VEGF、IL-5、IL-6在鼻息肉中的表达和意义

李元庆，付亚宁，张丽娟，王 瑛，葛 莉

（1.昌邑市人民医院耳鼻喉科，山东 昌邑 261300；2.昌邑市人民医院口腔修复科，山东 昌邑 261300；3.昌邑市人民医院查体中心，山东 昌邑 261300；4.陆军第八十集团军医院神经内科，山东 潍坊 261041；5.潍坊市人民医院病理科，山东 潍坊 261041）

鼻息肉（nasal polyps）属于上呼吸道慢性炎症性病变，是耳鼻喉科常见的疾病，主要表现为鼻窦粘膜广泛性水肿、急慢性炎症等。临床症状与息肉的位置、大小有关，较小的息肉可无明显的症状，较大的息肉常伴有鼻塞、头面部胀痛、流涕、嗅觉减退等。临床治疗以手术切除为主，但术后的复发率较高[1，2]。其发病率较高且术后有较高的复发率是临床治疗的难点[3]。鼻息肉的发病可能有鼻腔慢性炎症、微环境的改变及多种炎性因子有关[4]。寻求新的用于指导预防和诊断鼻息肉的生物标记物对于鼻息肉的基础研究和临床预防、治疗有重要的作用。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以与血管内皮细胞上表达的两种VEGF受体（VEGF受体1和VEGF受体2）相结合。它是参与血管生成的重要因子[5]。对于息肉的形成，必须有新生血管提供充足的血液和氧供[6]。研究报道[7-10]，VEGF在慢性炎症、息肉、肿瘤的形成过程至关重要。IL-5由活化亚细胞群Th2产生，主要介导体液免疫，是参与维持体内免疫平衡的重要细胞因子[11]。IL-5对B细胞和嗜酸性粒细胞增殖、分化有重要调节作用。趋化人嗜酸性粒细胞，延长成熟嗜酸性粒细胞的存活时间[12]。IL-6可以由淋巴样和某些非淋巴样细胞产生，过量的IL-6会刺激相关细胞，产生VEGF[13]。IL-6与多种疾病的发生具有明显关系，IL-6表达失调可引起许多疾病或导致疾病恶化，如自身免疫病、炎症、肿瘤等[14-16]。VEGF在鼻息肉、变应性鼻炎中异常表达有过相关报道[17，18]，说明VEGF与鼻息肉的发展有一定关联。但VEGF联合IL-5、IL-6检测在鼻息肉中的报道甚少，为此，本研究拟分析鼻息肉患者息肉组织中VEGF表达情况及血清中IL-5、IL-6表达水平的变化，进一步探讨VEGF、IL-5、IL-6在鼻息肉形成过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月-2021年12月在昌邑市人民医院耳鼻喉科就诊并做活检和/或鼻息肉切除的患者60例，其中鼻息肉者33例作为观察组；相对正常粘膜人群27例作为对照组。两组性别、年龄、血压比较，差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性，见表1。纳入标准：所有患者经病理活检确诊。排除标准：①进入研究前1个月内使用过全身或者吸入性糖皮质激素治疗者；②合并高血压、糖尿病、家族遗传性疾病；③合并其他免疫系统疾病；④合并其他良恶性肿瘤。本课题经过昌邑市人民医院伦理委员会批准通过，所有纳入研究者均知情同意并签署知情同意书。

表1 两组一般资料比较（n，）

表1 两组一般资料比较（n，）

1.2 方法

1.2.1 标本采集 组织标本采集：经手术切除的鼻息肉及活检鼻粘膜标本放入10%的中性福尔马林固定12 h。取材后经梯度酒精脱水、二甲苯透明行常规HE染色。血液标本采集：分别抽取两组清晨空腹静脉血5 ml，放入非抗凝试管，3000 r/min离心10 min后，留血清并标记，放入-80℃冰箱。

1.2.2 免疫组织化学染色及结果判读 VEGF兔抗人单克隆抗体（工作液浓度1∶200），购买自武汉三鹰生物科技有限公司。3～4 μm切片，免疫组织化学方法采用SP法，滴加DAB显色液观察显色。试剂盒购买自北京中杉金桥生物科技有限公司。对粘膜上皮及血管内皮VEGF的染色进行判读。染色阳性的细胞面积＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，分别计分0、1、2、3、4分。着色强度标记为-、+、++、+++，分别计分0、1、2、3分。将染色阳性的细胞面积分数和着色强度分数相乘，＜6分判读为低表达，≥6分判读为高表达。

1.2.3 血清IL-5、IL-6的表达检测及结果判读 由冰箱内取出存放的血清，放在冰上解冻，4℃离心机离心15 min，2000 r/min，取上清液，按照试剂盒说明书使用双抗体夹心ABC-ELISA法检测。试剂盒购买于武汉赛培生物科技有限公司。使用美国全自动酶联检测仪读取OD值，将所得OD值参照试剂标准曲线和标准公式计算数值所对的样品浓度。

