不同处理措施对牛粪样中隐孢子虫卵囊杀灭效果观察

江 斌 陈秀琴 吴胜会 林 琳 张世忠 蔡 羲

（福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013）

隐孢子虫是一种主要寄生于人和多种动物胃肠道和呼吸道上皮细胞内的寄生性原虫。 目前已知的隐孢子虫基因型有70 多种， 主要有安氏隐孢子虫、牛隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫等[1]。 犊牛感染隐孢子虫后主要表现为精神沉郁、 厌食、腹泻， 排出的粪便呈灰白色或黄褐色， 内含大量纤维素、血液及黏液，后期呈水样，严重的可导致犊牛发病死亡。 患牛排出的粪便会污染牛场及水源， 粪便中的隐孢子虫卵囊在野外进一步发育为感染性卵囊并通过水源或土源性食物把病原传染给其它牛只或人类，对人畜健康构成威胁。 2022 年11 月，诊疗中心门诊接收一腹泻犊牛病例， 经诊断为牛隐孢子虫病，取患牛的粪样分别采用1%甲醛溶液、1%二氯异氰脲酸钠溶液、2%烧碱溶液以及密封厌氧发酵处理，经5 d、10 d、15 d、20 d 后分别采用蔗糖漂浮、涂片、改良抗酸染色检测样本中牛隐孢子虫卵囊数量，评价不同处理措施对粪样中牛隐孢子虫卵囊的杀灭效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 阳性粪样卵囊数确定 取在诊疗中心被诊断为牛隐孢子虫感染阳性犊牛粪样2 g，置于烧杯中，加入蒸馏水10 mL，搅匀后用160 目铜筛过滤，滤液置于锥形量杯中，3 000 r/min 离心5 min，弃去上清液，留下杯底粪渣，加饱和蔗糖溶液搅拌均匀，吸取表层液50 μL 进行涂片， 晾干后采用改良抗酸染色， 并在油镜下检查圆形或椭圆形并呈红色的隐孢子虫卵囊数量[2]。 计算4 个视野的卵囊数平均为13.25 个。 把该阳性粪样100 g 分为5 份， 每份约20 g，分别装入100 mL 塑料容器内进行相关试验。

1.1.2 消杀试剂 配制1%甲醛溶液、1%二氯异氰脲酸钠溶液、2%烧碱溶液。

1.2 方法 把100 g 牛隐孢子虫阳性粪样均匀分别装入5 个100 mL 规格的螺口塑料容器内， 分别编号为A 组、B 组、C 组、D 组以及对照组。A 组粪样中加入1%甲醛溶液5 mL；B 组粪样加入1%二氯异氰脲酸钠溶液5 mL；C 组粪样加入2%烧碱溶液5 mL；D 组粪样不加任何物质并旋紧瓶口保持封闭状态；对照组粪样不加盖，自然放置于室内作为对照组。5 d、10 d、15 d、20 d 时各组分别取2 g 粪样进行过滤、离心、漂浮、涂片、改良抗酸染色、镜检，计算每组4 个视野的隐孢子虫卵囊数量的平均数。

1.3 统计 试验数据用Excel 进行整理， 采用SPSS22.0 统计软件进行分析，以P＜0.05 为差异显著性判断标准。

2 结 果

从表1 看出，A 组粪样经处理后5 d、10 d、15 d、20 d 时检出卵囊数量平均为3.5 枚、0.5 枚、0 枚、0 枚；B 组粪样经处理后相应时间点卵囊数量平均为1.75 枚、0.25 枚、0 枚、0 枚；C 组粪样经处理后相应时间点卵囊数量平均为7.5 枚、5.25 枚、2.75 枚、0.75 枚；D 组粪样经处理后相应时间点卵囊数量平均为9.75 枚、6.50 枚、4.75 枚、3.00 枚； 对照组粪样经处理后相应时间点卵囊数量平均为10.50 枚、8.50 枚、8.00 枚、7.25 枚。 三组消毒剂对牛隐孢子虫均有不同程度的杀灭效果，其中B 组（二氯异氰脲酸钠）效果较好，其次为A 组和C 组。 B 组与A 组之间差异显著（P＜0.05），B 组与C 组之间差异极显著（P＜0.01），A、B、C 三组与对照组之间差异极显著（P＜0.01）。 密封厌氧发酵（D 组）对卵囊杀灭也有一定效果，与对照组之间差异显著（P＜0.05）。

表1 不同处理措施对牛粪样中隐孢子虫卵囊的杀灭效果

3 讨 论

从试验看，1%甲醛溶液、1%二氯异氰脲酸钠溶液、2%烧碱溶液对牛隐孢子虫卵囊均有较好的杀灭作用， 密封厌氧处理对牛隐孢子虫也有一定的杀灭效果。 甲醛杀灭卵囊的机理是甲醛与卵囊壳的蛋白质相结合，导致蛋白质凝固变性，起到对卵囊壁的破坏作用[3]。 一些报道也证实了甲醛的灭虫效果[4]，在4 ℃条件下， 隐孢子虫卵囊接触到10%福尔马林18 h 后会降低卵囊的感染性。 二氯异氰脲酸钠加水后可生成活性氯和新生态氧， 对卵囊壁蛋白质产生氯化和氧化反应，故对卵囊有较好的杀灭作用[3]，孟德磊也证实氯消毒剂杀灭卵囊的效果，6%漂白粉持续作用2 h 可灭活92%隐孢子虫卵囊[4]。在本试验中，烧碱对牛隐孢子虫卵有较好的杀灭效果，但效果不如二氯异氰脲酸钠和甲醛， 分析可能与烧碱HO-不能破坏卵囊壁有关。 但也有研究表明碱类消毒剂中的HO-也能渗透到卵囊内或孢子囊内， 起到抑杀球虫卵囊发育作用[5]。 在密封厌氧条件下，粪便会在厌氧条件下不断发酵产生生物热， 致使粪便温度升高，高温对孢子虫卵囊的发育有抑制或杀灭作用，据报道， 在45～60 ℃潮湿环境下持续5～9 min 可完全灭活隐孢子虫卵囊的活性[4]。

评价消毒剂对隐孢子虫卵囊的的抑杀效果，除了检查样本卵囊数量变化外， 还可以通过在显微镜下观察卵囊内孢子发育情况（即卵囊孢子化率）进行评价，相关试验有待进一步研究。

隐孢子虫病是一种重要的多种动物共患病，会对人和动物健康构成巨大的威胁， 也会造成重大的经济损失。隐孢子虫主要通过粪口途径传播，易感动物或人类通过摄入含有孢子化卵囊的水、 食物或接触到被污染的物品而感染。 卫生措施对于减少环境中的隐孢子虫至关重要。 首先在养殖场要做好动物粪便的无害化处理，及时清理粪便，可以采用粪便的堆集发酵或异位发酵来杀灭粪便中的孢子化卵囊，平时做好养殖场环境卫生是防控该病的主要措施。其次， 对养殖场产生的污水和尿液要集中进行厌氧发酵生产沼气， 经过处理的沼液或沼渣可用于农作物浇灌或堆肥。第三，对被污染的地面要采用含氯或醛制剂等消毒药进行消毒，并保持地面干燥，阻止卵囊的孢子化。对饮用水要定期采用氯制剂进行消毒，可以抑杀水源中细菌和卵囊，确保水源干净和无公害。