复合益生菌对幼鲵生长及免疫指标的影响试验

周韶辉 解宜兴 毛盼 王丞 王晓清 周先文 魏营

文章编号：1006-3188（2023）04-017-04

摘要：本研究旨在研究复合益生菌对幼鲵生长及免疫指标的影响。随机选取体质健康、体重100g/尾左右的2龄幼鲵，分别添加占基础饵料重量0.20%、0.40%、0.60%的配比复合益生菌进行拌料投喂试验，并设置空白对照组，每组设置三个重复组，共12组，试验期180d。试验结束时测定各组大鲵的生长及摄食指标、血液生理生化指标及血清抗氧化酶及非特异性免疫指标，结果显示三个试验组大鲵终末体重、平均增重率、特定生长率均显著高于对照组，指标数据说明以复合益生菌拌料投喂有利于大鲵的生长；中剂量组及高剂量组大鲵血液中的总蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量均显著高于对照组及低剂量组；试验组大鲵血清中酸性磷酸酶（ACP）均高于对照组，这显示出复合益生菌拌料投喂对大鲵的非特异性免疫有促进作用；中剂量组及高剂量组大鲵血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著性高于对照组及低剂量组。结果表明，复合益生菌（芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌）添加日常饵料重量0.40%、0.60%的配比中剂量、高剂量组不仅能促进大鲵的生长发育，同时还能促进大鲵对营养物质的吸收利用，从而增强体质，提升疾病抵抗力。

关键词：复合益生菌；幼鲵；免疫指标

中图分类号：S966.6文献标识码：A

中国大鲵拥有极高的科研及经济价值，已在我国已形成规模化养殖。随着养殖规模的扩大和养殖环境的恶化，我国大鲵养殖业越来越受困于病害的影响，尤其是细菌性、真菌性和病毒性疾病给大鲵养殖业造成了巨大的经济损失。由于传统的化学类和抗生素类药物毒性较大，不仅容易使病原微生物产生耐药性，还严重污染水环境，因此寻找可以替代药物的免疫添加剂正逐渐成为本领域的研究热点。水产动物益生菌的主要作用机制包括免疫促进、抑菌、营养促进等［1］，本研究开展复合益生菌制剂对大鲵生长及免疫力的影响，以期对大鲵的疫病绿色防控提供更有效的方法，对大鲵养殖业的健康发展和资源保护具有重要的积极意义。接下来主要就针对复合益生菌对幼鲵生长及免疫指标的影响进行研究。

1 材料与方法

1.1 试验地点

湖南张家界大鲵国家级自然保护区事务中心。

1.2 试验时间

2022年01月-2022年06月，试验期共计180d。

1.3 试验材料

复合益生菌由吉首大学微生物实验室提供，该复合益生菌为30%芽孢杆菌、30%酵母菌、40%乳酸菌组成的菌液，经平皿菌落计数法测定，结果显示活菌总数为5×109CFU/mL。供试大鲵由湖南张家界大鲵国家级自然保护区事务中心提供，为规格100g/尾左右的2龄幼鲵。

1.4 试验内容

根据前期预试验结果，设计单因素试验考察以占基础饵料不同配的复合益生菌拌料投喂，对大鲵生长指标及非特异性免疫指标的影响。

1.4.1供试大鲵的选择与分组

随机选取体质健康、体重100g/尾左右的2龄幼鲵（幼鲵为卵黄完全消失，从开始主动摄食到外鳃完全消失的大鲵）48尾，分为对照组、复合益生菌拌料投喂低剂量组、中剂量组及高劑量组，每组设3个重复，每个重复4尾大鲵。其中对照组：基础饵料投喂；低剂量组：以基础饵料重量0.20%配比复合益生菌拌料投喂；中剂量组：以基础饵料重量0.40%配比复合益生菌拌料投喂；高剂量组：以基础饵料0.60%配比复合益生菌拌料投喂。

