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蔗糖脂肪酸酯中残留溶剂的测定

2023-09-11符昌雨程志翔

乳业科学与技术 2023年3期
关键词:异丁醇异丙醇乙酸乙酯

符昌雨,杨 丹,程志翔

(上海市质量监督检验技术研究院,国家市场监管重点实验室(乳及乳制品检测与监控技术),上海 200233)

蔗糖脂肪酸酯通常由蔗糖与脂肪酸或脂肪酸衍生物合成,是一种绿色、非刺激性、非离子型表面活性剂,在食品中作为乳化剂有着非常广泛的应用。蔗糖脂肪酸酯每年产量的80%消费在食品加工业中,主要应用于饮料、乳制品、冷冻饮品、杂粮制品等领域[1-5]。蔗糖脂肪酸酯在生产过程中会使用到有机溶剂,目前世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives,JECFA)、欧盟、《食品化学法典》(Federal Communications Commission,FCC)、日本食品添加物公定书、韩国食品添加剂法典都规定了蔗糖脂肪酸酯中溶剂残留指标,而且JECFA和欧盟还规定生产蔗糖脂肪酸酯的溶剂仅有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、异丙醇、丙二醇、异丁醇和甲基乙基酮,其他溶剂不得使用,同时还规定了上述7 种溶剂及生产过程中可能产生的甲醇的限量标准,规定甲醇、异丁醇和甲基乙基酮的最高限量为10 mg/kg,乙酸乙酯和异丙醇的最高限量为350 mg/kg[6-9]。而国内目前的GB 1886.27—2015《食品安全国家标准 食品添加剂 蔗糖脂肪酸酯》[10]和GB 10617—2005《食品添加剂 蔗糖脂肪酸酯(丙二醇法)》[11]都未规定溶剂残留指标。

顶空气相色谱法是将待测样品密闭于顶空瓶中,通过加热使样品中的挥发性有机物挥发出,待挥发性有机物在顶空瓶中达到平衡后,取上部气体进气相色谱仪分析,该方法的优点在于前处理简单,样品中的基质除了挥发性物质一般不会进入气相色谱仪,从而不会污染仪器[12],目前检测食品接触材料[13-14]和药品中残留溶剂[15-18],饮料中的甲醇、乙醇[19-21]以及食品中风味物质[22-25]主要采用顶空气相色谱法,同时还有报道用顶空气相色谱-质谱联用法[26-32]检测食品和药品中残留溶剂。

本研究建立了JECFA和欧盟规定的8 种有机溶剂中适合顶空气相色谱法检测的5 种溶剂甲醇、乙酸乙酯、异丙醇、异丁醇和甲基乙基酮的检测方法。目前国内未见蔗糖脂肪酸酯中残留溶剂的相关检测方法,一直未对蔗糖脂肪酸酯中的残留溶剂量进行检测,关于蔗糖脂肪酸酯中残留溶剂量的相关研究很少。因此有必要建立检测方法,对蔗糖脂肪酸酯中的残留溶剂量进行检测,有利于保障蔗糖脂肪酸酯产品质量安全,促进我国蔗糖脂肪酸酯产品出口到国际市场。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

购买14 批次亲水型蔗糖脂肪酸酯和6 批次亲油型蔗糖脂肪酸酯产品。

甲醇、异丙醇 国药集团化学试剂有限公司;甲基乙基酮、乙酸乙酯、异丁醇 上海沃凯化学试剂有限公司;上述5 种溶剂的纯度均大于99%。

1.2 仪器与设备

7890B气相色谱仪、7697A顶空进样器 美国安捷伦公司;ME104E万分位电子天平 梅特勒-托利多科技(中国)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 混合对照储备液的配制

精密称取乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、异丁醇和甲基乙基酮各100 mg,置于10 mL容量瓶,用水定容至刻度,摇匀,即得10 mg/mL的混合对照储备液。

1.3.2 混合对照工作液的配制

分别准确移取10、50、100、200、500、2 000 μL上述混合对照储备液,置于10 mL容量瓶,用水定容至刻度,摇匀,即得10、50、100、200、500、2 000 mg/L的混合对照工作液。

分别准确吸取上述6 种混合对照工作液5 μL,分别置于含有1 g不含上述5 种溶剂蔗糖脂肪酸酯样品的20 mL顶空进样瓶中,盖紧瓶盖,得到标准系列对照工作溶液,折算到1 g样品中蔗糖脂肪酸酯含量为0.05~10.00 mg/kg。

