金钱草、聚花过路黄对大鼠肾结石防治的药效比较研究

2023-09-03李飞艳罗晓云刘群群刘园园尹升

中国民族民间医药·上半月 2023年8期

李飞艳罗晓云刘群群刘园园尹升

【摘要】目的：比較金钱草、聚花过路黄对大鼠肾结石形成的影响。方法：参照《中国药典》金钱草片的制备方法制备金钱草、聚花过路黄煎液。连续4周以乙二醇联合氯化铵灌胃，制备肾结石模型大鼠，药物组大鼠以4.0 g/kg的剂量灌胃上述两种药物，术前禁食24 h，酶标法检测血清、肾组织中的钙离子浓度，变色酸比色法测血清、肾组织中的草酸浓度，做肾病理切片，观察草酸钙结晶的形成情况等。结果：与空白组比较，模型组、两个药物组大鼠肾组织中钙离子、草酸浓度显著增高（P<0.01），血清中草酸浓度显著降低（P<0.01），模型组、金钱草组大鼠血清中钙离子浓度显著降低（P<0.01，P<0.05），聚花过路黄组大鼠血清中钙离子无显著性差异；与模型组比较，两个药物组大鼠肾组织中钙离子、草酸浓度显著降低（P<0.01），聚花过路黄组大鼠血清中钙离子、草酸浓度升高显著（P<0.05）；与金钱草组比较，聚花过路黄组肾组织与血清中钙离子、草酸浓度均无显著差异。与空白组相比，模型组、两个药物组肾组织切片均可见明显草酸钙结晶簇集或散在；与模型组比较，两个药物组肾组织中草酸钙结晶分布较少。结论：金钱草、聚花过路黄对乙二醇联合氯化铵制备的肾草酸钙结石模型大鼠有相似的防治效果。

【关键词】金钱草；聚花过路黄；肾结石；大鼠；草酸钙

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2023）15-0033-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.13.zgmzmjyyzz202315008

Abstract：Objective To study the effects of Lysimachia christinae and Lysimachia congestiflora on rat kidney stone formation. Methods The liquid medicine of Lysimachia christinae and Lysimachia congestiflora was prepared according to the Jinqiancaotablets in Chinese Pharmacopoeia. To establish kidney stone model， SD rats were given ethylene glycol and ammonium chloride for 4 weeks. The rats in the two administration groups were given the above liquid medicine （4.0 g/kg） by gavage every day， fasting for 24h before the surgery. Enzyme labeling method was used to detect the concentration of calcium ions in serum and kidney tissues， Chromotropic acid colorimetry was used todetect the concentration ofoxalic acidin in serum and kidney tissues. HE staining was performed to observe pathological changes and calcium oxalate deposition. Results Compared with normal group， calcium ion and oxalic acid concentration in renal tissue of rats in the model group andtwo medication groups were significantly increased （P<0.01）， the concentration of oxalic acid in serum decreased significantly （P<0.01），the concentration of calcium ionin serumof rats in the model group and Jinqiancao groupwere significantlydecreased（P<0.01，P<0.05），there was no significant difference in Juhuaguoluhuang group. Compared with model group， calcium ion and oxalic acid concentration in renal tissue of rats in thetwo medication groups were significantly decreased （P<0.01），calcium ion and oxalic acid concentration inserum of Juhuaguoluhuang group was significantly increased（P<0.05）;Compared with Jinqiancao group， there were no significant differences in the concentration of calcium and oxalic acid in renal tissue and serumofJuhuaguoluhuang group.Compared with normal group， kidney tissues in model group and twomedication groups showed obvious clusters or scattered calcium oxalate crystals， while compared with the model group， the kidney tissue crystals of rats in the medication groups were significantly reduced. Conclusion Lysimachia christinae and Lysimachia congestiflora have similar preventive and therapeutic effects on renal calcium oxalate stone model rats prepared by ethylene glycol combined with ammonium chloride.

Keywords：Lysimachia Christinae；Lysimachia Congestiflora；Kidney Stone；Rat；Calcium Oxalate

