康派特组织粘合胶粘合巴马小型猪皮肤切口的有效性

卜文，刘文谦，李彦，刘超，丛源，沈连忠（通信作者）

山东欣博药物研究有限公司 （山东 临邑 251500）

α-氰基丙烯酸正丁酯是一种具有抑菌作用的医用粘合剂，可在血液、组织液中阴离子的作用下快速聚合固化成膜，产生一层具有高抗拉强度的弹性薄胶膜[1-2]。该胶膜约5～10 d 后可随角化皮肤逐步脱落[3]。康派特组织粘合胶的主要成分为α-氰基丙烯酸正丁酯，并添加了少量着色剂和稳定剂，适用于接近皮肤表面的封闭，不可用于皮肤亚表层的闭合[4-5]。作为一种新型医用胶，康派特组织粘合胶在皮肤上使用的安全性和有效性需要进一步观察。目前临床上评价粘合剂安全性、有效性的动物实验常规采用大鼠、家兔和犬作为实验动物[6-17]，关于小型猪的研究较少。小型猪被覆的毛发紧附于皮下组织，其体表毛发的疏密、皮肤脂肪层的形态学和增生动力学、皮肤的血液供给、切口的修复机制等均与人类相似[18]。因此，相对于大鼠、家兔和犬，小型猪的皮肤更适合用于药物和医疗器械的有效性、安全性评价[19]。基于此，本研究探讨康派特组织粘合胶粘合巴马小型猪皮肤切口的有效性，并与Histoacryl 医用组织胶水[15-17]进行比较，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物与饲养环境

实验动物：购于北京实创世纪小型猪养殖基地[动物生产许可证号：SCXK（京）2013-0008]的巴马小型猪（普通级）8 只，雌雄各半，8～9 月龄，体重15.23～21.06 kg。实验动物质量合格证编号：No.111014000000097。

饲养环境：山东欣博药物研究有限公司，山东欣博药物安全评价研究中心，普通级大动物室（环境控制：温度16～26 ℃，湿度40～70%，换气次数≥8 次/h，照明时间12 h/12 h 明暗交替）。实验动物使用许可证号：SYXK（鲁）2016-0011。设施使用许可证号：H20150050。饲料购于北京实创世纪小型猪养殖基地，饲料批号：15111803。实验动物术前禁饲12 h。

本研究已通过本单位实验动物伦理委员会审查。

1.1.2 供试品

康派特组织粘合胶：北京康派特医疗器械有限公司生产，国械注准20173023182，批号160415；型号：涂抹LT 型；规格：0.4 ml/支；性状：蓝色透明液体。

1.1.3 上市对照品

Histoacryl 医用组织胶水（Histoacryl Tissue Adhesive）：贝朗医疗西班牙股份公司生产，国械注进20173026756，批号215272N2；商品名：蓝灵；型号：1050044；规格：0.5 ml/支；性状：蓝色透明液体。

1.1.4 麻醉药品

戊巴比妥钠：德国莫克公司生产，商品编号NO.6902100，批号150408，含量99.4%，规格25 g/瓶。

1.1.5 实验仪器

TCS-150 电子台秤（常州牛顿力称重系统有限公司），CWT7-3 电子天平（常州牛顿力称重系统有限公司），Tissue-TekTECTM5 组织包埋机（日本樱花检验仪器株式会社），Tissue-TekVIP6 全封闭组织脱水机（日本樱花检验仪器株式会社），JLX-A 型蜡块修复仪（天津市久圣医疗电子仪器有限公司），TK-218 型恒温摊片烤片机（湖北泰维科技实业有限公司），BX53 双目显微镜（日本奥林巴斯株式会社）。

