尿核基质蛋白22 和非典型细胞参数在膀胱癌诊断中的临床价值

王月妹 李 磊

（上海市静安区市北医院检验科，上海 200435）

膀胱尿路上皮癌（简称膀胱癌）在男性中的发病率较高[1]。尿核基质蛋白22（nuclear matrix protein 22，NMP22）是目前临床应用较广的膀胱癌肿瘤标志物之一[2]，但其特异性较低。其他膀胱癌的肿瘤标志物也存在着一定的不足，目前尚无标志物能同时保证高敏感性和高特异性[3]。因此，膀胱癌诊断目前仍以膀胱镜和尿脱落细胞学检查为主，前者为侵入性检查，后者由病理科完成，耗时较长[4]。早期诊断膀胱癌有助于提高患者生存率、延长患者生存时间[5]。UF-5000尿有形成分分析仪可基于流式细胞术和荧光染色技术对尿液中的有形成分进行定量分析，其中非典型细胞（atypical cell，Atyp.C）参数可代表尿液中的非典型细胞或恶性上皮细胞[6-7]。目前，关于NMP22和Atyp.C参数联合检查用于膀胱癌诊断的研究较少。为此，本研究拟探讨NMP22和Atyp.C参数联合检测诊断膀胱癌的效能，为早期诊断膀胱癌提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2021年10月—2022年9月上海市静安区市北医院行NMP22检测和尿有形成分分析的患者3 288例，其中膀胱癌患者97例（膀胱癌组，均为男性，年龄55～84岁）、其他泌尿系统疾病患者3 191例（总对照组，其中男1 212例、女1 979例，年龄19～93岁）；将1 212例男性泌尿系统疾病患者作为男性对照组。膀胱癌依据膀胱镜和术后病理组织学检查确诊，根据美国癌症联合委员会2017年发布的TNM分期标准[11]将膀胱癌分为Ⅰ期（42例）、Ⅱ期（30例）、Ⅲ期（25例）、Ⅳ期（0例）。对照组疾病类型包括膀胱炎（647例）、泌尿道感染（1 277例）、尿路结石（1 135例）、尿路狭窄（86例）、前列腺癌（46例）。排除标准：年龄<18岁，尿液样本采集前2周内行泌尿系统相关的侵入性检查或有手术史，进行过放疗、化疗或免疫治疗等。本研究经上海市静安区市北医院伦理委员会批准（YL-20210702-10）。

1.2 方法

收集所有患者行膀胱镜检查前或术前的尿液样本。采用Alere NMP22 BladderChek（胶体金法，美国雅培公司）定性检测尿液NMP22。严格按试剂盒说明书进行操作。采用UF-5000尿有形成分分析仪（日本Sysmex公司）检测尿液有形成分，得出Atyp.C荧光强度，Atyp.C参数的参考区间为0[12]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0进行统计分析。呈正态分布的计量资料以±s表示，2个组之间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。呈非正态分布的计量资料以中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，组间比较采用非参数U检验，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验。计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验。采用Logistic回归分析建立NMP22和Atyp.C荧光强度的联合检测方程，采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价各项指标单项和联合检测诊断膀胱癌的效能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱癌组和对照组各项指标比较

膀胱癌组年龄显著低于男性对照组和总对照组（P<0.001）。膀胱癌组NMP22阳性率和Atyp.C荧光强度显著高于男性对照组和总对照组（P<0.001）。见表1。

表1 膀胱癌组和对照组各项指标比较

2.2 不同TNM分期膀胱癌患者NMP22阳性率与Apty.C荧光强度比较

NMP22阳性率（P=0.001）和Apty.C荧光强度（P<0.001）随TNM分期的增高而升高。见表2。

表2 不同TNM分期膀胱癌患者NMP22阳性率及Apty.C荧光强度比较

2.3 NMP22、Atyp.C单项检测和联合检测诊断膀胱癌的效能

联合检测方程为Logit（P）=2.329+2.634×NMP22（阳性=1，阴性=0）- 0.580×Atyp.C荧光强度。ROC曲线分析结果显示，以男性对照组为参考，NMP22、Atyp.C荧光强度单项检测和联合检测诊断膀胱癌的曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.794、0.757、0.867。以总对照组为参考，NMP22、Atyp.C荧光强度单项检测和联合检测诊断膀胱癌的AUC分别为0.787、0.752、0.861。见表3、表4、图1。

