GC-ECD法测定地龙药材中17种有机氯类农药残留

李正刚 邵大志 张亦萌 马 彧 马金刚

1.吉林省四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000；2.四平市中心人民医院，吉林 四平 136000

现阶段，大量使用农药导致农药残留超标问题频频发生[1-2]，且大多数的农药都有难降解、易蓄积、毒性高、易污染等特点[3-4]。农药使用后，很大一部分农药会进入环境中，进而在土壤、水等环境介质中传播，并随着食物链的传递在生物体内累积，从而使整个生态系统的结构和功能遭到破坏。农药残留对食品安全性及人类健康产生的负面作用日益凸显出来。因此，为保证中药材用药的安全性。必须加强对农药残留量检测的力度。建立合适的分析方法来检测和量化中药材中的农药。并且制定合理的限值范围，提高中药材在实际应用过程中的安全性[5-7]。农药残留的检测方法有液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱(GC-MS)、液相色谱-紫外检测(LC-UV)、气相色谱-电子捕获检测(GC-ECD)等[8-11]。GC-ECD法为实验人员应用最多的测定方法。

地龙为常用动物类药材，最早在《神农本草经》就有记载[12]。地龙性味寒、咸，归肺、肾、肝经，具有清热定惊、通络、平喘、利尿的功效，常用于治疗高热、神昏、惊痫抽搐、肺热喘咳等症状。现标准收载在2020版《中国药典》一部，标准中安全性质量控制项目进行了重金属和黄曲霉毒素的限量控制检验[13]。经过文献调研，也未有关于农药残留的研究检测报道。市场上野外捕获地龙和人工养殖均有，环境中农药的使用可能造成地龙药材中农药含量超标。有害元素含量的多少，直接反映中药材的质量。本实验以不同产地及不同批次地龙为研究对象，采用GC-ECD法，测定了17种有机氯类农药的残留含量，为进一步提高动物药的质量，保证其用药安全提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 7890B型气相色谱仪(配备Ni-ECD电子捕获检测器，安捷伦科技有限公司)；BP211D型电子天平(北京赛多利斯仪器天平有限公司)；RE 52-99 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；TDL-5-A台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试验材料 有机氯农药混合对照品溶液(批号：610005-202003；特性量值：约10μg/mL，中国食品药品检定研究院)。丙酮、二氯甲烷、正己烷、硫酸(均为色谱纯)；氯化钠、无水硫酸钠(均为分析纯)；纯化水为自制。

本次收集到不同产地和批次的地龙药材共10 批，基本信息见表1。

表1 地龙药材样品基本信息表

2 方法与结果

2.1 仪器参数 OV-1701(30 m×0.32 mm×0.25 μm)毛细管色谱柱；载气：N2，检测器为Ni-ECD电子捕获检测器；进样口温度：230℃；检测器温度：300 ℃；流速：1.5 mL/min；进样模式：不分流进样；程序升温：60 ℃，保持 0.3 min，以 60 ℃/min 升至170 ℃，再以10 ℃/min升至220 ℃，保持10 min，再以1 ℃/min升至240 ℃，15 ℃/min升至280 ℃，保持5 min，进样量为1 μL。

2.2 混合对照品溶液的制备 精密量取17种有机氯农药混合对照品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用正已烷逐级稀释制成每1 mL分别约含2 ng、5 ng、10 ng、20 ng、50 ng、100 ng的溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品，粉碎成细粉(过二号筛)，取约5 g，置具塞锥形瓶中，加水30 mL，振摇10 min，使分散，精密加入丙酮50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再用丙酮进行补重，再加氯化钠约5 g，精密加二氯甲烷25 mL，称定重量，超声处理15 min，放冷，再用二氯甲烷进行补重，振摇使氯化钠充分溶解，静置，转移至具塞离心管中，离心5 min，使完全分层，将有机相转移至装有适量无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30 min。精密量取15 mL。置于40 ℃水浴中减压浓缩至约 1 mL，再加正己烷约5 mL，减压浓缩至近干，用正己烷溶解并转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，转移至离心管中，再加入硫酸溶液(9→10)1 mL，振摇1 min，离心 10 min，分取上清液，加水1 mL，振摇，取上清液，即得。