1.2 方法

1.2.1 分组

选用8 只巴马小型猪，用TOXSTAT 2006 软件按性别和体重随机分为A、B 两组，每组4 只，雌雄各半。A 组术后1 周剖检，B 组术后4 周剖检。

1.2.2 手术方法

采用同体左右侧自身对比法。为实验动物肌内注射3% 戊巴比妥钠30 mg/kg 进行麻醉，腹部朝下置于手术台上。剃除背部手术部位毛发，范围约15 cm×15 cm。先用75% 乙醇擦拭手术部位，再用聚维酮碘消毒手术部位，然后铺洞巾。用手术刀在背中线两侧旁开3 cm 处各划开3 个长3 cm、深1 cm 的切口，切口间距约4 cm，方向与背部中线垂直。左侧1、2、3 切口用康派特组织粘合胶粘合，右侧1、2、3 切口用Histoacryl 医用组织胶水粘合。

1.3 观察指标

（1）临床症状：于笼旁观察实验动物，记录其临床表现和特点，包括外观、体征、行为活动、饮食、对刺激的反应、腺体分泌、呼吸、分泌物、粪便性质、死亡情况，以及切口是否有开裂、渗出和感染等不良反应，2 次/d。（2）体重：用TCS-150 电子台秤的“预去皮”功能去除称重笼具的重量后，称量实验动物的体重，1 次/周。（3）摄食量：实验期间，每只实验动物每日上、下午各喂食（350±5）g 饲料，次日上午记录饲料剩余量（按照剩余0%、25%、50%、75%、100% 4 挡记录），1 次/d。（4）切口局部症状：每日肉眼观察切口局部胶体是否可见（胶体明显可见记“++”，胶体不清楚记“+”，未见明显胶体记“-”）及切口局部刺激反应（切口的刺激评分方法见表1，每组动物每侧12 个切口的平均评分对应的反应类型见表2），1 次/d。（5）剖检：每只实验动物肌内注射3%戊巴比妥钠30 mg/kg 麻醉后，采用颈动脉放血方式安乐死，剖检动物，大体观察动物各脏器组织和切口部位有无异常病变，然后取切口局部皮肤和异常脏器组织，用4%甲醛固定，行常规组织切片镜检，并对供试品侧和上市对照品侧进行刺激性评价，评分标准见表3～4。同时，对切口的纤维组织增生情况进行评分，评分越高表明恢复越好，其评分不计入刺激指数。

表1 皮肤反应积分系统

表2 刺激强度评价标准

表3 组织反应显微镜计分系统评分

表4 刺激指数

1.4 统计学处理

采用EXCEL 软件进行数据统计，采用TOXSTAT 2006 统计软件进行数据处理。计量资料以±s 表示，采用t检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床症状

实验期间，动物切口部位均未见开裂、渗出和感染症状，临床症状观察均未见明显异常。

2.2 体重

B 组术后21 d 和28 d 的体重均高于术前，差异有统计学意义（P<0.05），表明动物术后体重略有增长，未见明显并发症，见表5。

表5 两组体重比较（kg，±s）

表5 两组体重比较（kg，±s）

注：与术前比较，aP<0.05

组别 只数术前术后7 d术后14 d术后21 d术后28 d A 组422.19±1.47 22.34±1.45 B 组422.06±0.39 22.29±0.37 22.70±0.42 23.31±0.42a 25.05±0.86a

2.3 摄食量

实验期间，动物均未见剩余饲料。

2.4 切口局部症状

2.4.1 胶体状态

术后1～4 d 两侧胶体均明显可见，术后5 d 开始两侧胶体均不清楚；术后21 d 后两侧均未见明显胶体，见表6。

表6 两组切口胶体状态比较（个）

2.4.2 切口局部刺激反应

实验期间两组手术当天两侧切口局部可见轻度红斑，刺激强度为轻度，术后1 d 开始两侧切口局部均未见明显刺激性反应，刺激强度为极轻微，见表7。

表7 切口局部刺激反应统计数据

2.5 病理学检查

剖检：实验动物各组织脏器及手术部位均为未见明显大体病理学改变。

组织病理学检查结果提示，术后1 周两侧切口部位均可见极轻度或轻度的炎症细胞浸润、极轻度出血、轻度至中度的纤维组织增生等组织病理学改变，术后4 周可见不同程度组织修复（致密结缔组织修复或完全修复），且未见其他明显组织病理学改变。见图1～6。