1.4.2 试验饵料组成

根据幼鲵阶段生长需要，调整基础饵料配方，以50%米虾、50%大草鱼切丝进行投喂。

1.4.3 生长及摄食指标的测定

试验期间，记录供试大鲵的初始体重及试验结束时的体重、每日投饵量及残饵量，计算试验期内大鲵体重增加量、平均增重率、饵料系数、特定生长率。具体计算公式如下：

体重增加量=W2－W1；

平均增重率=［（W2－W1）/W1］/n×100%；

饵料系数=（F1－F2）/（W2－W1）；

特定生长率=（lnW2－lnW1）/t×100%

式中，W1为大鲵的初始总重、W2为试验结束时大鲵的总重，n为各个重复的样本数，F1为总投饵量、F2为总残饵量，t为实验总天数。

1.4.4 血液生理指标和生化指标的测定

试验结束时，对所有供试大鲵以无菌注射器进行尾静脉采血，并将血样注入到添加抗凝剂的采血管中，将血样低温保存，送至湖南张家界市人民医院实验室以全自动生化仪进行检测。生理指标主要测定白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白（Hb）及血小板总数（Plt）等，生化指标主要测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL-K）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、甘油三酯（TG）胆固醇（CHOL）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）等。

1.4.5 血清抗氧化酶和非特异性免疫指标测定

试验结束时，对所有供试大鲵以无菌注射器进行尾静脉采血，采集到的血液于4℃静置2h后，再以4000r/min离心10min，取上清液，即为血清。分别以试剂盒测定待测血清中的酸性磷酸酶（ACP）、过氧化氢酶（CAT）及SOD（超氧化物歧化酶）等抗氧化酶和非特异性免疫指标。具体方法如下：

（1）ACP的测定采用酸性磷酸酶试剂盒，其活力单位定义为：100mL血清或1g组织蛋白在37℃与基质作用30min产生1mg酚为一个金氏单位；

（2）CAT的测定采用过氧化氢酶测定试剂盒，其活力单位定义为：1mL或1mg组织每秒钟分解1μmol的H2O2的量为一个活力单位；

（3）SOD的测定采用总SOD试剂盒，其中以血清为样品，活力单位定义为1mL反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量。

1.4.6 发病率及成活率统计

试验期间密切观察各组大鲵的生长情况，如发生病害感染应及时采取隔离措施，并对病鲵进行疾病诊断及治疗。试验结束时，统计各组大鲵各类病害发生情况、死亡数，计算发病率、死亡率及成活率。

1.5 饲养管理

将供试大鲵养殖于阴凉避光处，养殖水源为宝峰湖湖水，水温保持在20～25℃之间，溶解氧＞6.0mg/L，pH值为6.5～7.5。饵料经消毒后于每日18：00投喂，次日08：00捞出残饵，分别记录每日各组的投饵量与残饵量。

1.6 统计分析方法

试验数据用Excel软件处理后，用SPSS 13.0进行统计分析，结果以“平均值±标准差”表示，P<0.05表示差异显著，P＜0.01表差异极显著。

2 结果与分析

2.1 复合益生菌拌料投喂对大鲵生长性能的影响

由统计分析（见表1）可知，试验结束时，三个试验组大鲵终末体重、平均增重率、特定生长率均显著高于对照组（P＜0.05），说明以復合益生菌拌料投喂有利于大鲵的生长；三个试验组之间终末体重、平均增长率、特定生长率差异不显著（P＞0.05）；四个组别的饵料系数均无显著性差异；四组试验大鲵均未出现死亡。

2.2 复合益生菌拌料投喂对大鲵血液生理指标的影响

由统计分析（见表2）可知，试验结束时，四组大鲵血液中的白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白（Hb）以及血小板总数（Plt）均无显著性差异（P＞0.05），说明复合益生菌拌料投喂对大鲵血液生理指标无不利影响。

2.3 复合益生菌拌料投喂对大鲵血液生化指标的影响

由统计分析（见表3）可知，试验结束时，中剂量组及高剂量组大鲵血液中的总蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量均显著高于对照组及低剂量组（P＜0.05），但中剂量组与高剂量组之间、对照组与低剂量组之间总蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量差异不显著（P＞0.05）；四组大鲵血液中的总胆红素（TBIL-K）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHOL）谷草转氨酶（AST）、以及谷丙转氨酶（ALT）碱性憐酸酶（ALP）含量均无显著性差异（P＞0.05）。

