±0.734%、3.580%±1.142%，均明显低于对照组10.813%±1.465%，KD 缓解期肱动脉FMD 低于恢复期，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pearson 相关分析显示KD 肱动脉FMD 与8-OHDG、MDA 均呈负相关（r=-0.495，-0.357，P＜0.05）。

3 讨论

氧化应激是引起血管内皮细胞损伤的重要机制之一，氧化应激产生的过量活性氧攻击内皮细胞中的脂质、蛋白质及核酸、线粒体DNA，引起一系列的氧化损伤，导致过氧化产物堆积，造成内皮细胞损伤及炎症反应持续存在，继而引起后期血管内皮功能障碍及血管损伤［9，13］。研究发现内皮细胞炎症损伤和功能障碍参与川崎病的血管损伤过程，KD 患病后的儿童及成年人，不论是否合并CAL，均存在内皮功能障碍［8］。

8-OHDG 是活性氧攻击DNA 中的鸟嘌呤后的氧化产物，8-OHDG 水平不受饮食等因素的影响，是公认的DNA 氧化损伤的标志物；MDA 是生命体内脂质过氧化反应的终产物，可用来反映机体脂质过氧化损伤，也可间接反映细胞损伤程度。两者水平均可反映机体氧化应激状态，已被广泛应用和测定［14-16］。沙特阿拉伯儿童存在高水平的邻苯二甲酸盐暴露，其代谢物与氧化应激标志物——尿MDA 和8-OHDG 存在正相关［14］，提示存在较大的健康损害隐患。TANAKA 等［15］发现小鼠海马CA1 神经元在脑缺血后针对8-OHDG 的免疫反应水平增高，认为存在氧化应激。国内学者在KD 大鼠模型中发现了肺小动脉血管内皮损伤，并伴有MDA 升高，提示氧化应激损伤的存在［16］。以上研究均表明8-OHDG和MDA 是评价氧化应激的敏感指标和生物标志物。

本研究显示，KD 组血浆8-OHDG、MDA 在急性期、缓解期、恢复期均高于对照组，急性期明显高于缓解期及恢复期，提示氧化应激反应在川崎病急性期最为显著，血浆8-OHDG 恢复期仍高于对照组，表明从发生和发展，直到恢复期，氧化应激可能会持续存在。CAL 组血浆8-OHDG、MDA 明显高于NCAL 组，提示氧化应激反应在CAL 中更明显，氧化应激引起的内皮氧化损伤可能是造成KD 发生CAL 的重要因素。YAHATA 等［9］研究发现KD 患儿体内氧化应激长时间维持高水平状态，并发CAL 的患者除体内各种细胞因子、黏附分子及免疫细胞活性显著升高，氧自由基水平也明显超过非CAL 患者，认为氧化应激在川崎病血管炎症过程中不可忽视，推测氧化应激可能参与川崎病的血管损伤过程及CAL 发生，这与本研究结果一致。ROC 曲线显示，分别以8-OHDG ≥1.241 ng/mL、MDA ≥0.456 nmol/mL 作为KD 并发CAL 的诊断界值，两指标ROC 曲线下面积分别为0.899、0.748，8-OHDG灵敏度83.3%、特异度91.7%均较高，而MDA 灵敏度虽高，特异度仅为39.6%。CAL 组中合并冠状动脉瘤者3 例，血浆8-OHDG 均显著升高，最高达2.13 ng/mL，明显高于其他无冠状动脉瘤的CAL 者，而MDA 仅1 例明显升高。提示血浆8-OHDG 较MAD 对KD 并发CAL的诊断更为优越，8-OHDG 异常升高时需警惕冠状动脉病变尤其冠状动脉瘤的发生。CAL 组在恢复期仍有2 例存在冠状动脉瘤，1 例存在冠状动脉扩张，至缓解期仅1 例存在冠状动脉瘤，其余均已恢复正常，显示冠状动脉的损害可以长时间存在。

FMD 可反映内皮NO 的活性，测定FMD 可反映内皮细胞功能状态。PINTO 等［17］发现，用外周动脉张力计评估内皮功能，发病5 年以上的无CAL 的KD 患儿反应性充血指数较对照组降低，扩张指数无明显变化，68%患儿出现内皮功能下降。本研究发现KD 缓解期及恢复期肱动脉FMD 均明显低于对照组，缓解期低于恢复期，提示内皮功能障碍持续存在，恢复期虽然较缓解期有所好转，但仍为异常。肱动脉FMD 与8-OHDG、MDA 均呈负相关，血浆8-OHDG、MDA 恢复期仍高于对照组，提示KD 内皮功能障碍程度与氧化应激水平存在相关性，推测氧化应激可引起KD 血管内皮细胞损伤，直到恢复期氧化应激可能会仍持续存在，对KD 患儿均可能造成持续的血管内皮细胞损伤。

综上，8-OHDG、MDA 参与KD 各阶段血管损伤过程，并可能参与CAL 的发生。与MDA 相比，8-OHDG对于KD 并发CAL 的诊断价值可能更高。内皮功能障碍持续存在于KD 缓解期及恢复期，并与血浆8-OHDG、MDA 水平存在相关性。