图1 NMP22和Atyp.C单项检测和联合检测诊断膀胱癌的ROC曲线

表3 以男性对照组为参考时NMP22、Atyp.C荧光强度单项检测和联合检测诊断膀胱癌的效能

表4 以总对照组为参考时NMP22、Atyp.C荧光强度单项检测和联合检测诊断膀胱癌的效能

3 讨论

NMP22是从凋亡的尿路上皮细胞中释放出的核有丝分裂器蛋白，膀胱癌患者尿液NMP22水平显著升高[3]。NMP22水平受多种因素，如炎症、感染、年龄、其他泌尿系统疾病的影响，因此特异性较低[8-9]。鉴于NMP22有较高的假阳性率，应慎重解释NMP22阳性结果。无创的尿液脱落细胞学检查因具有非侵入性和高特异性的优点而被广泛使用，但该检查需要连续3 d留取尿液样本，且需人工镜检，因此干扰因素较多，重复性较差[10]。

UF-5000尿有形成份分析仪可通过荧光信号区域的不同来识别细胞中不同的核酸含量，对尿液样本的要求较低，可以识别未染色、未离心的尿液样本[7]。因此，相对于尿液脱落细胞学检查，采用UF-5000尿有形成分分析仪检测Atyp.C参数更加快速、简单，重复性更好。有研究结果显示，Atyp.C参数在高危尿路上皮癌患者中有较高的敏感性和特异性，且与尿液脱落细胞学检查的结果高度一致[11]。根据世界卫生组织联合国际泌尿外科疾病咨询委员会发布的专家共识，Atyp.C参数符合作为膀胱癌生物标志物的标准[12]。REN等[11]以Atyp.C荧光强度≥0.10作为Atyp.C阳性的标准，其诊断膀胱癌的敏感性为59.0%、特异性为82.1%。但对于本研究人群，无论是否联合NMP22，以0.10为Atyp.C的临界值虽具有极高的特异性，但敏感度较低。由于本研究纳入的膀胱癌患者均为男性，因此为了减小偏差，除总对照组外，本研究还设置了仅含男性的对照组。本研究结果显示，分别以男性对照组和总对照组作为参考，以0.59作为临界值，Atyp.C荧光强度诊断膀胱癌的特异性分别为97.6%、97.0%，联合检测NMP22和Atyp.C荧光强度可显著提高对膀胱癌的诊断效能。目前，大部分研究报道的分子标志物仅在健康人群中具有良好的特异性，而对于除膀胱癌外的其他泌尿系统疾病患者的特异性普遍较低[12]。本研究结果显示，Atyp.C参数可以较好地识别NMP22的假阳性结果，可避免非必要的膀胱镜等侵入性检查。

本研究尚有一些不足之处：首先，本研究为单中心研究，纳入的膀胱癌患者仅97例，样本量较小，且均为男性，无女性膀胱癌患者。这与膀胱癌主要发生在男性人群中有关。有统计数据显示，男性膀胱癌的发病率是女性的4倍[13]。由于总对照组中女性患者所占比例（62%）更大，整体年龄高于膀胱癌组，且总对照组人群还包括多种其他泌尿系统疾病的患者，这可能对肿瘤标志物的敏感性、特异性产生了一定的影响[14]。为避免选择性偏差，本研究还设置了仅含男性的对照组进行分析。其次，由于本研究属于回顾性研究，不是所有患者都进行了尿液细胞脱落学检查，因此无法比较NMP22、Atyp.C参数与尿液细胞脱落学检查之间的一致性。再次，因本研究未检测其他肿瘤标志物，因此无法将NMP22、Atyp.C参数与其他肿瘤标志物进行比较。最后，尚无规范的标准操作程序来指导Atyp.C检测前的尿液样本预处理，国内外对于Atyp.C参数的临床价值也未达成共识。未来需要更大样本量的前瞻性、多中心研究分析NMP22和Atyp.C参数检测在膀胱癌中的应用价值。

综上所述，NMP22在膀胱癌诊断中表现出高敏感性，而Atyp.C参数则表现出较高的特异性，二者联用可显著提高对膀胱癌的诊断效能，为膀胱癌的早期筛查和临床决策提供指导。