学龄前珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者外周血淋巴细胞亚群比例分析*

孔义华,王显河,师海瑞,吴秋阳,吴治平,欧 阳,邹远芹

贵州医科大学第二附属医院:1.检验科;2.口腔科,贵州凯里 556000

珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)是一种遗传性溶血性疾病,在我国南方特别是广西最为高发,好发于婴幼儿。可采用血红蛋白电泳等血液学常规手段检出中间型和重型地贫,但无症状地贫基因携带者通常在日常生活和工作中很难被发现[1-3],这部分患儿多以感染、发烧等症状入院就诊,这些症状极易诱发急性溶血发作,导致患儿生长发育受影响[4-6]。地贫的发生、转归与免疫功能密切相关,故监测学龄前儿童地贫基因携带者的免疫功能是否存在异常就显得尤为重要,加之有症状的患儿需反复、长期输血维持生命,可能造成患儿免疫功能异常,但这方面鲜有报道。目前临床评价机体免疫功能是否异常,主要是通过观察其淋巴细胞亚群水平。基于此,本研究探讨了学龄前地贫基因携带者外周血淋巴细胞亚群水平变化。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2020年1月至2022年1月学龄前地贫基因携带者29例作为研究组,其中男17例,女12例;年龄1～5岁,平均(2.72±1.49)岁。另选择本院同期学龄前非地贫基因携带者30例作为对照组,其中男21例,女9例;年龄3个月至5岁,平均(2.36±1.38)岁。研究组纳入标准: (1)年龄≤6岁 ;(2)确诊为携带地贫基因(包括输血治疗患儿);(3)β地贫基因CD41-42、CD43、IVS-II-654、CD17、CD14-15、-28、-29、-30、-32、CD71-72、βE、IVS1-1、CD27-28、CAP、Int、CD31、IVS1-5检出为阳性;(4)α地贫基因--SEA、- α3.7、- α4.2、CS、QS、WS检测为阳性。排除标准:除携带地贫基因外合并其他疾病。两组患儿性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),有可比性。

1.2方法 (1)分别向已编号的流式管中加入 50 μL 充分混匀的抗凝全血。(2)加入20 μL CD3+/CD8+/CD45+/CD4+/CD16+/CD56+/CD19+,涡旋混匀,室温避光放置 15～20 min。流式细胞仪-6色试剂(BD生物科技有限公司)包括小鼠抗人CD3-FITC、小鼠抗人CD4-PE-Cy7、小鼠抗人CD8-APC-Cy7、小鼠抗人CD45-PerCP、小鼠抗人CD19-APC。(3)溶血: FACS Lysing Solution(按说明书进行原液10倍纯净水稀释后使用)稀释的溶血素每管加450 μL混匀后避光室温放置,溶血15 min。(4)24 h内上机用 FACSCanto Clinical 软件获取 2 500 个淋巴细胞进行检测,上机前应充分混匀。

1.3观察指标 (1)观察两组T淋巴细胞亚群比例;(2)观察两组自然杀伤(NK)细胞比例;(3)观察两组B淋巴细胞比例。

2 结 果

2.1两组T淋巴细胞亚群比例比较 两组CD3+T淋巴细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组CD3+CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值低于对照组,而CD3+CD8+T淋巴细胞比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组T淋巴细胞亚群比例比较

2.2两组CD16+CD56+NK细胞、CD19+B淋巴细胞比例比较 研究组CD16+CD56+NK细胞比例低于对照组(P<0.05);研究组CD19+B淋巴细胞比例高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组CD16+CD56+ NK细胞、CD19+B淋巴细胞比例比较

3 讨 论

地贫是世界范围内较常见的常染色体隐性单基因遗传病,已被世界卫生组织列为危害人类健康的6种常见病之一,其主要是珠蛋白基因异常导致血红蛋白中的一种或几种珠蛋白肽链合成减少或不能合成,使血红蛋白的α链和β链蛋白比例失衡,导致急、慢性进行性溶血性贫血,严重影响患儿身心健康[7-13]。有症状的地贫患儿需定期输血维持生命,但长期输血会造成患儿体内铁超负荷,损害免疫系统,如降低补体系统活性、抑制中性粒细胞的吞噬作用等[14-17]。而这种疾病不仅造成患儿贫血、黄疸及生长迟缓等,甚至会产生肝脾肿大、髓外造血等严重并发症,严重者甚至致死或致残。同时患儿多次输血治疗,机体受抗原反复剌激后,免疫细胞处于疲惫状态,易出现免疫反应异常,引起反复感染等。因此,检测淋巴细胞亚群比例评估有症状和无症状地贫基因携带者的免疫状态就显得尤为重要。

淋巴细胞亚群作为机体免疫系统的重要组成部分,参与机体的体液免疫与细胞免疫反应。淋巴细胞亚群比例主要用于评估机体的免疫状态,淋巴细胞总数与疾病发生及免疫功能强弱有关。正常情况下,淋巴细胞亚群比例在周围组织中相对稳定,但若机体出现免疫状态变化,则会导致淋巴细胞亚群比例随之发生相应变化[18]。

检测淋巴细胞亚群比例是检测淋巴细胞中的CD3+T淋巴细胞(包含CD3+CD4+T淋巴细胞和CD3+CD8+T淋巴细胞)、CD19+B、CD16+56+NK 3类细胞亚群水平。目前有关学龄前地贫基因携带者淋巴细胞亚群比例及免疫状态评估的研究较少见。有研究发现,成人的地贫患者与健康对照组相比,其CD3+T淋巴细胞比例、CD4+T淋巴细胞比例、CD4+/CD8+比值显著低于对照组[19],而本研究结果发现学龄前地贫患儿CD3+T淋巴细胞比例与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),CD3+CD8+T淋巴细胞和CD19+B淋巴细胞比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。这可能与患儿长期免疫系统功能降低,易受到外来病原体感染,进而刺激B淋巴细胞和CD3+CD8+T淋巴细胞增殖分化,其中CD19+B淋巴细胞增殖分化产生较多免疫球蛋白抵御感染。

本研究结果显示,CD16+CD56+NK细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),提示学龄前携带地贫基因患儿的免疫功能降低,可能是地贫患儿反复感染的原因之一。

检测学龄前地贫基因携带者淋巴细胞亚群比例可以动态掌握其免疫状态,并及时调整患儿抗感染及营养补充方案,避免患儿因反复感染和免疫力低下造成生长迟缓及脏器受损等。

综上所述,学龄前地贫基因携带者外周血淋巴细胞亚群比例与健康儿童之间存在明显差异,表明学龄前地贫基因携带者的免疫功能存在紊乱。临床加强对CD3+CD4+T淋巴细胞和CD3+CD8+T淋巴细胞、CD16+56+NK、CD19+B淋巴细胞比例的检测,监测其比例变化,有利于及时评估患儿免疫状况并进行有针对性的干预治疗,对降低患儿的感染风险、提高其生存质量意义重大。