广西产毛果算盘子不同部位HPLC指纹图谱研究*
2023-10-09刘芙芙黄浩原袁涣媛陈金凤吴文斌黄红泓
刘芙芙,黄浩原,袁涣媛,陈金凤,吴文斌,黄红泓
(广西中医药大学赛恩斯新医药学院药学系,广西 南宁 530001)
毛果算盘子(GlochidioneriocarpumChamp.)是大戟科植物,别名毛七公、漆大伯、两面毛、漆大姑。味苦、涩;性平,全年可采收。具有驱风利湿,散瘀,止血,消肿的功效,用于治急性胃肠炎,痢疾,风湿关节痛,跌打损伤,创伤出血,湿疹,漆疮,皮炎[1]。其含有酚类、鞣质类等成分和三萜类化合物以及微量元素[1-3]。近年来刘布鸣等[4-5]从广西毛果算盘子中分离出没食子酸类化合物并进行薄层色谱鉴定。覃日宏等[6-7]研究发现毛果算盘子具有抗炎镇痛的作用。黄红泓等[8]对广西产毛果算盘子的没食子酸含量进行了测定。目前尚未发现有文献报道有关毛果算盘子根、茎、叶3个部位的化学成分对比以及药理作用比较研究。本课题研究毛果算盘子药材根、茎、叶3个部位的指纹图谱,对比3个部位的化学成分信息,为今后研究毛果算盘子的谱效关系提供科学的参考依据。
1 实 验
1.1 仪器与试药
安捷伦Agilent1200高效液相色谱仪;LG16-W高速微量离心机,北京医用离心机厂;SB3200T超声波清洗仪,上海能信超声有限公司;Millipore Simplicity-185超纯水仪,美国密里博公司;BP211D电子分析天平,德国赛多利斯。
香草酸(批号:7447,HPLC纯度≥99.80%),上海诗丹德标准技术服务有限公司;甲醇、乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯。毛果算盘子药材于2020年春季采自广西5个地区,晒干,经广西中医药大学赛恩斯新医药学院生药教研室苑敏副教授鉴定均为大戟科植物毛果算盘子(GlochidioneriocarpumChamp.)的全株(表1)。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件
用X-Peonyx C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇(B)-0.1%磷酸(A),梯度洗脱0~7 min,8%B;7~15 min,8%B→20%B;15~20 min,20%B→28%B;20~30 min,28%B→35%B;30~45 min,35%B→45%B。检测波长270 nm,柱温20 ℃,流速1.0 mL·min-1,进样量10 μL;记录时间60 min[9-10]。
1.2.2 对照品溶液的制备
取香草酸对照品1 mg,精密称量,置25 mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪。
1.2.3 供试品溶液的制备
取毛果算盘子根茎叶3个部位各1 g,精密称定,精密加入20 mL甲醇,称重,静置30 min,超声提取40 min,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液于离心管,12000 r/min离心10 min,取上清液10 μL,注入液相色谱仪测定,即得[7]。
1.2.4 精密度试验
取S1茎部位供试品溶液,按“1.2.1”项条件连续进样6次,记录色谱图,分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明,各共有峰的相对保留时间RSD为0.44%~0.73%,相对峰面积RSD为0.89%~1.56%。符合指纹图谱分析要求。
1.2.5 重复性试验
取S1茎部位供试品溶液,分别制备6份供试品溶液,按“1.2.1”项条件进样,记录色谱图,分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明,各共有峰相对保留时间RSD为0.67%~0.97%,相对峰面积RSD为1.34%~1.73%,符合指纹图谱分析要求。
1.2.6 稳定性试验
取S1茎部位供试品溶液,按“1.2.1”项色谱条件分别于0,2,4,6,12,24 h时进样,记录色谱图,考察其共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明,各共有峰相对保留时间RSD为0.34%~1.25%,相对峰面积RSD为1.17%~1.92%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
1.2.7 指纹图谱与共有峰的确定
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)计算机软件,以S1色谱图作为对照色谱,时间窗宽度为0.1,经多点校正后进行自动匹配,以平均数方法生成毛果算盘子根茎叶3个部位的对照图谱和叠加图谱(图1~图6)。经与对照品对照,考察对照品保留时间,指认了根部位的5号峰、茎部位的7号峰、叶部位的4号峰为香草酸。以香草酸成分的峰为参照计算其他共有峰的相对保留时间及相对峰面积,结果见表2~表7。5批毛果算盘子根、茎、叶3个部位的相似度均大于0.9,表明相似度良好。
图1 毛果算盘子药材根部位的对照图谱(5.香草酸)Fig.1 Comparison map of root position [Vanillic acid(5)]
图2 毛果算盘子药材茎部位的对照图谱(7.香草酸)Fig.2 Comparison map of stem parts [Vanillic acid(7)]
图3 毛果算盘子药材叶部位的对照图谱(4.香草酸)Fig.3 Comparison map of leaf parts (Vanillic acid(4))
图4 毛果算盘子药材根部位的指纹图谱叠加图Fig.4 Fingerprint overlay of root position
图5 毛果算盘子药材茎部位的指纹图谱叠加图Fig.5 Fingerprint overlay of stem
图6 毛果算盘子药材叶部位的指纹图谱叠加图Fig.6 Fingerprint overlay of leaf parts
表2 毛果算盘子药材根部位指纹图谱共有峰的相对保留时间Table 2 The relative retention time of a total peak of root site in samples
表3 毛果算盘子药材茎部位指纹图谱共有峰的相对保留时间Table 3 The relative retention time of a total peak of stem part in samples
表4 毛果算盘子药材叶部位指纹图谱共有峰的相对保留时间Table 4 The relative retention time of a total peak of leaf position in samples
表5 毛果算盘子药材根部位指纹图谱共有峰的相对峰面积Table 5 The relative peak area of a total peak of root site in samples
表6 毛果算盘子药材茎部位指纹图谱共有峰的相对峰面积Table 6 The relative peak area of a total peak of stem part in samples
表7 毛果算盘子药材叶部位指纹图谱共有峰的相对峰面积Table 7 The relative peak area of a total peak of leaf position in samples
2 结 论
通过对比毛果算盘子根、茎、叶3个部位的指纹图谱得知,3个部位的化学成分信息基本相似,但成分含量多少存在差异,其中茎部位的化学成分最多且含量较高,其次是叶部位,最低的是根部位。5批毛果算盘子3个部位的HPLC指纹图谱相似度大于0.9,表明广西各产地的毛果算盘子基本相似,而根茎叶3个部位化学成分的峰面积RSD为0.73%~70.76%,表明其化学成分含量存在较大差异。研究毛果算盘子各部位的指纹图谱信息,可为毛果算盘子药材的质量控制和研究其谱效关系提供可靠的科学依据。