2022年玉溪市禽流感监测与分析

罗晓燕,杨秋楠,宋诗雅,李晶,张晓舟,杨曦,杨耀兰,吕嵘

(玉溪市动物疫病预防控制中心,云南 玉溪 653100)

禽流感是由A型流感病毒引起的多种禽类急性感染和死亡的一种烈性传染病。根据禽流感病毒(AIV) 对禽类的致病性,可分为高致病性禽流感病毒 (HPAIV)与低致病性禽流感病毒(LPAIV)。目前只发现 H5 和 H7 亚型属于 HPAIV[1],可引起多种禽类急性感染和死亡,而其他所有亚型(LPAIV)对禽类均为低致病性,可引起发病禽轻度呼吸道症状和产蛋性能下降,但是在合适的条件下很容易变成HPAIV。近年来,不断有关于 LPAIV 流行的报道[2,3],其流行和污染面呈上升和扩大趋势。很多报道[4,5]显示,H9 亚型是影响我国养禽业的主要禽流感病毒亚型,在活禽市场非常流行。2003 年在我国香港地区还出现了人感染 H9N2 亚型禽流感病毒病例[6]。

为了解玉溪市禽流感流行情况,2022年对玉溪市辖区9个县(市、区)规模养殖场和活禽市场进行禽流感监测,以期掌握其在规模场与活禽市场之间传播的规律,为玉溪市禽流感防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2022 年,按照玉溪市农业农村局印发的《2022年玉溪市动物疫病监测与流行病学调查计划》,对玉溪市辖区 9个县(市、区)的规模养殖场和活禽市场进行监测,每月轮流对其中的3个县(市、区)(每个县(市、区)每个季度监测1次)各随机选择3个规模养殖场和1 个活禽市场进行采样。每个规模养殖场采集5份活禽咽喉(泄殖腔)棉拭子,5份环境棉拭子,5份运输工具棉拭子;每个活禽市场随机选择3个售卖活禽摊位,每个摊位采集5份活禽咽喉/泄殖腔双拭子样品;同时采集市场内环境棉拭子样品(案板、地面、污水等)5份,运输工具棉拭子样品(鸡笼、推车等)5份。每份样品装入1个离心管中,加入保存液低温保存送实验室检测。

1.2 主要仪器与试剂

NP968C型核酸自动提取仪,西安天隆科技有限公司产品;QuantStudio 7 Flex荧光定量 PCR仪,美国ABI公司产品。 病毒 DNA/RNA 核酸提取试剂盒(4.0),西安天隆科技有限公司产品;A型流感病毒荧光 RT-PCR检测试剂盒,宝生物工程(大连)有限公司产品;H5/H7/H9亚型AI三重荧光 RT-PCR检测试剂盒,中山大学达安基因股份有限公司产品。

1.3 检测方法

使用NP968C型核酸自动提取仪,参照试剂盒说明书,提取病毒RNA。采用宝生物工程(大连)有限公司 One Step PrimeScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time)流感病毒A型通用核酸检测试剂盒方法配制体系,在实时荧光定量 PCR仪上进行检测; 若检测为阳性,再用中山大学达安基因股份有限公司 H5/H7/H9 亚型AI三重荧光RT-PCR检测试剂盒进行分型检测。

1.4 统计分析

应用Excel 软件对数据进行整理,再通过SPSS 24.0 软件对阳性率进行统计分析。

2 结果

2.1 禽流感病毒通用型核酸监测情况

2.1.1总体监测情况

全年共采集9个县(市、区)32个乡(镇)62个村90个养殖场(户)及21个活禽市场,样品2280份,检出禽流感病毒通用型核酸阳性240份,分布于8个县(市、区)14个乡(镇)1个村1个养殖户17个活禽市场,场点阳性率16.22%(18/111),样品总阳性率为10.53%(240/2 280)。

2.1.2不同场点监测情况

从采集的规模养殖场1 530份样品、活禽市场750份样品中检出禽流感病毒核酸阳性:规模场1户4份阳性,场点阳性率1.11%(1/90),样品阳性率为0.26%(4/1530);活禽市场17个场236份阳性,场点阳性率80.95%(17/21),样品阳性率为31.47%(236/750),规模场和活禽市场不同场点间的场点阳性率和样品阳性率差异具有统计学意义(P<0.01)(表1)。结果显示阳性主要分布于活禽市场。