图1 手术部位炎性细胞浸润，纤维组织增生（×100） （术后1周，动物编号/组别：M001/ A 组 Histoacryl 医用组织胶水）

图2 手术部位炎性细胞浸润、纤维组织增生（×100） （术后1周，动物编号/组别：F002/ A 组 康派特组织粘合胶）

图3 手术部位组织修复（致密结缔组织修复） （×100） （术后4周，动物编号/组别：F004/ B 组 Histoacryl 医用组织胶水）

图4 手术部位组织修复（致密结缔组织修复） （×100） （术后4周，动物编号/组别：M003/ B 组 康派特组织粘合胶）

图5 手术部位组织修复（完全修复）（×100）（术后4 周，动物编号/组别：F003/ B 组 Histoacryl 医用组织胶水）

图6 手术部位组织修复（完全修复）（×100）（术后4 周，动物编号/组别：F003/ B 组 康派特组织粘合胶）

根据组织病理学组织反应评分统计评价结果显示，术后1 周实验动物均可见极轻度的皮肤刺激，但康派特组织粘合胶与Histoacryl 医用组织胶水涂胶部位两者差值为0（雄性）或0.3（雌性），刺激反应程度均为无，表明两者刺激强度无明显差异，见表8；术后4 周所有动物手术部位均未见有明显皮肤刺激反应。

表8 刺激评分结果（1 周雄性动物）

表9 刺激评分结果（1 周雌性动物）

表10 刺激评分结果（4 周雄性动物）

表11 刺激评分结果（4 周雌性动物）

3 讨论

以往临床常用的皮肤切口处理方式是缝合，但缝合前需要注射麻醉药物，缝合后需及时换药、拆线，操作烦琐，还有可能增加疼痛和刺激，且切口愈合后会遗留明显的瘢痕，影响美观。近年来，随着医疗需求多样性逐渐增加，人们对切口处理方式提出了更高的要求，特别是女性和儿童患者不仅要求切口愈合快速有效、减少疼痛，还要求避免遗留瘢痕[20-22]。近年来出现的一次性使用无菌医用敷料贴可在切口皮下缝合后外敷使用，有利于减少换药步骤，且无须拆线，同时具有淡化瘢痕的作用。但该敷料贴使用前仍需进行皮下缝合，使用后患者活动受限，影响美观，且需要防止敷料贴开裂脱落。康派特组织粘合胶克服了传统缝合法和一次性使用无菌医用敷料贴的不足，伤痕较浅、切口边缘对合良好的切口可在清创后直接使用（无须麻醉），且无须定期换药，而手术切口可在皮内缝合减轻张力后使用。同时，康派特组织粘合胶的主要化学成分α- 氰基丙烯酸正丁酯具有极强的粘合力，与组织液接触后迅速发生聚合反应，5～15 s 即由液体变为固体，可迅速粘合切口两侧皮肤，并在切口表面形成一层防水保护膜，有效阻挡细菌，防止感染，且使用后无须覆盖其他敷料。此外，康派特组织粘合胶胶体呈蓝色，便于通过视觉控制用量，能有效防止组织胶水进入切口。本研究采用巴马小型猪皮肤切口模型评价康派特组织粘合胶产品的安全性和有效性，观察其愈合过程中切口的恢复情况、粘合胶胶体变化、局部组织病理学变化等，并与同类产品Histoacryl 医用组织胶水进行比较，评价指标客观准确，数据真实可靠，可以满足对康派特组织粘合胶产品的非临床评价要求。

综上，本试验条件下，康派特组织粘合胶粘合巴马小型猪皮肤切口安全有效，且与Histoacryl 医用组织胶水比较未见明显差异。