金钱草为2020年版《中国药典》收载的中药品种［1］，为报春花科植物过路黄Lysimachia christinae Hance的干燥全草，金钱草为排石要药，具有利湿退黄、利尿通淋、解毒消肿的功效，广泛用于湿热黄疸、肝胆结石和泌尿道结石等的治疗［2-4］，主治热淋、沙淋、尿涩作痛、黄疸尿赤、肝胆及尿路结石［5］，尿结石属于中医淋症中的石淋，中医认为石淋为下焦湿热蕴结、气滞血瘀、或湿热久留耗伤肾阴或肾阳所致［6］。文献［7］报道大剂量单用金钱草煎汤代茶饮可治疗石淋。聚花过路黄为《中药大辞典》收载的品种［8］，药名“风寒草”，在2010年版《四川省中药材标准》中也以“风寒草”收载［9］，为报春花科植物聚花过路黄Lysimachia congestiflora Hemsl.的干燥全草，有祛风散寒、化痰止咳、解毒利湿、消积排石的功效，用于治疗风寒头痛、咳嗽、痰多、尿路结石等，关于其药效及临床应用的文献报道极少，仅限于聚花过路黄对动物脑缺血、体外抗炎、对动物胆汁、尿液排出、胃蛋白酶等消化功能的影响方面［10-13］。

因金钱草与聚花过路黄的原植物来源于同科同属，形态相似，常易被误认误采、误售误用，导致在临床应用中出现了聚花过路黄误做金钱草使用的现象，金钱草作为排石要药在临床大量使用，该现象已经引起了行业相关专家的高度重视，并对在临床上聚花过路黄误用为金钱草的原因、及两者的鉴定方法与区别特征进行了报道［14-17］，在此现象未引起全行业足够重视及制定更好的防范措施之前，比较研究两药在结石防治效果方面的影响很有必要。关于误用后对结石的防治效果会产生何影响，尚未见相关报道，现将团队成员对两者在肾结石防治的药效对比研究结果报道如下，以期为聚花过路黄在临床正确用药提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 受试药物金钱草（产地：四川；批号：1711012，由江西樟树天齐堂中药饮片有限公司提供），按照2020年版《中国药典》鉴定为正品；聚花过路黄，购于湖南邵东廉桥中药材市场，经鉴定符合2010年版《四川省中药材标准》规定。

金钱草煎液，参照2020年版《中国药典》收载的金钱草片中金钱草煎液的制作方法，金钱草置于不锈钢锅中，加纯净水浸泡60 min，煎煮3次，第一、二、三煎加水量分别为药量的7倍、3倍、3倍，每次煎煮60 min，趁热以纱布过滤，合并3次滤液，减压浓缩至0.5 g/mL的药液备用，临用前加纯净水稀释成所需浓度。聚花过路黄煎液的制备同金钱草煎液。

1.2 实验动物 SD大鼠，40只，雄性，体质量（200±20）g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，质量合格证号43004700042552，饲养于湖南中医药大学动物实验中心，使用证号00087067。

1.3 肾结石模型大鼠制备模型组及两个药物组动物参照文献方法［18-21］制备肾草酸钙结石模型大鼠，以1%的乙二醇液替代饮用水，自由饮用，并每日每只动物灌胃2%的氯化铵溶液2 mL，连续4周。

1.4 分组及给药动物适应性喂养1周后随机分为4组，即空白组、模型组、金钱草组（简称“JQC组”）、聚花过路黄组（简称“JHGLH组”），每组10只。空白组动物以1 mL/100 g（体质量）纯净水灌胃，自由饮水；两个药物组在灌胃2%氯化铵的同时以相应的药物按1 mL/100g（体质量）给药，大鼠用药剂量以生药计为4.0 g/kg（体质量），1日1次；模型组以2%氯化铵灌胃。各组以正常基础饲料喂养4周。

1.5 检测指标及方法末次用药后，自由饮水，禁食24 h，腹腔注射25%的乌拉坦0.5 mL/100 g（体质量）实施麻醉，剖腹，分离腹主动脉，真空管采血，血液于室温静置2 h后，3500 r·min-1离心10 min，取上层血清，测血清中钙与草酸浓度；取双肾，右肾称重后加入1 moL/L的HCL，用高速分散器于冰浴中制备匀浆液，匀浆液于3000 r·min-1离心20 min，取上清液，测肾组织中钙离子与草酸浓度；左肾置于多聚甲醛中固定，做常规石蜡包埋切片、HE染色，显微镜观察肾组织中草酸钙结晶的形状、大小、数量等情况。

血清与肾组织中钙含量的测定采用酶标法，严格按试剂盒说明书操作；草酸浓度的测定依据文献方法，采用变色酸比色法［22-24］，紫外可见分光光度计于570 nm波长处测吸光度，绘制标准曲线，计算草酸浓度，计算公式：样品草酸浓度（mg/L）=标准曲线查得的 μg数×1000/（0.5×0.99×1000）。

