高血压性脑出血患者血清miR-132、miR-34a水平及其与预后的关系

胥成朗,李强,谭承睿,肖文峰,蒋正方

高血压性脑出血是神经外科常见病,一般是由高血压引起的颅内动脉、静脉和毛细血管破裂,严重危及患者生命[1-2]。高血压性脑出血占所有自发性颅内出血的50%～70%,具有很高的致残率和致死率,30%以上的幸存者有不同程度的残疾,给家庭和社会带来沉重的经济负担[3]。基于高血压性脑出血的危险性和危害性,迫切需要寻找与疾病发生、病情严重程度和预后评估相关的有效治疗策略。miRNAs具有高度的序列保守性、表达时机和组织特异性,其表达失调已被证明是多种疾病发生和预后的生物标志物[4]。miR-132是一种常见的miRNA,通过调节其靶基因的表达,在炎性反应、血管生成、肿瘤发生和其他生物过程中发挥广泛的调节作用[5]。miR-34a表达于巨噬细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、肝细胞、脂肪细胞等多种细胞中,与多种疾病的发生、发展相关[6]。然而,目前miR-132、miR-34a水平在高血压性脑出血患者血清中的表达以及与预后的关系,尚未报道。因此,本研究通过检测高血压性脑出血患者血清miR-132、miR-34a的表达水平,分析二者表达与疾病发生、病情严重程度和预后的相关性,为高血压性脑出血的有效诊治和预后预测提供参考依据,报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2020年6月—2022年6月西南医科大学附属医院、四川绵阳四〇四医院神经外科治疗高血压性脑出血患者120例为观察组,根据格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分[7]分为轻度亚组32例(13～15分),中度亚组58例(9～12分)和重度亚组30例(3～8分);根据出院3个月后格拉斯哥预后评分(GOS)[8]分为预后良好亚组76例(>3分)和预后不良亚组44例(1～3分)。另选取同期医院门诊健康体检者120例作为健康对照组。本研究已经获得医院伦理委员会批准(KY-2019030、2017001),受试者或家属知情同意并签署知情同意书。本研究遵循《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准:①符合高血压性脑出血相关诊断标准[9];②均经头颅CT检查进一步证实;③年龄>18岁。(2)排除标准:①头颅外伤史患者;②长期服用抗凝药物引起的脑出血患者;③伴有严重的心、肺及肝肾功能不全患者;④病例资料不完整患者。

1.3 血清miR-132、miR-34a水平检测 高血压性脑出血患者入院次日、健康对照组体检当日清晨,采取受试者空腹肘静脉血3～5 ml于干燥试管,离心留取血清放入-20℃冰箱中保存、待检。采用RNA提取试剂盒(上海生工生物有限公司)提取血清样品总RNA,按逆转录试剂盒(德国Qiagen公司)说明书逆转录合成cDNA。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清miR-132、miR-34a的相对表达量。根据ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)说明书配置反应体系。反应程序为:95 ℃预变性5 min、95 ℃变性10 s、60℃退火1 min、72℃延伸30 s,共40个循环。在ABI 7500 Fast系统上进行qRT-PCR。以U6作为内参,根据2-△△Ct计算miR-132、miR-34a基因的相对表达量。基因引物经设计软件设计后由上海生工生物工程有限公司合成,序列见表1。

表1 血清miR-132、miR-34a的qRT-PCR引物序列Tab.1 qRT PCR primer sequences of serum miR-132 and miR-34a

2 结 果

2.1 2组血清miR-132、miR-34a比较 与健康对照组比较,观察组血清miR-132、miR-34a 水平显著升高(P<0.01),见表2。

表2 健康对照组与观察组血清miR-132、miR-34a水平比较Tab.2 Comparison of serum miR-132 and miR-34a levels between the healthy control group and the observation group

2.2 不同严重程度亚组患者血清miR-132、miR-34a水平比较 血清miR-132、miR-34a水平比较,重度亚组>中度亚组>轻度亚组(P均<0.01),见表3。

表3 不同严重程度高血压性脑出血患者血清miR-132、miR-34a水平比较Tab.3 Comparison of serum miR-132 and miR-34a levels in patients with hypertensive intracerebral hemorrhage of different severity levels

2.3 不同预后的高血压性脑出血患者临床资料比较 2亚组患者性别、年龄、吸烟史、饮酒史、BMI、舒张压比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与预后良好亚组比较,预后不良亚组患者糖尿病比例、有家族遗传史比例及收缩压、血清miR-132、miR-34a升高(P<0.05或P<0.01),GOS评分显著降低(P<0.01),见表4。

表4 预后良好亚组与预后不良亚组患者临床资料比较Tab.4 Comparison of clinical data between patients with good prognosis subgroup and those with poor prognosis subgroup

2.4 多因素Logistic回归分析高血压性脑出血患者预后的影响因素 以高血压性脑出血患者预后为因变量(预后不良=1,预后良好=0),以上述结果中P<0.05项目为自变量,进行多因素Logistic回归分析,结果显示,有糖尿病史及miR-132高、miR-34a高、收缩压高是高血压性脑出血患者不良预后的危险因素(P<0.05),GOS评分高为保护因素(P<0.05),见表5。

