1 株致狐狸腹泻性奇异变形杆菌的分离鉴定与耐药性分析

杨玉峰

（秦皇岛市抚宁区农业农村局，河北 抚宁 066300）

随着狐狸、 水貂和貉等毛皮动物的养殖数量和饲养的密度日益增加， 在毛皮动物养殖过程中的相关病毒性、 细菌性疾病及寄生虫病的的报道也逐渐增加， 经统计毛皮动物养殖过程中细菌病发展与流行占据较大比重。 奇异变形杆菌广泛分布于自然界中的一种条件致病菌，该菌可以通过多种途径污染肉、 蛋、 禽类等食物，人们食用了被奇异变形杆菌污染食品，可以引起食物中毒，导致其人腹泻、化脓性炎症及败血症等。 相关研究表明，奇异变形杆菌可以引起多种动物（猪、牛、羊、鸡、水貂、狐狸等）和人发病，该菌可以引起消化道、呼吸道、泌尿道及中枢神经系统等各种类型的感染、 也可以引起动物的阴道炎、子宫内膜炎和流产等。 近年来，关于毛皮动物（水貂、貉、狐狸）奇异变形杆菌感染报道越来越多。 本试验从患腹泻死亡的狐狸体内分离得到1 株奇异变形杆菌 （FNS-1 株），并对其进行致病性及耐药性分析， 以期为该地区狐狸源奇异变形杆菌的防控提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 病料来源

2023 年采集抚宁地区养殖场及散养户中患腹泻病死亡的狐狸的肝脏、肾脏、粪便等病料组织。

1.2 细菌分离与培养

对采集的患腹泻死亡的狐狸的病料组织，无菌条件下进行处理后， 先接种于麦康凯培养基中在37℃恒温中培养18～24 小时后， 挑取麦康凯培养基单个菌落接种于XLD 培养基进行鉴别培养，37℃恒温中培养18～24 小时后挑取典型的单个菌落进行革兰氏染色镜检和形态学观察。

1.3 生化试验鉴定

参照肠杆菌科细菌生化常规鉴定盒说明书，调整FNS-1 株菌液浓度为0.5 个麦氏浊度，无菌的条件接种于生化微量管中，37℃培养12～18 小时后进行生化试验鉴定。

1.4 致病性试验

将FNS-1 株接种于营养肉汤中对数期， 调整菌液浓度108cfu/毫升，攻毒组腹腔注射5 只昆明系小鼠，剂量为0.5 毫升， 对照组5 只小白鼠注射等量的无菌PBS。 试验期为7 天并观察小鼠发病情况。

1.5 药敏试验

分离菌株的药敏试验参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）2013 年推荐的药敏试验法标准进行试验和药敏试验结果判定。

2 结果

2.1 细菌分离培养

疑似奇异变动形菌株在麦康凯培养基长出大小不一圆形的半透明的菌落，具有腐臭味（图1A）；在XLD 培养基上长出有凸起、边缘光滑的中间带黑心的淡黄色菌落（图1B），革兰氏染色可见分离菌株成红色、不形成荚膜芽孢、为多样性的两端钝圆杆菌（图1C）。

图1 FNS-1 株菌落形态与革兰氏染色

2.2 细菌生化试验

FNS-1 株生化鉴定结果显示:V-P 试验、硫化氢、甲基红、尿素酶为阳性，分解葡萄糖、木糖、半乳糖并产酸产气，吲哚、氧化酶为阴性。 鉴定结果为奇异变形杆菌， 与奇异变形杆菌生化特性标准相似度为98%，FNS-1 株初步判定分离菌株为奇异变形杆菌。 与周祥莹等报到的貉源奇异变形杆菌的生化特性基本上一致。

2.3 致病性试验

损伤（见图2）；采集病理组织（肝脏、心血）分离得到沙门菌，其死亡率为80%（4/5）对照组小鼠健康存活，证明FNS-1 株具有致病性。

图2 小白鼠剖检变化

2.4 药敏试验

FNS-1 株对头孢噻呋、头孢噻肟、恩诺沙星环丙沙星4 种药物高度敏感，对氨苄西林、多西环素、林可霉素3 种药物中度敏感，对青霉素、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、庆大霉素5 种药物耐药（见下表）。

3 讨论

相关研究表明， 奇异变形杆菌广泛存在自然界中，尤其存在于多种动物和人的体表、黏膜及消化道， 该菌可以通过多种途径感染动物和人，尤其是免疫力低下，可以引起动物多种系统感染。 奇异变形杆菌对毛皮动物（水貂、貉、狐狸）的危害较严重，主要引起毛皮动物的腹泻、肺炎及母兽流产等， 给毛皮动物养殖业造成严重的经济损失。 因此，在毛皮动物养殖过程中，应该注意奇异变形杆菌的综合性防控， 以减少其的发生与流行。 本试验从采集的病料样品中分离到1 株奇异变形杆菌，命名为FNS-1 株，分离的FNS-1 株均可以引起小鼠死亡， 死亡率为80%。说明奇异变形杆菌是引起腹泻死亡狐狸的主要的病原。 因此，在狐狸养殖过程中，当发生腹泻病时应该进行有效诊断， 注意奇异变形杆菌的综合防控。 临床中主要用抗生素进行对奇异变形杆菌进行治疗， 随着临床中抗菌药物的滥用，造成严重的耐药性，给该病的治疗带来一定困难。 本试验采用K-B 药敏纸片法对FNS-1株进行耐药性检测。 结果显示，FNS-1 株对头孢噻呋、头孢噻肟、恩诺沙星等7 种药物敏感，对其他药物耐药。 在临床治疗狐狸奇异变形杆菌病时， 应该根据临床中药敏试验结果进行选择敏感的药物交替使用，配合环境消毒，加强饲养管理，才能提高治疗效果。

表 药敏试验结果