低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412对肺癌的诊断价值＊

孟文书 高 蔚

南京鼓楼医院集团宿迁医院 (江苏 宿迁 223800)

肺癌是呼吸系统最常见且严重威胁患者生命安全的恶性肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率[1-2]。肺癌病情隐匿，发病初期临床症状不典型，大部分患者在确诊时已为中晚期，错失手术治疗最佳时机[3]。因此，提高肺癌的早期诊断水平，可显著延长肺癌患者生存期改善患者预后。低剂量CT在低于常规CT剂量情况下，其敏感性与常规CT无明显差异，且在肺癌筛查方面优于胸部X射线检查，已成为肺癌诊断的重要手段[4]，其良性病变检出率高，但特异性较差。微小RNA(miRNA)是一类小分子RNA，在细胞增殖、分化、凋亡等过程中发挥重要作用，并参与肿瘤的发生发展，成为肿瘤治疗的潜在分子靶点[5]。马天宇等[6]研究发现，miR-940通过靶向抑制Cbl-b基因从而抑制肺腺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭。刘江帆等[7]研究显示，miR-412-5p通过靶向原钙黏蛋白10进而对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭产生影响。基于此，本研究旨在通过分析低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412对肺癌的诊断价值，为提高肺癌的早期诊断率提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料回顾性分析我院2020年7月至2022年11月收治的96例肺癌患者(肺癌组)临床资料，其中男性60例，女性36例，年龄41～72岁，平均(56.22±6.79)岁。

纳入标准：病理学检查诊断为肺癌；一般临床资料完整；神志正常，配合实验指标的观察。排除标准：合并其它恶性肿瘤；存在肝、肾等重要脏器功能不全者；有CT检查禁忌者；合并未控制的严重感染。另选取同期在我院诊治的96例肺部良性病变患者为对照组，其中男性52例，女性44例，年龄41～70岁，平均(56.17±6.41)岁。肺癌组与对照组患者在性别、年龄上差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究通过我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 低剂量螺旋CT扫描 使用Brilliance 64多层螺旋CT机对患者肺部进行扫描，扫描条件：辐射剂量20～40mSv，管电压80kv，管内流50mA，螺距1.0，重建层厚0.4～0.5mm，间距5mm，扫描时间6s，扫描范围：胸廓入口至肺底。扫描完成后对原始数据进行重建，将重建图像传输至工作站，选择多平面重组技术和容积再现对患者肺病变数量、形态学特征及位置进行观察。

扫描完成后由2名阅片医师给出诊断结果，符合《中国肺癌低剂量螺旋CT筛查指南(2018年版)》[8]中肺癌诊断标准即为阳性。

1.2.2 血清miR-940、miR-412测定 采集所有受试者入院次日清晨空腹肘静脉血3 mL，离心分离上清(3000r/min，15min)，血清于-70℃环境中保存待测。使用实时荧光定量PCR法对血清miR-940、miR-412水平进行测定，Trizol试剂提取总RNA，并将其反转录为cDNA，随后使用荧光定量PCR仪进行测定，引物序列见表1。反应条件：95℃预变性300s，95℃变性20s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共40个循环。内参基因选择U6，使用2-ΔΔCt法计算miR-940、miR-412相对表达水平，此实验重复3次，避免实验误差。

表1 引物序列

1.2.3 观察指标 比较肺癌组与对照组血清miR-940、miR-412水平；以病理检查为金标准，评估血清miR-940、miR-412、低剂量螺旋CT扫描单独及联合评估肺癌的效能，根据四表格法分析低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412诊断肺癌的准确度、特异度及敏感度。

1.3 统计学方法所有数据分析处理均采用SPSS 25.0软件进行。计量资料以()表示，肺癌组与对照组间血清miR-940、miR-412表达水平差异比较使用t检验；采用Kappa检验分析低剂量螺旋CT扫描单独及联合血清miR-940、miR-412诊断肺癌与病理结果的一致性；受试者工作特征曲线(ROC)评估血清miR-940、miR-412水平对肺癌的诊断价值，miR-940、miR-412联合诊断与其独立诊断肺癌的ROC曲线下面积(AUC)的比较行Z检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清miR-940、miR-412对比与对照组相比，肺癌组患者血清miR-940水平显著降低(P＜0.05)，miR-412水平显著升高(P＜0.05)，见表2。

表2 两组血清miR-940、miR-412水平对比

2.2 低剂量螺旋CT扫描对肺癌的诊断价值以病理检查结果为金标准，评估低剂量螺旋CT扫描对肺癌的诊断价值。96例肺癌患者中，有21例漏诊，漏诊率为21.88%。96例肺部良性病变患者中有25例误诊，误诊率为26.04%。低剂量螺旋CT扫描诊断肺癌的灵敏度为78.13%、特异度为73.96%，准确度为76.04%，且低剂量螺旋CT扫描诊断肺癌与病理结果具有中等的一致性(Kappa=0.521，P＜0.001)，见表3，低剂量螺旋CT扫描典型影像见图1A-B。

