TIA人群中ApoE、MTHFR基因多态性与颈动脉斑块的相关性分析

郝萍萍,郭 倩,黄煜森,李帅红,方 乐*

(吉林大学中日联谊医院 1.神经内科;2.疼痛科,吉林 长春130033)

短暂性脑缺血发作(TIA)的发病机制目前尚未完全清楚,研究显示TIA患者早期卒中风险很高,颈动脉粥样硬化斑块及其导致的颅外段血管狭窄是TIA发病的重要原因之一[1]。既往研究表明,基因多态性在颈动脉粥样硬化过程中发挥着重要作用[2]。目前国内外对ApoE、MTHFR基因多态性与颈动脉斑块的相关研究仍存在争议[3-5]。本研究旨在通过探讨首发颈内动脉系统TIA人群中这两种基因型与颈动脉斑块的相关性,为指导临床预防及治疗颈动脉粥样硬化和TIA提供理论依据,从而减少TIA及脑梗死的发病率。

1 资料与方法

1.1 病例来源

选取2020年10月至2022年10月就诊于吉林大学中日联谊医院神经内科的首发颈内动脉系统TIA人群198例。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准:①年龄35～85岁,能配合要求完成检查者;②符合颈内动脉系统TIA诊断标准,头颅CT确诊无脑梗死及脑出血;③临床资料完整。

排除标准:①房颤、偏头痛、梅尼埃病等;②肝、肾功能不全,内分泌紊乱,家族性高脂血症等;③近期有服用叶酸及B族维生素药物者;④正在服用调脂药物者;⑤临床资料不完整者。

1.3 病例分组

所有患者统一由医院超声科完善颈动脉超声检查:颈动脉内中膜厚度(IMT)>1.5 mm纳入斑块组;IMT≤1.5 mm,纳入无斑块组。等回声、钙化、强回声视为非易损斑块,脂质含量低、回声不均匀的混合斑块视为易损性斑块。如被检者既存在易损斑块又有非易损斑块,归类于易损斑块组。根据颈动脉彩超结果将患者分为无斑块组(19人)、非易损斑块组(44人)、易损斑块组(135人)。

1.4 ApoE、MTHFR C677T基因多态性测定

从肘静脉抽取外周血(2 ml),放入含乙二胺四乙酸(EDTA)的采血管中,使用商业分离试剂盒从外周血中提取基因组DNA并分装,在-20℃下保存。PCR引物设计:采用Premier5.0软件设计,引物由长春迪安医学检验中心合成。扩增片段大小260 bp,MTHFRC677T两条引物序列分别为5’-TGGAAGGTGCAAGATCAGAG-3’和5’-TCACAAAGCGGAAGAATGTG-3’。ApoE两条引物序列分别为5’-TAAGCTTGGCACGGCTGTCA-3’和5’-ACAGAATTCGCCCCGGCCTG-3’。PCR反应体系为25 μL,常规配制。循环周期依次为92℃ 35 s、63℃ 45 s、74℃ 45 s,4个循环周期后74℃延伸7 min。扩增产物由识别多态性位点的特异核酸内切酶在37.5℃酶切1 h。2%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物,根据电泳条带区分基因型。

1.5 统计学分析

经过Hardy-Weinberg平衡检验,入选人群的ApoE基因、MTHFR C677T基因频率均符合遗传平衡定律。

2 结果

2.1 无斑块、非易损斑块及易损斑块组的一般资料、脂质水平、Hcy的比较3组患者的年龄、糖尿病病史、高血压病史、TG、总胆固醇、LDL-C、ApoE、HDL-C、Hcy水平差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 3组一般资料、脂质水平、Hcy的比较

2.2 无斑块、非易损斑块及易损斑块组ApoE、MTHFR C677T基因型及等位基因频率比较3组间ApoE基因型及等位基因分布频率差异有统计学意义(P<0.001);3组间MTHFR C677T基因型及等位基因频率差异有统计学意义(P=0.005),见表2。

表2 3组ApoE、MTHFR C677T基因型及等位基因频率比较

2.3 颈动脉斑块易损性的二元Logistic 回归分析将斑块易损性作为因变量,进行二元Logistic回归分析,结果显示,LDL-C是颈动脉斑块易损性的危险因素(OR值=1.741,95% CI 1.133～2.675,P<0.05);总胆固醇是颈动脉斑块易损性的危险因素(OR值=1.805,95% CI 1.233～2.641,P<0.05);MTHFR TT基因型是颈动脉斑块易损性的危险因素(OR值=2.885,95% CI 1.23～6.768,P<0.05);ApoEε4等位基因是颈动脉斑块易损性的危险因素(OR值=10.491,95% CI 1.355～81.231,P<0.05),见表3。

表3 颈动脉斑块易损性的二元Logistic 回归分析

3 讨论

TIA是常见的脑血管病之一,特点为反复发作、极易进展为脑梗死。颈动脉粥样硬化主要通过以下两个方面对TIA的发生产生影响:颈动脉狭窄情况、斑块的形态和性质,而二者又相辅相成。因此对于TIA患者,早期通过颈动脉超声检测其颈动脉斑块形成及狭窄情况,并对易损斑块进行及早干预及治疗,能极大程度上减少TIA的再发及脑梗死的发生。

研究指出,与脂质摄取及代谢过程相关的多种基因参与颈动脉粥样硬化[6]。其中,ApoE基因通过不同的结合位点维持脂蛋白的转化、吸收过程,故而会对脂代谢产生较大的影响。国外一研究发现ApoE2/E3基因型者的颈动脉IMT比ApoE3/E3基因型者更薄,斑块更少[7]。HANON等[8]研究则发现ApoE2/E2基因型者相比于ApoE4/E4基因型者患颈动脉粥样硬化的风险更高。一项韩国研究[9]认为,ApoEε4等位基因是大动脉粥样硬化型脑梗死患者复发的重要预测因子;ApoE基因不同表型与LDL-C受体的亲和力不同,ε4有升高总胆固醇、LDL-C的作用,而ε2的作用反之。本研究二元Logistic回归结果显示ApoEε4等位基因、总胆固醇、LDL-C是颈动脉斑块易损性的危险因素,且易损斑块组ApoEε4等位基因的分布频率明显高于非易损斑块组。ApoE影响AS易损性斑块的可能机制为:(1)通过参与调控载脂蛋白E影响血脂代谢;(2)在炎症反应中可促使泡沫细胞的形成[10]。

一项荟萃分析指出Hcy与颈动脉粥样硬化也有着紧密的联系[11]。参与Hcy代谢的酶类有很多种,其中最常见的和导致Hcy浓度升高的是MTHFR基因。在南亚和欧洲裔加拿大人中,血浆Hcy与MTHFR C677T基因多态性和颈动脉内膜厚度之间的关系已被证实[12]。日本的一项研究[13]结果证实了MTHFR基因多态性与颈总动脉粥样硬化之间的相关性,并提出危险因素-基因相互作用加速颈总动脉粥样硬化进程。本研究中回归分析显示,MTHFR TT基因型是颈动脉斑块易损性的危险因素。关于MTHFR C677T基因多态性导致颈动脉斑块易损性目前机制仍不清楚,一项研究认为由于MTHFR C677T基因突变导致血浆Hcy高浓度,在动脉粥样硬化过程中,Hcy通过诱导释放细胞因子、炎症细胞等破坏动脉内膜,还可通过拮抗一氧化氮扩张血管,导致内皮功能障碍。此外,Hcy还可通过氧化应激反应氧化LDL-C和斑块的其他成分,导致斑块破裂、脱落风险增加[14]。