1.6 检测试剂钙测试盒，批号20180320，由南京建成生物工程研究所提供。氯化铵，分析纯，批号20171031，国药集团化学试剂公司提供；乙二醇，分析纯，批号20171130，国药集团化学试剂公司提供；变色酸（C10H8O8S2），分析纯，上海迈坤化工公司提供；溴麝香草酚蓝（溴百里酚蓝），分析纯，批号20180109，上海迈坤化工公司提供；无水硫酸钙，批号20170601，国药集团化学试剂公司提供。

1.7 仪器 Thermo Fisher Scientific酶标仪，规格型号1510-05118，赛默飞世尔科技有限公司提供；SP-1901UV型紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司提供；S10手提式高速分散器，宁波新芝生物科技公司提供。

1.8 統计学方法数据用SPSS26统计学软件进行分析，计量资料以均值加减标准差（x±s）表示，各组之间进行独立t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肾组织与血清中草酸、钙离子的浓度与空白组比较，模型组、两个用药组大鼠肾组织中钙离子浓度显著增高（P<0.01），模型组、金钱草组（JQC组）大鼠血清中钙离子浓度显著降低（P<0.01，P<0.05），聚花过路黄组（JHGLH组）大鼠血清中钙离子无显著性差异；与模型组比较，两个用药组大鼠肾组织中钙离子浓度显著降低（P<0.01），JHGLH组血钙离子浓度显著增高（P<0.05），JQC组血钙离子浓度无显著性差异；与JQC组比较，JHGLH组大鼠肾组织与血清中钙离子浓度均无显著差异。结果详见表1。

与空白组相比，模型组、两个药物组大鼠肾组织中的草酸浓度显著升高（P<0.01），血清中草酸浓度显著降低（P<0.01）；与模型组比较，两个用药组大鼠肾组织中的草酸浓度显著降低（P<0.01），血清中草酸浓度有增高趋势，其中JHGLH组升高显著（P<0.05）；与JQC组比较，JHGLH组大鼠血清、肾组织中的草酸浓度均无明显差异。结果详见表1。

2.2 肾组织切片空白组动物肾组织中未发现有结晶，肾小球、肾小管清晰可见（如图1所示），模型组及两个用药组肾组织内均可见明显结晶，结石率为100%；模型组动物肾小管扩张，形状不规则，管内充斥多种形状的结晶，以聚集成簇晶状者多见（黑色箭头所示）。如图2所示；JQC组肾小管扩张，管内草酸钙结晶以砂晶、柱晶多见（黑色箭头所示），结晶分布比模型组少。如图3所示；JHGLH组肾小管扩张明显，管内结晶簇集状者居多（黑色箭头所示），结晶分布比模型组少。如图4所示。

3 讨论

乙二醇法是制备肾草酸钙结石模型大鼠的常用方法［18-21］，乙二醇作为草酸的前体物质，进入体内后，在羟乙酸氧化酶、乳酸脱氢酶的作用下转化为草酸，经吸收入血液循环，使血中草酸浓度增加，同时加服氯化铵，造成对肾小管的损伤，可提高血钙水平，增加草酸钙结石的形成，实验结果显示模型组大鼠肾组织中草酸和钙的含量明显升高，肾组织切片均可见有大量草酸钙结晶形成，成石率为100%，造模成功进一步验证了乙二醇制备肾草酸钙结石模型的可行性。模型组、两个用药组大鼠血清中的钙离子、草酸浓度并未因为草酸转化增加以及氯化铵对肾小管的损伤而明显增加，反而明显降低，推断可能为大量草酸钙结晶在肾组织的形成消耗了游离的草酸与钙离子的缘故。

与模型组动物比较，金钱草组动物血清中钙离子、草酸有不同程度增加，肾组织中草酸钙结晶分布较少，与临床使用金钱草防治肾结石的效果相吻合，聚花过路黄组与金钱草组相比，无论是肾组织、血清中的草酸与钙离子浓度还是肾组织切片中草酸钙结晶的分布范围都无明显差异，因而认为聚花过路黄防治肾结石与金钱草有相似效果。

现代研究［25］认为金钱草治疗肾结石的机制主要有增加尿流量、减少肾中草酸钙结晶的堆积、抑制草酸钙形成等，王亚婷等［26］通过网络药理学研究金钱草治疗肾结石的分子机制，发现金钱草抗肾结石的机制涉及NF-κB结合、热休克蛋白结合、核受体活性、转录因子活性，直接的配体调节序列特异性DNA结合、类固醇结合、组蛋白激酶活性等。本研究表明聚花过路黄能通过抑制草酸与钙离子结合，而达到防治肾结石的作用，结合文献［12］报道聚花过路黄能增加尿流量，表明聚花过路黄与金钱草一样具有增加尿流量、抑制草酸钙结晶形成的机制，是否还具有肾保护等其他机制有待进一步研究。

参考文献

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