肺腺癌组织细胞分裂周期相关蛋白8蛋白表达及与临床病理参数、预后关系分析

王镜纯,吴 宝,白玉勤

(1.锦州医科大学赤峰学院培养基地,内蒙古 赤峰 024005;2.赤峰市医院肿瘤内科,内蒙古 赤峰 024009;3.赤峰学院中医蒙医学院,内蒙古 赤峰 024005;4.赤峰市肿瘤医院病理科,内蒙古 赤峰 024009)

肺腺癌(Lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌中最常见的一个病理亚型,约占所有肺癌发病率的60%,且其全球发病率还在逐年升高中[1]。LUAD临床典型症状为咳嗽、低热、气短、胸痛,主要诱因为吸烟、职业暴露、遗传因素等,早期与绝大多数肺癌症状表现一致,临床难以区分,因此部分患者确诊时已经是中晚期LUAD[2]。晚期肺癌患者更倾向于分子靶向治疗,现今临床已经推出了针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)、人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2,HER2)、间变性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase,ALK)等多个基因的靶向治疗抑制剂,但仍有更多的基因靶向抑制剂有待挖掘[3-5]。多位学者发现预后生物标志物在LUAD诊疗中具有重要意义,因此将焦点放到了对LUAD预后生物标志物的探索上[6-7]。李成长等[8]基于LUAD基因表达谱筛选出包括细胞分裂周期相关蛋白8(CDCA8)在内的10个LUAD预后关键基因,表明它们有望成为LUAD治疗新的潜在药物靶点。CDCA8是染色体乘客复合体(CPC)重要组分之一,CPC是调控有丝分裂的重要复合物,具有高度保守性,因此CDCA8在细胞分裂、着丝粒定位、染色体粘连上起着不可或缺的作用。且报道指出CDCA8在多个恶性肿瘤中呈上调表达,但目前国内外关于CDCA8与LUAD组织病理参数、预后的相关性报道尚不多见。因此为进一步明确CDCA8与病理特征、预后的关系,本研究拟分析LUAD组织CDCA8蛋白表达与临床病理参数、预后的相关性,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择医院2020年3月至2022年6月期间收治的98例LUAD患者。其中男56例,女42例,年龄29～84岁,平均(62.38±7.24)岁。病例纳入标准:①病理诊断为LUAD[9];②经手术切除治疗,患者及家属同意医院收集患者新鲜癌组织;③入组前未接受放化疗等抗肿瘤治疗手段;④无其他恶性肿瘤病史;⑤临床和病理资料完整。排除标准:①手术禁忌证;②合并严重器质性及全身系统性疾病;③合并精神疾病,不能配合研究。研究经过医院伦理委员会批准。

1.2 标本制作和免疫组化染色 将患者LUAD新鲜癌组织通过浸泡固定液、无水乙醇脱水、透明、浸蜡后在石蜡中进行包埋,修整蜡块边缘切为厚度3 μm的薄片,在载玻片上进行苏木素-伊红(HE)染色和CDCA8(1∶50和1∶500稀释)染色,抗体为兔抗CDCA8多克隆抗体,购自武汉三鹰生物有限公司。全部新鲜癌组织切片后均在同一条件下进行染色,在适当倍数下观察LUAD癌细胞中CDCA8蛋白的表达情况。结果判读:由两位高年资病理科医师在未知病理情况下进行结果解读,以染色强度和阳性率评分共同判断CDCA8表达水平,染色强度判定:观察组织染色情况,无染色对应0分,浅黄色对应1分,棕黄色对应2分,黄褐色对应3分,阳性率判定:观察阳性细胞数量,无阳性细胞对应0分,阳性细胞<25%对应1分,阳性细胞为25%～50%对应2分,阳性细胞>50%对应3分,染色强度和阳性率的分值之和为CDCA8蛋白表达评估标准,1～3分判定为CDCA8蛋白低阳性表达,4～6分判定为CDCA8蛋白高阳性表达。按照CDCA8蛋白高阳性、低阳性表达将98例LUAD患者分为高阳性组(67例)和低阳性组(31例)。

1.3 观察指标 收集并比较两组临床病理参数,包括年龄、性别、吸烟史、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、肿瘤体积(<10 mm3、10～30 mm3、>30 mm3)、肿物数量(单发、多发)、肿瘤位置(左肺上叶、左肺下叶、右肺上叶、右肺中叶、右肺下叶)、分化程度(高分化、中分化、低分化)、胸膜侵犯、淋巴结转移。比较两组预后情况,随访(门诊、微信、电话等)截至2023年1月,记录患者生存时间及死亡情况,绘制LUAD患者生存曲线,比较两组随访期间的无病生存率和总生存率。

1.4 统计学方法 采用SPSS 23.0统计学软件处理数据。计数资料用[例(%)]表示,采用χ2检验;无病生存率和总生存率采用Kaplan-Meier曲线描述;检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 两组临床病理参数比较 两组TNM分期、肿瘤体积、淋巴结转移、脏层胸膜侵犯比较差异有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

表1 两组临床病理参数比较[例(%)]

