泛素偶联酶E2C及非转移细胞基因2与乳腺癌临床病理特征关系及其在预后评估中的临床价值

沈苏琴 丁玲玲 汪晓曼

乳腺癌是一种高发于乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤[1-2]。目前,乳腺癌根治术、化疗、放疗是主要的治疗手段,但术后的局部复发、远处转移与耐药是导致病人死亡的主要原因,预后不理想[3-4]。基于此,探索发现有效的预后评估手段,指导临床医生对病人进行早期个体化干预具有重要的临床意义。人类泛素偶联酶E2C(UBE2C)是细胞周期蛋白和有丝分裂因子在泛素化修饰中必不可少的蛋白质,与肿瘤的分化程度、侵袭和迁移、增殖等恶性生物学行为密切相关[5]。非转移细胞基因2(NME2)是一种DNA结合蛋白,通过其DNA结合活性调节癌症转移相关基因的表达,从而参与癌症细胞的侵袭和迁移过程[6]。本研究通过检测乳腺癌病人组织中UBE2C、NME2水平,分析UBE2C、NME2表达与乳腺癌病人临床病理特征及预后的关系,旨在明确其在乳腺癌预后评估中的临床价值。

对象与方法

一、对象

2018年1月～2019年12月在我院收治乳腺癌手术病人127例,同期体检的51例健康女性为对照组。纳入标准:(1)术前未接受放、化疗和免疫治疗;(2) 经手术病理切片确诊为乳腺癌;(3) 均行根治性乳腺切除及淋巴结清扫术;(4) 术后严格按照乳腺癌诊疗规范进行相应治疗。排除标准:伴有其他恶性肿瘤及免疫系统疾病; 接受新辅助放疗、化疗; 临床资料、随访资料不完整。根据纳入、排除标准,共纳入127例乳腺癌病人,按照6∶4比例将病人分为建模队列(77例)和验证队列(50例)。乳腺癌组年龄30～73岁,平均年龄(45.78±10.46)岁;对照组年龄29～72岁,平均年龄(44.32±10.12)岁。两组研究对象基线资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会审核批准,且均获得病人知情同意。

二、方法

1.乳腺癌组织中UBE2C、NME2蛋白表达:采用免疫组化SP法。乳腺肿瘤组织出现棕黄色或棕褐色细颗粒样物质判定为阳性表达。染色强度评分:0分(无着色);1分(呈淡黄染色);2分(呈棕黄染色);3分(呈棕褐染色)。阳性细胞占比评分:0分(<5%),1分(5%～10%),2分(10%～50%),3分(51%～80%),4分(>80%)。细胞染色强度与阳性细胞占比乘积>6分为阳性表达,0～5分为阴性表达。

2.生物信息学分析:通过在线网站(http://gepia.cancer-pku.cn/)分析乳腺癌组织和正常乳腺组织中UBE2C、NME2表达。利用在线Kaplan-Meier Plotter(http://www.kmplot.com)分析UBE2C、NME2表达与乳腺癌病人生存情况。

3.随访:对乳腺癌病人进行术后随访,以第1次手术日期为随访开始时间,每3个月以电话形式或门诊复查形式进行,以2021年12月为随访截止日期,随访结局变量为预后不良包括乳腺癌复发、转移、死亡,其余为预后良好。

三、统计学分析

采用SPSS 23.0软件对所得数据进行分析,计数资料以例(%)表示,采用χ2检验。多因素Cox回归模型分析影响乳腺癌不良预后的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线对乳腺癌预后的诊断效能进行评估。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.在线GEPIA数据库分析UBE2C、NME2的表达见图1。 结果显示,乳腺癌组织中UBE2C和NME2表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。

2.临床乳腺癌组织中UBE2C、NME2表达见表1。结果表明,乳腺癌组织临床病理特征中,UBE2C、NME2的阳性表达率在不同淋巴结转移、临床分期以及病理分级的病人比较,差异有统计学意义(χ2=7.826,4.116,5.460,P=0.005,0.042,0.019;χ2=4.400,6.211,11.63,P=0.036,0.013,0.001)。

A:UBE2C蛋白的表达,与N组比较,aP<0.05;B:NME2蛋白的表达,与N组比较,bP<0.05 (BRCA:乳腺浸润癌;T:乳腺癌组织,N:正常对照组织)

表1 乳腺癌组织中UBE2C、NME2表达与临床病理特征的关系(例,%)