1.3 观察指标 ①比较两组鼻粘膜组织中VEGF及血清IL-5、IL-6表达水平；②根据组织VEGF、血清IL-5、IL-6表达水平和常用临床指标将观察组分为VEGF低表达组，VEGF高表达组；≤40岁，＞40岁；男性，女性；血清IL-5低表达组（≤55 pg/ml），IL-5高表达组（＞55 pg/ml）；IL-6低表达组（≤50 pg/ml），IL-6高表达组（＞50 pg/ml）；根据病理类型分组，分为水肿型鼻息肉，腺体增生型鼻息肉。分析VEGF、IL-5、IL-6与临床病理参数（年龄、性别、病理分型等）的关系；③分析VEGF与IL-5、IL-6的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS 18.0分析数据，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验；计量资料以（）表示，行t检验；VEGF与IL-5、IL-6的关系使用Pearson相关性分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组VEGF、IL-5、IL-6表达水平比较 观察组鼻息肉组织中上皮细胞和血管内皮细胞VEGF和血清IL-5、IL-6的表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组VEGF、IL-5、IL-6表达水平比较[n（%），]

表2 两组VEGF、IL-5、IL-6表达水平比较[n（%），]

2.2 观察组血清VEGF、IL-5、IL-6表达与病理参数的关系 观察组血清VEGF、IL-5、IL-6表达水平与年龄、病理组织分型、性别均无关（P＞0.05），见表3。

表3 观察组血清VEGF、IL-5、IL-6表达与病理参数的关系（n）

2.3 观察组血清VEGF与IL-5、IL-6表达的关系 观察组鼻息肉组织中VEGF表达水平与血清IL-5（r=0.351，P=0.022）、IL-6（r=0.380，P=0.015）均呈正相关，见表4。

表4 观察组血清VEGF与IL-5、IL-6表达的关系（n）

3 讨论

鼻息肉是赘生于鼻腔或鼻窦黏膜上的良性病变，患者以鼻塞或鼻分泌物增多为常见表现，伴面部疼痛或肿胀感，嗅觉减退或丧失。鼻息肉为鼻部常见病，好发于成年人。研究发现[1，2]，鼻息肉与变态反应、炎症因子、嗜酸性粒细胞浸润等有关。小的鼻息肉可以用药物治疗，大的息肉需要手术治疗，但手术切除后易复发，其临床症状和术后易复发性影响鼻息肉患者的生活质量[3]。

VEGF定位于染色体6p21.3，主要促进血管生成[17]。组织的生长必须依靠新生血管生成来提供足够的氧气和营养物质来维持。VEGF在肿瘤组织中表达水平增高，提示预后不良。前期研究证实[17，18]，VEGF在鼻息肉组织中出现表达增多的现象。本研究结果也提示VEGF在鼻息肉患者组织中的表达高于对照组，说明VEGF的参与了鼻息肉的形成。

鼻息肉是常见的鼻部慢性炎症反应性疾病，其病因复杂，一般认为，鼻息肉是鼻粘膜发生炎症后，结缔组织的反应性生长，促进其生长的因素有细胞因子的作用、变态反应和嗜酸性粒细胞的聚集[4]。IL-5对B细胞和嗜酸性粒细胞增殖、分化有重要调节作用，可趋化人嗜酸性粒细胞，延长成熟嗜酸性粒细胞的存活时间[12]。过量的IL-6会刺激相关细胞，产生VEGF，进一步促进血管的形成[13]。前期研究报道IL-5、IL-6在鼻息肉、鼻窦炎等疾病中出现异常的表达[19-22]。本研究进一步探讨了鼻息肉组织中VEGF及血清IL-5、IL-6的表达水平，发现在鼻息肉组织中VEGF与患者血清中IL-5、IL-6的表达高于对照组，说明VEGF、IL-5、IL-6的异常表达也参与了鼻息肉的形成。

本研究发现，VEGF、IL-5、IL-6的异常表达在鼻息肉患者中与息肉组织类型、年龄、性别均无关，VEGF的高表达与IL-5、IL-6的表达变化有关，并且VEGF的表达与IL-5、IL-6均呈正相关。说明VEGF与细胞因子免疫平衡紊乱有关，并且与IL-5、IL-6起一定的协同作用。但是VEGF的异常表达影响Th1、Th2介导的免疫平衡，Th1、Th2介导的免疫平衡影响VEGF的表达，这还需要在今后的研究中继续探索。

综上所述，鼻息肉组织中VEGF及患者血清IL-5、IL-6的表达升高，VEGF的表达分别与IL-5、IL-6呈正相关。VEGF、IL-5、IL-6参与了鼻息肉的形成和发生发展。