南鹤虱水提物急性毒性实验初探

陈山珊 李羿武 张鸿燕 颜伟泓 赖晨楠 韩 丹 李玲燕 张伟云，*

1.厦门医学院药学系/厦门市中药生物工程重点实验室，福建 厦门 361023；2.福建医科大学药学院，福建 福州 350122；3.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210023

南鹤虱，其别名为野萝卜子或窃衣子，是伞形科植物野胡萝卜(DaucuscarotaL.)的干燥成熟果实[1]。性平，味辛、微苦；归脾、胃经；具有驱虫消积之效，常用来治疗蛔虫病、绦虫病、虫积腹痛等；用法：煎汤内服(6～9 g或入丸、散)；外用(适量，煎水熏洗)[1]。南鹤虱最早记载于《救荒本草》，而在《本草求真》中曾提到南鹤虱常作为鹤虱(北鹤虱)的替代品，在南鹤虱正式收载于《中国药典》(2005版)之前，南鹤虱的药用都比较混乱[2]。

纵观古今，在《中华本草》《中国药典》2020年版等少数书籍中有关于南鹤虱有小毒，用于煎汤内服的笼统描述[1，3]。虽然已有文献[4]表明南鹤虱的挥发油基本无毒性，但是，目前国内外有关南鹤虱的研究主要聚焦于南鹤虱挥发油的化学成分及其杀虫、抗菌、抗癌等活性[5]，以及改善认知功能障碍的作用[6]，而鲜有发现关于南鹤虱的毒性研究报道。随着南鹤虱的药理活性不断被挖掘，应用可能将越来越广泛，故研究其水提液的安全性对于南鹤虱在临床上用于煎汤内服治疗疾病具有重要意义。因此，本研究将初步探讨南鹤虱水提物的急性毒性，明确南鹤虱的毒性强弱或最大给药量，有利于临床上合理、安全使用南鹤虱提供参考。

1 材料与方法

1.1 药品、试剂与仪器

1.1.1 药品 实验所用南鹤虱(使用前过10目筛)采自中国河南省，并经厦门医学院向云亚老师鉴定。

1.1.2 试剂 5%苦味酸、纯水。

1.1.3 仪器 筛网(10目)；高速粉碎机(QEY-300 g，浙江屹立工贸有限公司)；智能恒温电热套(ZNHW，邦西仪器科技上海有限公司)；电子分析天平(CP124C，奥豪斯仪器上海有限公司)；旋转蒸发仪(N-1200B，上海爱朗仪器有限公司)；水浴锅(SB-1200，上海爱朗仪器有限公司)；电子天平(CP512，上海爱朗仪器有限公司)；12号灌胃针；解剖器械。

1.2 研究对象 SPF级ICR小鼠，雌雄各半，体重20～25 g，购于杭州医学院，由浙江省实验动物质量监督检测站进行质量检测。雄性小鼠合格证编号(20180006026555)、雌性小鼠合格证编号(20180006026556)。动物饲养房室内温度为(25±5)℃，相对湿度为50%～70%。实验期间，小鼠喂食普通饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司)。

1.3 研究方法 本实验的技术路线如图1所示，研究方法主要包括南鹤虱水提液的制备、小鼠急性毒性实验预实验、小鼠最大给药量实验、统计学方法四个方面内容。

图1 实验流程图

1.3.1 南鹤虱水提液的制备 取南鹤虱干燥原药材1000 g，粉碎，过10目筛，分为10份，每份约100 g，分别放入10个2000 mL的圆底烧瓶中，加10倍量纯水，浸泡1 h后，加热至沸腾，保持微微沸腾1 h，用8层纱布过滤，药渣再用纯水煎煮2次，每次煎煮至微沸后计时1 h，合并3次滤液，减压浓缩至以灌胃针能自由通过的最大浓度(3.0 g 生药/mL)的南鹤虱水提浓缩液。

1.3.2 小鼠急性毒性实验预实验 取8只小鼠，体重(20±2)g，雌雄各半，随机分为两组(空白对照组、给药组)，每组4只，给药前禁食不禁水 12 h，给药组以最大给药体积(40 mL·kg-1)和最大药物浓度(3.0 g生药/mL)灌胃给药，空白对照组灌胃等量纯水，观察小鼠的毒性反应症状及死亡情况，并连续观察7d。

1.3.3 小鼠最大给药量实验 取小鼠20只，体重为(20±2)g，雌雄各半，随机分为空白对照组和给药组2组，每组各10只，禁食不禁水12 h后，以最大浓度(3.0 g生药/mL)，最大体积(40 mL·kg-1)灌胃小鼠南鹤虱水提物浓缩液，连续灌胃2次(每隔8 h灌胃1次)，观察并记录灌胃给药后小鼠的毒性反应症状及死亡情况，连续观察14 d，每日14∶00开始记录存活小鼠体重和摄食量，观察有无死亡及是否有毒性反应症状。死亡动物即刻尸检，肉眼观察其主要脏器变化。