表1 玉溪市养殖场和活禽市场A型禽流感病毒监测情况

2.1.3不同样品类型监测情况

从采集的禽咽喉(泄殖腔)棉拭子940 份样品、环境棉拭子720 份样品、 运输工具棉拭子620份样品中检出A 型禽流感病毒核酸阳性,禽咽喉(泄殖腔)、环境、运输工具棉拭子阳性率分别为17.47%(164/940)、5%(36/720)、6.45%(40/620)。禽咽喉(泄殖腔)棉拭子阳性率较高,明显高于环境和运输工具棉拭子,不同样品类型间阳性率差异具有统计学意义(P<0.01)。从规模场中检出的4份阳性均为禽咽喉(泄殖腔)棉拭子。

2.1.4不同季度监测情况

不同季度统计结果(表2)显示2022年玉溪市每个季度都能检出禽流感病毒通用型核酸阳性,不同季度阳性率存在差异,场次和样品阳性率都是第二季度最低,随后逐步上升,不同季度间场次阳性率差异不具统计学意义(P>0.05),而不同季度间样品阳性率差异具有统计学意义(P<0.01)。

表2 不同季度A型禽流感病毒监测情况

2.1.5不同地区监测情况

不同地区统计结果(表3)显示,除元江县外,其余8县(市、区)均检出禽流感病毒通用型核酸阳性样品,但阳性率不一,场点阳性率无统计学意义(P>0.05)。样品阳性率澄江最高,通海次之,不同地区间样品阳性率差异具有统计学意义(P<0.01)。

表3 不同地区禽流感病毒通用型核酸监测结果统计

2.2 H5/H7/H9亚型分型情况

对检出的240份禽流感病毒通用核酸阳性样品,进一步做H5/H7/H9 亚型禽流感病毒核酸检测分型。结果:H9 亚型 AIV 核酸阳性 233 份,样品阳性率10.22%(233/2280),占比为97.08%(233/240);7 份未确定亚型,占比为2.92%(7/240);未检出H5和H7亚型AIV。

3 讨论

本研究对玉溪市辖区内 9 个县(市、区)的规模场和活禽市场开展禽流感监测,结果显示禽流感病毒在养殖环节检出率较低,且以H9亚型流行为主,未检出 H5、H7 亚型AIV 阳性。这可能与国家全面实施高致病性禽流感强制免疫(H5+H7二价疫苗)政策,且疫苗毒株更新及时,从而在养殖环节有效控制了疫病的发生有关。检出的4份阳性均为土杂鸡养殖场的禽咽喉(泄殖腔)棉拭子,这可能与土杂鸡饲养周期短、免疫次数少、养殖户防疫意识薄弱等因素有关,下一步应加强饲养土杂肉鸡H9亚型禽流感疫苗免疫,减少养殖环节禽流感病毒流行。

在活禽市场,活禽、市场环境、运输工具中均检出H9 亚型AIV,活禽阳性率高于环境和运输工具,差异显著,说明活禽市场就是一个禽流感病毒的“储存器、增殖器、混合器、放大器”,活禽市场成为禽流感病毒持续存在的高风险区域[7]。因此,应加强对流入市场家禽的监管和检疫,尽量避免外表健康的隐性感染家禽进入市场,同时,也应严格执行活禽交易市场“1110 制度”(一日一清洗、一周一消毒、一月一休市、过夜零存栏),有条件的市场可推行白条鸡上市。

从不同季节看,一年四季都能检出禽流感病毒,均维持在5%～15%,三、四季度最高,二季度最低,可能与玉溪天气有关,玉溪4—5月气温高,降雨少,空气干燥,7—8月进入雨季,湿度加大,秋冬季气温降低,利于病毒存活。因此,除应重点加强冬春季节的禽流感防控外,其余季节的防控也不可掉以轻心。

从不同地区看,全市除元江县外,其余8县(市、区)均检出阳性,污染面广,特别是饲养密度较大,交易频繁的县(区)阳性率较高。因此,各县(区)可根据各自活禽交易市场的H9 亚型 AIV 流行特点,结合自身实际,制定切实可行的综合防控措施。

本次监测的对象主要是鸡,未涉及其他禽类,监测结果未能全面反映AIV流行情况。下一步将继续加强对其他禽类(鸭、鹅)及其他环节的禽流感监测,以期充分了解和掌握本地AIV 流行趋势,提出有针对性的防控建议和措施。