2.4 复合益生菌拌料投喂对大鲵血清抗氧化酶和非特异性免疫指标的影响

由统计分析（见表4）可知，试验结束时，四组大鲵血清中的酸性磷酸酶（ACP）及过氧化氢酶（CAT）活性均无显著性差异（P＞0.05），但试验组大鲵血清中酸性磷酸酶（ACP）均高于对照组，这显示出复合益生菌拌料投喂对大鲵的非特异性免疫或有促进作用；中剂量组及高剂量组大鲵血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著性高于对照组及低剂量组（P＜0.05），但中剂量组与高剂量组之间、低剂量组与对照组之间差异不显著（P＞0.05）。

2.5 复合益生菌拌料投喂对大鲵发病率及成活率的影响

由统计分析（见表5）可知，试验结束时，所有组别的大鲵均无死亡；其中对照组发病率为16.67%，低剂量组发病率为8.33%，中剂量组及高剂量组发病率均为0；经诊断，所有患病大鲵所患疾病均为水霉病。

3 讨论

益生菌是通过定殖在动物体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。研究表明，益生菌能促进水生动物生长性能及免疫力提升，减少病害的发生，从而降低生产成本。此外，益生菌还可改善水体环境，从而使养殖获得较好的社会效益和经济效益［2］。

相较于单一益生菌，近年来复合型益生菌的应用日益增多，与添加单一益生菌相比，在饲料中添加复合益生菌对降低肠道细菌数量、调节水产动物肠道菌群平衡、改善肠道菌群组成等具有更好的促进作用［3］。

本研究以芽孢杆菌、乳酸菌及酵母菌组成的复合益生菌拌料投喂大鲵，结果显示，试验组大鲵的生长性能得到有效提升。血液中的总蛋白由白蛋白和球蛋白组成，良好的营养状态可以使上述指标维持在较高水平。试验结果显示，以占日常饵料配比0.40%、0.60%的复合益生菌拌料投喂大鲵，能使得大鲵血液中总蛋白、白蛋白显著高于对照组，说明合理添加量的益生菌的使用能促进大鲵对营养物质的吸收利用，从而增强其体质［4］。

另外，试验结果还显示，以复合益生菌拌料投喂的大鲵相较对照组大鲵血液中酸性磷酸酶（ACP）活性得到显著提升，这显示出复合益生菌拌料投喂对大鲵的非特异性免疫或有促进作用。

此外，试验期间对照组及低剂量组部分大鲵体表出现灰白色菌丝，并伴随表皮溃烂及少量出血，部分病鲵表现出焦躁不安、在饲养池内急速游动等状态，经诊断，确定上述大鲵感染水霉病。对照组与中、高剂量组发病率的差异进一步证实了适量以添加芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌组成的复合益生菌拌料投喂，对增强大鲵体质有一定的促进作用［5］。

综上所述，以芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌组成的复合益生菌拌料投喂不仅能在一定程度上促进大鲵的生长发育，同时还能在一定程度上促进大鲵对营养物质的吸收利用，从而增强其体质，提升其疾病抵抗力。但由于本试验使用的为成品复合益生菌，因此对三种单一菌种之间的协同或拮抗作用机理尚不清楚，还有待进一步研究。

参考文献

［1］张泽龙，张秀霞，李军涛，等.益生菌在水产动物养殖中的应用［J］.饲料研究，2022，45（21）：133-136.

［2］ 步海平.益生菌在水产养殖中的应用［J］.渔业致富指南，2022（01）：41-43.

［3］徐晴，李若铭，王桂芹.益生菌对鱼类黏膜免疫影响的研究进展［J］.饲料工业，2022，43（06）：5-8.

［4］周韶辉，解宜兴，周先文，等.枯草杆菌二联活菌颗粒对稚鲵生长及免疫指标的影响试验［J］.中国水产，2020（11）：74-77.

［5］周韶辉.中草药与益生菌对大鲵生长及免疫的影响研究［D］.湖南农业大学，2020.

*通讯作者：魏营（1983-）男，工程师，野生动植物保护与利用 E-mail：zsh78718@163.com