1.3.3 样品检测

称取1.0 g样品置于20 mL顶空瓶中,盖紧瓶盖,上顶空气相色谱仪检测。

1.3.4 样品加标实验

准确移取10、200、2 000 mg/L的混合对照工作液各5 μL,选择不含上述5 种溶剂的蔗糖脂肪酸酯样品进行加标回收实验,样品中蔗糖脂肪酸酯含量分别为0.05、1.00、10.00 mg/kg,每个梯度重复测定6 次。

1.3.5 仪器条件

色谱柱:DB-1(60 m×530 µm,1 µm);柱温40 ℃,保持10 min,以10 ℃/min升至240 ℃;检测器:氢火焰离子化检测器;检测器温度250 ℃;进样口温度110 ℃;载气:氮气;柱流速3.5 mL/min;分流比5∶1;氢气流速30 mL/min,空气流速300 mL/min。顶空进样,平衡温度80 ℃,平衡时间40 min;定量环温度90 ℃;传输线温度120 ℃;进样体积1.0 mL。

样品中残留溶剂含量按下式计算。

式中:X为样品中残留溶剂含量/(mg/kg);C为由线性方程计算得到的试样中残留溶剂含量/µg;m为取样量/g。

1.4 数据处理

运用Excel 2016软件进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 进样方式的选择

采用顶空气相色谱法检测溶剂残留,分别称取样品直接进样和将样品溶解后进样2 种进样方式。常用的溶解溶剂有水、二甲基甲酰胺和二甲基亚砜等,蔗糖脂肪酸酯又分亲油(SE-15)和亲水(SE-11)两大类,经实验发现,1 g样品在20 mL水、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和四氢呋喃中均不能完全溶解。顶空气相色谱法在进样过程中会吹入氮气,使得粉末在顶空瓶中悬浮,从而导致进样针堵塞,因此粉末样品一般不推荐直接顶空进样。但是本研究发现,蔗糖脂肪酸酯样品在80 ℃加热5 min,其性状就由粉末状转变为黏稠状,因此后续进样时不会堵塞进样口,同时后续经过加标实验发现回收率较好。因此本研究检测蔗糖脂肪酸酯中的5 种残留溶剂选择直接进样。

2.2 顶空平衡温度和时间的选择

选择溶剂残留分析色谱柱DB-1(60 m×530 µm,1 µm)作为色谱柱,对5 μL 100 mg/L混合对照品溶液进行平衡温度分别为50、60、70、80 ℃的平衡实验,发现平衡温度达到70、80 ℃时5 种残留溶剂的峰面积不再有明显增加。选择平衡时间分别为15、20、30、40 min,发现平衡时间达到30 min时5 种残留溶剂的峰面积不再明显增加。考虑到实际样品检测时样品可能会对残留溶剂有影响,因此选择平衡温度80 ℃、平衡时间40 min作为实验条件。在上述条件下5 种残留溶剂标准品的色谱峰实现明显分离,结果见图1。

图1 5 种残留溶剂标准品的色谱图Fig.1 Chromatograms of five residual solvent standards

2.3 方法验证结果

2.3.1 曲线线性范围和检出限

按照上述仪器条件,对混合对照工作溶液进行检测,以质量浓度为横坐标,峰面积响应为纵坐标作标准曲线。按照上述前处理方法,分别以RS/N=3和RS/N=10计算方法的检测限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ)。

由表1可知,甲醇、异丙醇、甲基乙基酮、乙酸乙酯和异丁醇5 种残留溶剂含量在0.05~10.00 µg(折算到1 g样品中含量为0.05~10.00 mg/kg)线性范围内,线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法的LOD依次为0.007 32、0.005 90、0.006 82、0.007 35、0.005 74 mg/kg,方法的LOQ依次为0.024 4、0.019 7、0.022 7、0.024 5、0.019 2 mg/kg。

表1 5 种溶剂的线性方程、相关系数、LOD和LOQTable 1 Linear equations, correlation coefficients (r), LOD and LOQ of five solvents

2.3.2 回收率和精密度实验

按照上述仪器条件对加标样品进行检测,计算5 种溶剂的回收率和精密度,由表2可知,5 种残留溶剂的加标回收率为81.7%~96.8%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.90%~4.52%。

表2 5 种溶剂不同添加水平下回收率和精密度结果(n =6)Table 2 Recoveries and precision RSD of five solvents from samples spiked at different levels (n = 6)