3.UBE2C、NME2表达与乳腺癌病人生存曲线关系见图2。在线分析结果表明,随着UBE2C和NME2表达水平的增加,病人的生存率均显著降低,差异有统计学意义(P分别为0.029,0.013)。

4.多因素Cox回归模型分析影响乳腺癌不良预后的危险因素:变量赋值情况见表2。结果显示,淋巴结转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级G3级及UBE2C阳性表达、NME2阳性表达是乳腺癌病人不良预后的危险因素(P=0.009, 0.034, 0.023, 0.038, 0.020, 0.034)。构建乳腺癌不良预后风险预测模型:Z=1.259+0.701X1+1.007X2+0.790X3+1.120X4+1.123X5,其中,X1为淋巴结转移,X2为临床分期,X3为病理分级,X4为UBE2C阳性,X5为NME2阳性。见表3。

表2 变量赋值情况

A:UBE2C表达与乳腺癌病人生存曲线分析,P=0.029;B:NME2表达与乳腺癌病人生存曲线分析,P=0.013

表3 多因素Cox回归模型分析影响乳腺癌预后的危险因素

5.乳腺癌不良预后风险预测模型效果见图3～4。使用ROC曲线对模型的预测能力进行评估,模型组曲线下面积(AUC)为0.835[95%CI(0.758～0.894),P<0.000 1],以Youden指数最大值(0.681 4)为最佳临界点,该预测模型灵敏度为0.740 3,特异度为0.941 2;验证组AUC为0.826[95%CI(0.693～0.919),P<0.0001],以Youden指数最大值(0.720 0)为最佳临界点,灵敏度为0.880 0,特异度为0.840 0,提示模型对乳腺癌不良预后预测效果较好。

图4 乳腺癌不良预后验证组ROC曲线(AUC:曲线下面积,P<0.001)

讨论

随着分子肿瘤病理研究的快速发展,多种生物学标志物被证实参与恶性肿瘤的发生、发展,并与肿瘤细胞的侵袭和迁移、增殖、分化等过程密切相关。因此,监测相关生物标志物对于肿瘤病人预后评估具有重要的临床指导价值[7-8]。乳腺癌是一种异质性肿瘤,不同表型的乳腺癌病人,其临床表现、治疗结局和预后存在显著性差异[9-11]。最新研究报道表明,UBE2C与非小细胞肺癌顺铂耐药性有关,沉默UBE2C基因可提高非小细胞肺癌化疗药物的敏感性[12]。在直肠癌中,miR-381通过靶向调控UBE2C促进直肠癌的进展[13]。有研究证实,NME2高表达于多种肿瘤组织,与恶性肿瘤细胞分化、侵袭和迁移具有高度相关性[14]。研究显示,慢病毒沉默NME2基因,肝癌细胞致瘤能力显著降低,其参与肝癌的发生发展[15]。因此,可将UBE2C和NME2作为评估肿瘤不良预后的重要指标。

本研究中,通过在线GEPIA数据库对UBE2C和NME2蛋白表达进行分析,数据提示乳腺癌组织中UBE2C和NME2表达水平均高于正常对照组织。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,随着UBE2C和NME2表达水平的增加,病人的生存率降低,且危险率(HR)分别为1.4、1.5,提示UBE2C和NME2升高是乳腺癌病人不良预后的重要风险因素。进一步分析显示,UBE2C和NME2阳性表达与乳腺癌病人的淋巴结转移情况、临床分期、病理分级密切相关,这与之前其他学者研究报道相一致。基于此,我们推测UBE2C,NME2是潜在乳腺癌病人不良预后评价指标。

最后,本研究结果表明,淋巴结转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期及病理分级G3级,UBE2C阳性表达、NME2阳性表达是乳腺癌病人不良预后的危险因素,由此构成乳腺癌预后评估模型,模型组AUC为0.835,灵敏度为0.740 3,特异度为0.941 2,而验证组AUC为0.826,灵敏度为0.880 0,特异度为0.840 0。提示构建乳腺癌预后模型具有良好的诊断效能,进而对乳腺癌的治疗方案进行个体化指导,提升病人预后质量。本研究为单中心研究,纳入病例数偏少。后续研究需要联合多中心、将评估模型对乳腺癌的预后诊断效能进行大规模验证。

利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。

作者贡献声明:(1)负责设计论文框架,起草论文;(2)负责实验操作,研究过程的实施;(3)负责数据收集,统计学分析、绘制图表;(4)负责论文修改;(5)负责拟定写作思路,指导撰写文章并最后定稿