表5 多因素Logistic回归分析高血压性脑出血患者预后不良的影响因素Tab.5 Multivariate logistic regression analysis of prognostic factors in patients with hypertensive intracerebral hemorrhage

2.5 血清miR-132、miR-34a水平预测高血压性脑出血患者预后的价值 绘制血清miR-132、miR-34a水平预测高血压性脑出血患者预后的ROC曲线,并计算曲线下面积(AUC),结果显示,血清miR-132高、miR-34a高及二者联合预测高血压性脑出血患者预后的AUC分别为0.719、0.727、0.782,二者联合优于各自单独预测价值(Z/P=2.588/0.011、2.453/0.014),见表6、图1。

图1 血清miR-132、miR-34a水平预测高血压性脑出血患者预后的ROC曲线Fig.1 Receiver operating characteristic of serum miR-132 and miR-34a levels predicting the prognosis of hypertensive intracerebral hemorrhage patients

表6 血清miR-132、miR-34a水平对高血压性脑出血患者预后的预测价值Tab.6 Predictive value of serum miR-132 and miR-34a levels for prognosis in patients with hypertensive intracerebral hemorrhage

3 讨 论

高血压性脑出血是高血压疾病发展过程中最严重的并发症,其具有高发病率、高残疾率、高病死率的特点[10-11]。目前对于高血压性脑出血尚缺乏有效的治疗方法,且中、重度高血压性脑出血治疗难、预后差,这使得高血压性脑出血的早期诊断和治疗至关重要[12]。因此,寻找高血压性脑出血发生、发展的相关生物标志物,对高血压性脑出血早发现、早治疗具有重大意义。miR-132、miR-34a都属于miRNA基因家族的成员,是重要的调节因子,大量研究表明,它们在细胞增殖、分化、迁移、分泌和凋亡等不同生理条件下发挥着关键作用[13],其有望成为高血压性脑出血早期诊断和治疗的生物标志物。

Gong等[14]发现miR-132的过表达可以诱导小胶质细胞的激活,在神经元中的表达增加,与慢性神经性疼痛有关,引发神经炎性反应和多巴胺能神经变性。Xu等[15]发现miR-132是通过调节下游靶基因影响缺血性或非缺血性心力衰竭的多种病理过程,包括心肌肥大、纤维化、细胞凋亡、血管生成、钙处理、神经内分泌激活、氧化应激等,其作为生物标志物在心血管疾病中有很好的诊断和治疗潜力。本研究结果发现,miR-132在高血压性脑出血患者血清中表达上调,轻、中、重度亚组血清miR-132水平依次显著升高,预后不良亚组血清miR-132表达水平显著高于预后良好亚组,与以往研究结果相似,提示血清miR-132过表达可能通过神经炎性反应、氧化应激等过程促进高血压性脑出血的发生发展,且与患者预后密切相关。研究发现,miR-34a可以导致炎性反应、活性氧(ROS)产生,其与细胞增殖、凋亡、糖尿病发生等生理机制和疾病有密切关系[16-17]。Mone等[18]发现miR-34a会导致糖尿病患者的内皮功能障碍和血管衰老,增加氧化应激和炎性反应,是血管衰老的生物标志物。Wan等[19]发现在酒精性肝病患者体内miR-34a过表达可诱导巨噬细胞相关的炎性反应和血管生成加重肝损伤。本结果发现,miR-34a在高血压性脑出血患者血清中表达上调,轻、中、重度亚组血清miR-34a水平依次显著升高,预后不良亚组血清miR-34a表达水平显著高于预后良好亚组,与以往研究结果相似,提示血清miR-34a高表达可能通过调节炎性反应和血管衰老导致高血压性脑出血的发生、发展,且与预后相关。Van den Berg等[20]发现miR-132、miR-34a均是中枢神经系统疾病有前途的生物标志物,因为它们作为信使参与发育和分化过程。本研究进一步发现血清miR-132、miR-34a二者联合预测高血压性脑出血患者预后的效能优于血清miR-132、miR-34a各自单独预测。研究表明,收缩压、GOS评分对高血压性脑出血患者临床诊断和预后具有重要的意义[21]。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-132高、miR-34a高、收缩压高、GOS评分低、有糖尿病史是高血压性脑出血患者预后不良的危险因素,提示应密切关注上述因素,以便及时对患者采取干预措施,改善预后。

综上所述,高血压性脑出血患者血清中miR-132、miR-34a表达显著升高,二者联合可较好地判断高血压性脑出血预后。然而血清miR-132、miR-34a参与高血压性脑出血发生发展的具体机制仍需进一步探究,将在后续的实验中继续挖掘,更全面地揭示它们在高血压性脑出血中的作用机制。

利益冲突:所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

胥成朗:实施研究过程,论文撰写;李强、谭承睿:数据收集,统计分析;肖文峰:课题设计,分析试验数据;蒋正方:修改论文,论文终审