2.2 两组临床病理参数多因素分析结果比较 以CDCA8蛋白表达(高阳性表达=1,低阳性表达=0)为因变量,以TNM分期(Ⅰ期=1,Ⅱ期=2,Ⅲ期=3)、肿瘤体积(<10 mm3=1,10～30 mm3=2,>30 mm3=3)、淋巴结转移(是=1,否=0)、脏层胸膜侵犯(是=1,否=0)为协变量,Logistics回归分析结果显示肿瘤体积10～30 mm3、肿瘤体积>30 mm3、淋巴结转移是CDCA8蛋白高阳性表达的影响因素(均P<0.05)。见表2。

表2 两组临床病理参数多因素分析结果比较

2.3 CDCA8蛋白表达与预后的关系 Kaplan-Meier生存曲线结果显示CDCA8(1∶500稀释)蛋白高阳性组无病生存率为28.5%,低阳性组无病生存率为51.6%,两组无病生存率比较有统计学差异(χ2=5.268,Log Rank=0.022);CDCA8蛋白高阳性组总生存率为60.9%,低阳性组总生存率为80.0%,两组总生存率比较有统计学差异(χ2=4.614,Log Rank=0.032)。(1∶50稀释)蛋白均高表达,与生存率无关,见图1、2。

图1 高阳性组(n=67)和低阳性组(n=31)无病生存率比较

图2 高阳性组和低阳性组的总生存率比较

3 讨 论

肺癌是全球癌因性死亡排名第一的恶性肿瘤,LUAD属于非小细胞肺癌,癌变起源于支气管黏膜上皮细胞,位于肺部周边,是肺癌最常见的病理类型。目前LUAD的发病机制尚未完全阐明,但学者发现LUAD的发生具有独特的基因突变特点,临床已开发出多种治疗LUAD的靶向药物,其病死率虽得到控制,但仍处于较高水平,因此临床还需探索更多分子靶向的靶点[10-12]。CDCA8作为CPC主成分之一,其功能会随着分裂时期不同而呈现动态变化,在有丝分裂的前-中-后期变化分别从附着于染色体臂和着丝粒,到集中于着丝粒,再到移动到纺锤体,最终定位于中体。据研究报道[13-15],CDCA8参与了包括甲状腺癌、皮肤黑色素瘤、前列腺癌、LUAD在内的多种癌症的发生发展及预后预测,多位学者认为其可以作为癌症治疗的潜在靶点,具有深入探索意义。Hu等[16]发现CDCA8是LUAD致癌因子,受上游miR-133b的调节,miR-133b可以通过靶向CDCA8来抑制LUAD的增殖、侵袭和迁移,继而减少病死率。CDCA8具有促癌作用,现今研究[17]已明确指出CDCA8在癌组织中呈上调表达,探究其表达水平对癌症临床病理参数及预后的影响有助于延缓病理变化、改善预后。

本研究结果显示,CDCA8(1∶500稀释)高阳性组和低阳性组的TNM分期、肿瘤体积、淋巴结转移、脏层胸膜侵犯差异有统计学意义,说明相较于CDCA8低阳性患者,高阳性患者的TNM分期更大、肿瘤体积更大、淋巴结转移率更高、脏层胸膜侵犯率更高,提示了CDCA8高阳性会促进LUAD的增殖、侵袭和迁移。进一步Logistic回归分析结果显示,仅肿瘤体积(10～30 mm3、>30 mm3)、淋巴结转移是CDCA8蛋白高阳性表达的影响因素,提示了降低蛋白CDCA8水平可能对减小LUAD肿瘤体积、阻止LUAD患者淋巴结转移有帮助作用。CDCA8编码Borealin蛋白,Borealin是参与细胞周期调节、组成染色质微管和形成纺锤体的重要物质,与survivin蛋白共同控制CPC的定位,再由着丝粒中心蛋白INCENP来稳定CPC,因此Borealin和其他CPC组分的互相作用是促进肿瘤生长和扩散主要原因之一[18]。另外,CDCA8还需要与上下游基因相互作用才能实现促癌作用,研究报道,上游驱动蛋白驱动蛋白家族成员18B(KIF18B)可以与CDCA8的启动子区结合激活转录,促进胰腺癌增殖[19];CDCA8可以促进细胞周期G1期阻滞,还可以通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21、P27等下游效应因子来导致乳腺癌不良预后[20]。故CDCA8高阳性表达患者肿瘤体积更大、更易发生淋巴结转移。Kaplan-Meier生存曲线结果表明显示,CDCA8高阳性表达患者无病生存率和总生存率均低于CDCA8低阳性表达患者,说明CDCA8高阳性表达的LUAD患者生存时间短,生存率更低,临床预后更差。徐雷棣等[21]也报道CDCA8直接参与LUAD的发生发展和免疫浸润,故CDCA8表达水平与LUAD患者生存期密切相关,可以作为LUAD患者新的治疗靶点。研究不足之处:①样本量小,结果代表性有限,还需进一步验证结果有效性;②研究对象纳入不足,研究患者全部为手术患者,未包含无法通过手术治疗的LUAD患者,影响结果可靠性;③单中心研究,结果存在偏倚。

综上所述,CDCA8表达与CDCA8蛋白稀释浓度及LUAD的病理参数及预后存在一定关联,CDCA8表达水平越高,LUAD疾病发展严重,预后越差,CDCA8可以作为临床评估LUAD患者疾病进展及预后的新型标志物。