2.4 样品中残留溶剂含量

2.4.1 实际样品的检测

将20 批次样品按照上述方法测定,其中3 批次未检出残留溶剂,17 批次检出甲醇、乙酸乙酯和异丁醇,17 批次样品溶剂残留的检出结果见表3。检出的17 批次样品中有13 批次样品中残留溶剂的检测结果大于方法的定量限,有4 批次样品中的残留溶剂量大于检出限,但小于定量限,均为甲醇。

表3 17 批次样品残留溶剂的测定结果Table 3 Contents of residual solvents in seventeen lots of samples mg/kg

16 批次样品检出甲醇,检出量为0.015 1~9.420 0 mg/kg,6 批次样品检出乙酸乙酯,检出量为0.034 7~0.097 4 mg/kg,3 批次样品检出异丁醇,检出量依次为0.056 8、0.047 4、0.050 0 mg/kg。20 批次样品甲醇的检出频次及含量均最高,特别是最高值达到9.420 0 mg/kg,已经接近当前国外蔗糖脂肪酸酯中甲醇的最高限量标准10 mg/kg,乙酸乙酯和异丁醇虽然有检出,但均远低于目前国外蔗糖脂肪酸酯中相应的限量标准,20 批次样品中均未检出异丙醇和甲基乙基酮。

2.4.2 亲油型和亲水型溶剂残留量分布

本研究结果表明,亲油型蔗糖脂肪酸酯检出的甲醇含量较高,本次检出甲醇含量最高的3 批次样品均为亲油型蔗糖脂肪酸酯。亲油型蔗糖脂肪酸酯中的残留溶剂主要为甲醇,乙酸乙酯和异丁醇检出相对较少,除了有一批次亲油型蔗糖脂肪酸酯检出乙酸乙酯,其余的乙酸乙酯和异丁醇都是亲水型蔗糖脂肪酸酯中检出的。

2.4.3 不同批次间残留溶剂的差异

17 批次检出残留溶剂的产品中有4 批次(10、11、14和15号)亲水型(S-11)产品是2 个厂家不同日期生产的,结果发现:10号和11号,14号和15号样品检出的残留溶剂种类和残留量差异不显著,说明在原料和生产工艺相同的情况下,样品中的残留溶剂种类和含量基本一致。

2.4.4 样品中残留溶剂的稳定性

上述检出残留溶剂的17 批次样品,各取1 g置于20 mL顶空瓶中,不加盖,室温在通风橱中放置10 d,再用上述检测方法进行检测,发现16 批次样品中的甲醇放置前后结果差异显著,放置10 d后样品中的甲醇含量显著降低,2 次检测结果的RSD为11.2%~112.3%,甲醇含量高的样品2 次结果的差异更显著,乙酸乙酯和异丁醇的2 次检测结果差异不显著,2 次结果的RSD均小于5%,这可能跟蔗糖脂肪酸酯中甲醇、乙酸乙酯和异丁醇的形成原因有关。放置前后样品中残留溶剂测定结果见表4。

表4 放置前后样品中残留溶剂测定结果Table 4 Results of determination of residual solvents in samples before and after standing mg/kg

3 结 论

建立了顶空气相色谱法,检测蔗糖脂肪酸酯中的5 种溶剂残留量,结果表明:5 种残留溶剂在0.05~10.00 mg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999;甲醇、异丙醇、甲基乙基酮、乙酸乙酯和异丁醇的方法定量限依次为0.024 4、0.019 7、0.022 7、0.024 5、0.019 2 mg/kg,3 个水平加标回收实验的回收率为81.7%~96.8%,RSD均小于5%。该方法操作简单、回收率和精密度良好,目前JECFA、欧盟、FCC、日本食品添加物公定书、韩国食品添加剂法典都规定蔗糖脂肪酸酯中的上述5 种溶剂残留量的最小限量值为10 mg/kg,该方法能满足要求。

20 批次蔗糖脂肪酸酯样品检测结果显示,17 批次样品中检出的3 种溶剂残留量均符合JECFA的要求。亲油型蔗糖脂肪酸酯中检出的残留溶剂种类相对较少,主要是甲醇,但是部分产品含量较高,需要引起关注。亲水型蔗糖脂肪酸酯中的残留溶剂检出种类相对较多,但普遍含量较低,远低于目前国际上规定的限量标准。

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