图1A-图1B 良性病变及肺癌患者典型病理影像结果；图1A 肺部良性病变；图1B 肺癌

表3 低剂量螺旋CT扫描对肺癌的诊断价值

2.3 血清miR-940、miR-412对肺癌的诊断价值ROC曲线结果显示，miR-940单独诊断肺癌的AUC为0.782(95%CI：0.714～0.850)，其敏感度、特异性分别为87.5%、53.1%，截断值为0.90；miR-412单独诊断肺癌的AUC为0.799(95%CI：0.737～0.861)，其敏感度、特异性分别为62.5%、56.2%，截断值为1.43。两者联合评估诊断肺癌的AUC为0.880(95%CI：0.830～0.930)，其敏感度、特异性分别为89.6%、68.8%；两者联合诊断的AUC显著大于miR-940单独诊断的AUC(Z=1.994，P=0.046)，miR-412单独诊断的AUC(Z=2.278，P=0.023)，见图2。

图2 血清miR-940、miR-412诊断肺癌的ROC曲线

2.4 低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412对肺癌的诊断价值以病理检查结果为金标准，评估低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412对肺癌的诊断价值。研究结果显示，低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412诊断肺癌的敏感度为91.67%，特异度为89.58%，准确度为90.63%，均显著高于低剂量螺旋CT扫描、血清miR-940、miR-412单独检测，且其联合诊断效能与病理结果一致性较高(P＜0.001)，漏诊率为9.41%，误诊率10.42%，均低于低剂量螺旋CT扫描、血清miR-940、miR-412单独检测，见表4、5。

表4 低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412诊断肺癌与病理结果对比

表5 低剂量螺旋CT扫描、血清miR-940、miR-412单独及联合诊断肺癌的效能分析

3 讨论

肺癌为世界范围内的恶性肿瘤，具有极高的发病率和死亡率，因此肺癌的早期筛查和诊断显得极为重要。传统的筛查方式为活检，而使用活检来筛查早期肺癌具有很多缺陷，因此，探索可行有效的早期肺癌无创或微创筛查方法，有助于肺癌早期诊断[9-10]。低剂量螺旋CT扫描在低于常规CT的剂量具有与常规CT相同的敏感性，在对肺癌进行筛查中优于胸透，且成为目前重要的筛查方法。然而，特异度较低，良性病变检出率较高[11-12]。在本研究中，以病理检查结果为金标准，低剂量螺旋CT扫描诊断肺癌出现21例漏诊，25例误诊，进一步分析显示，低剂量螺旋CT扫描诊断肺癌的灵敏度为78.13%，特异度为73.96%，准确度为76.04%，与王俊青等[13]研究结果相近。此外，低剂量螺旋CT扫描诊断肺癌与病理结果具有较高的一致性，表明低剂量螺旋CT扫描可在一定程度诊断肺癌的发生，但仍存在一定的局限性。为进一步提高临床诊断准肺癌的确性，本研究采用低剂量螺旋CT扫描联合肺癌患者血清学指标miR-940、miR-412，以期能有效提高肺癌的早期诊断率。

miRNA被定义为是一类具有18-25个核苷酸的进化保守的、小分子非编码RNA，通过与3'非翻译区(3'UTR)结合来调节靶基因，广泛参与细胞凋亡、分化、增殖及器官发育等生理病理过程，与多种肿瘤疾病的发生发展密切相关[14-15]。miR-940是位于16p 13.3的miRNA，在多种疾病中表达失调，而在癌症中的表达仍存在争议[16]。一方面，miR-940被发现在乳腺癌、子宫内膜癌中表达水平上调，表明miR-940发挥促癌基因作用[17-18]；而另一方面，miR-940在非小细胞肺癌中表达下调，发挥抑癌基因作用[19]。本研究结果显示，miR-940在肺癌患者血清中表达水平显著低于肺部良性病变患者，miR-940在肺癌中发挥抑癌作用。推测可能是由于泛素连接酶Cbl基因与miR-940存在靶向关系，miR-940通过下调Cbl-b进而发挥抑癌作用[5]。

miR-412作为miRNA家族成员之一，同样被发现在不同疾病类型中表现出不同作用[20]。Gai等[21]研究发现，miR-412在口腔鳞状细胞癌患者唾液中表达水平上调，表明miR-412在口腔鳞状细胞癌发挥促癌基因作用；另一方面，miR-412被证明可以抑制糖代谢、侵袭和血管生成，并通过靶向胶质瘤中的肌细胞增强因子2D来提高辐射敏感性[22]。本研究发现在肺癌患者血清中miR-412表达水平显著高于肺部良性病变患者，miR-412在肺癌中发挥致癌作用。原钙黏蛋白10(PCDH10)作为miR-412下游靶基因之一发挥抑癌基因作用，miR-412通过靶向PCDH10进而对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭产生影响[6]。

ROC曲线结果得出，血清miR-940、miR-412单独诊断肺癌的AUC均大于0.7。提示单纯血清学指标实验对肺癌均具有一定的诊断价值。另外三者联合诊断肺癌的敏感度、特异度及准确度均高于单一指标检测。表明低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412检测可显著提高肺癌的检出率，具有较高的灵敏度和特异度。

综上所述，肺癌患者血清中miR-940表达水平显著降低，miR-412表达水平显著升高，采用低剂量螺旋CT扫描联合血清miR-940、miR-412检测可显著提高肺癌的早期诊断效能。然而本研究存在样本量纳入较少、实验方案相对简单等不足，未来可扩大样本量，进一步完善实验设计，为临床早期有效诊断肺癌提供更可靠的理论依据。