2 结果

2.1 小鼠急性毒性实验预实验 如表1所示，在预实验中，第一次灌胃后个别小鼠出现蜷缩、活动缓慢，但灌胃后约5 h恢复正常。观察7日，两组小鼠均无死亡，小鼠的外观、摄食摄水、行为活动、呼吸表现等未见异常，无法测出其LD50。

表1 预实验中南鹤虱水提物对小鼠7 d内中毒及死亡情况

2.2 最大给药量实验下南鹤虱水提物对小鼠体重变化的影响 如表2所示，与空白对照组(雌鼠)相比，给药组雌性小鼠的体重无显著性差异；与空白对照组(雄鼠)相比，给药组的雄性小鼠第2～9天的体重有显著性差异。给药组和空白对照组的雌性小鼠、雄性小鼠体重均有所增长，且变化趋势基本一致，表明以南鹤虱水提物的最大给药量灌胃小鼠，对其体重无不良影响。

表2 小鼠灌胃最大剂量南鹤虱水提物后14 d内的体重变化

2.3 最大给药量实验下南鹤虱水提物对小鼠摄食量的影响 如表3可知，空白对照组和给药组小鼠第1天的摄食量较低，可能是由于灌胃对小鼠的刺激，小鼠还未适应，导致第1天摄食量较低。空白对照组和给药组小鼠摄食量呈增长趋势，但无显著差异，无时间-效应关系，说明南鹤虱水提物对小鼠摄食量无显著影响。

表3 南鹤虱水提物对小鼠摄食量的影响 (n=5)

2.4 南鹤虱水提物对小鼠脏器的影响 如表4所示，可知与空白对照组小鼠相比，给药组雄性、雌性小鼠的心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、肺脏指数及肾脏指数均无显著性差异(P>0.05)；空白对照组及给药组小鼠的脏器均无明显肉眼可见的病变，表明以最大给药量的南鹤虱水提物灌胃小鼠并未对小鼠脏器造成明显损伤。

表4 南鹤虱水提物对小鼠脏器的影响

3 讨论

在急性毒性实验中，受试药以最大允许浓度和最大允许体积给药后，不能得到LD50，可以采取最大耐受量实验或最大给药量实验[7]。最大给药量是指在合理的最大给药浓度及给药容量的前提下，以允许最大剂量给予实验动物，观察动物的反应，估计其能达到人用量的多少倍，从而对其安全性进行评估[8]。

通过实验得出MTD可以大致推测新药的安全范围，有利于临床确定用药剂量[9]。除此之外，MTD也是研究药物急性毒性的重要参考信息。实验中未能测得南鹤虱水提物的LD50，故采取最大给药量法进行实验，观察小鼠反应症状并得出南鹤虱水提物给小鼠灌胃给药的最大给药量。

在实验中，小鼠能承受的最大给药体积为 40 mL/kg；将南鹤虱水提液浓缩至最大浓度(3.0 g 生药/mL)，此浓度的水提浓缩液能通过12号灌胃针头，如果浓缩液高于此浓度，提取物易堵塞灌胃针头而无法灌胃给药[10]。在最大给药量实验中，以南鹤虱水提浓缩液的最大给药量灌胃小鼠，给药后 14 d内小鼠未出现死亡或毒性反应症状。观察结束后，将所有小鼠处死并进行解剖，通过肉眼观察，空白对照组和给药组的雌雄小鼠的主要脏器器官均未发现肉眼可见的病理病变。脏器指数是实验动物某脏器的重量与其体重的比值，在正常情况下，比值比较恒定，而当动物染毒后，受损脏器重量可以发生改变，脏器指数也随之出现变化[11]。实验中将小鼠各主要脏器器官称重，计算脏器系数[12]。给药组的脏器指数与空白对照组相比，没有太大的波动，提示南鹤虱水提物的毒性较低或基本无毒。

实验记录了灌胃给药后小鼠每日的摄食量，通过比较发现，灌胃后小鼠的摄食量较空白对照组小鼠无明显差异，且由于小鼠的个体差异，摄食量偶有异常增加或减少，但无毒理学意义，故可初步判断南鹤虱水提物对小鼠的摄食量无明显影响。

实验中，在最大给药剂量下(240 g/kg)，南鹤虱水提物对小鼠无明显急性毒性反应，其耐受量是人用量的1600倍。结果表明南鹤虱水提物用药安全范围较宽，在规定剂量下无毒性，但仍需要进一步研究其水煎液中是否含有毒性成分并进行长期毒性实验，以期提供更充分、详实的实验数据，进一步为南鹤虱的临床用药提供更加可靠的参考。