2.4 空白溶液 除不添加样品外，其余按“2.3”项下操作，制得空白溶剂溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 系统适用性考察 分别精密量取混合对照品溶液、样品溶液和空白溶液各1 μL，按“2.1”项下色谱条件进样。结果，17种有机氯农药色谱峰分离度均大于1.5，空白溶液无干扰。具体如图1所示。

A.对照品溶液(1.六氯苯；2.α-六六六；3.五氯硝基苯；4.γ-六六六；5.七氯；6.艾氏剂；7.β-六六六；8.氧化氯丹；9.δ-六六六；10.顺式环氧七氯；11.反式环氧七氯；12.反式氯丹；13.顺式氯丹；14.p，p’-滴滴伊；15.o，p’-滴滴涕；16.p，p’-滴滴滴；17.p，p’-滴滴涕)；B.样品溶液；C.空白试剂溶液

2.5.2 线性范围和检出限 精密量取“2.2”项下系列不同浓度的17种有机氯农药混合对照品溶液各1 μL，注入气相色谱仪。以进样浓度X(ng/mL)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，分别计算17 种农药的线性回归方程。结果，各组分线性关系良好。将17 种有机氯农药对照品溶液逐步稀释后进样测定，进样1 μL，以3倍基线噪声(S/N=3)确定方法的检出限(LOD)。结果见表2。

表2 回归方程、线性范围、检出限归纳表

2.5.3 精密度试验 取“2.2”项下17种有机氯农药混合对照品溶液(浓度约为20 ng/mL)，重复进样6 次，计算峰面积的RSD 值均小于2.3%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5.4 稳定性试验 取“2.2”项下17种有机氯农药混合对照品溶液(浓度约为20 ng/mL)，分别于0 h、4 h、8 h、16 h、18 h、24 h，进样1 μL，记录所测各组分峰面积。结果17种有机氯农药组分峰面积的RSD均小于3.3% (n=6)，表明17种有机氯农药在24 h内均稳定。

2.5.5 重复性试验及回收率试验 经考察10批地龙药材样品中均未检出17种农药残留，故本次实验重复性采用加样回收试验进行考察。取供试品粉末约5 g，各6份，精密称定，再精密加入17种有机氯农药混合对照品溶液0.25 mL，按“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下条件测定。计算回收率，结果平均回收率在81.2%～93.1%之间，RSD均小于4.0%(n=6)，符合规定。测定结果见表3。表明方法的重复性和回收率满足实验要求。

表3 重复性和回收率试验结果表

表3(续)

2.5.6 样品测定 应用本方法对海南、广东、广西、河南、湖北、浙江采集的10批次样品进行检测，均未检出17 种有机氯农药，其原因可能为现阶段国家对农药的使用管理日趋规范严格，环境中的农药残留显著减少，中药材种养植基地也更加注重生态化管理。同时本次收集的样品批次局限，更多样品量仍待研究考察。

3 结论

3.1 基线偏移 本次试验为达到17中测定成分均达到较好的分离效果，故采用程序梯度升温。基线因测试的温度的不断提高而缓慢向上偏移，经方法学验证，不影响最终结果的准确性，可以接受。

3.2 样品提取方法及检测方式 本次样品前处理方式考察了丙酮和二氯甲烷有机溶剂直接超声提取、固相萃取和快速样品前处理(QuEChERS)3种方法，3种提取法的平均回收率分别为≥81.2%、75.4%、78.7%。最终采用了方便、经济、实用的直接超声提取法，能较好地去除杂质，降低样品对于仪器的污染。

有机氯类农药的残留检测方法主要有气相色谱法-电子捕获检测法、气相色谱串联质谱法、液相色谱串联质谱法，相比与后两种检测方法，气相色谱在使用的普遍性和经济性上都有很大的优势，也是目前大部分生产企业配备的检测仪器。

综上所述，研究为地龙药材中多种有机氯农药残留的检测、风险评估等研究提供了经济、实用、可靠的检测方法，同时为监管部门监控当前地龙药材中的农药残留情况提供了一定参考数据[14-20]。