健步消肿止痛油成分分析与评价*

陈土荣，吴启端，吴雪茹

（1. 广州中医药大学第三附属医院，广东 广州 510378； 2. 广州中医药大学第一附属医院，广东 广州 510405）

健步消肿止痛油是广州中医药大学第三附属医院（下文以我院代称）的院内制剂，有活血化瘀、舒筋通络、消肿止痛功效。临床治疗跌打损伤、慢性劳损、筋伤、扭挫伤，以及骨质增生、骨质疏松等引起的疼痛肿胀、瘀斑等症20 余年，其组成药物略有调整。本研究中根据目前组方药物特点［1］，采用气相色谱- 质谱联用（GC-MS）法分析其主要成分，并考察在不同条件下主要成分的变化，系统评价其内在质量和稳定性，为健步消肿止痛油的质量评价提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890A-5975C 型气质联用仪（美国Agilent公司）；AE-200 型分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度为0.1 mg）；0.45µm针筒式微孔滤膜过滤器（天津市腾达过滤器件厂）。

1.2 试药

健步消肿止痛油（批号分别为20180701，20180901，20181001，记为样品1，2，3），薄荷脑（南通薄荷厂有限公司，批号为180102），丁香油（湛江市睿致香料有限公司，批号为20180601），冰片（株洲松本药业有限公司，批号为180201），桉油（佛山市南海中南药化厂，批号为170901），松节油（湖南尔康制药股份有限公司，批号为060620180502），均由我院制剂室提供；无水乙醇为色谱纯，无水硫酸钠为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 试验条件

色谱柱为DB-1ms石英毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25µm），进样口温度为250 ℃，接口温度为260 ℃，载气为氦气，流速为1.0 mL/min，柱压为80 kPa，分流比为20∶1，进样量为1.0 µL；升温程序：初始温度为60 ℃，以5 ℃/ min 的速率升至75 ℃，以2 ℃/ min 的速率升至81 ℃，以1 ℃/min的速率升至83 ℃，以5 ℃/min的速率升至103 ℃，以30 ℃/min 的速率升至200 ℃，保持2 min。电子轰击离子源（70 eV），双灯丝；电离电压为1.2 kV，扫描范围40～400 aum，扫描间歇0.5 s。

2.2 供试品溶液制备

取样品约50 mg，精密称定，置5 mL容量瓶中，加无水乙醇定容，再加适量无水硫酸钠适量，用0.45µm 针筒式微孔滤膜过滤器滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

精密度试验：取同一批供试品溶液（样品批号为20180901）适量，按2.1项下试验条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果各成分峰面积的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法精密度良好。

稳定性试验：取同一批供试品溶液（样品批号为20180901）适量，分别于室温下放置0，2，4，6，8，12，24 h时按2.1 项下试验条件进样测定，记录峰面积。结果各成分峰面积的RSD均小于3.0%（n=7），表明供试品溶液在室温下放置24 h内基本稳定。

重复性试验：取样品（批号为20180901）适量，共6份，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下试验条件进样测定，记录峰面积。结果各成分的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法重复性良好。

2.4 样品检测

取样品（批号为20180701）适量，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下试验条件进样测定，部分成分GC - MS 总离子流图见图1（峰号1 - 21 对应表1 中的化合物1-21）。经谱库检索，结合质谱数据与人工图谱解析，鉴定样品中的21 个成分，与原料药对比，确定其来源。采用峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。其中，平均相对百分含量＞1%的主要成分有11个，分别为α-蒎烯、β-蒎烯、α-松油烯、β-水芹烯、1，8-桉叶素、异龙脑、龙脑、薄荷醇、丁香酚、石竹烯、伞花烃。21 个成分总相对百分含量＞98%，11 个主要成分总相对百分含量＞95%。详见表1。

表1 样品中21个成分的相对百分含量及其来源Tab.1 Relative percentage content and source of 21 components in samples

图1 总离子流图Fig.1 Total ion chromatogram

2.5 稳定性研究

室温敞口放置：取3批样品各1瓶，分别于室温敞口放置0，6，12，24，48 h 时取样，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下试验条件测定。结果11 个主要成分的相对百分含量的RSD均小于5.0%（n=5）。详见表2。

表2 室温敞口放置下样品主要成分相对百分含量（%）Tab.2 Relative percentage content of main components in samples under the condition of exposure at room temperature（%）

加热破坏与光照破坏：取3 批样品各50 mg，置5 mL 容量瓶中，于60 ℃加热2 h，按2.2 项下方法制备加热破坏供试品溶液，按2.1 项下试验条件进样测定。另取3 批样品各50 mg，置5 mL 容量瓶中，分别于紫外灯下254 nm和366 nm波长处各照射2 h，按“加热破坏”方法制备供试品溶液和进样测定。结果0 h、加热和光照后，11 个主要成分的相对百分含量的RSD均小于5.0%。详见表3。

表3 加热破坏与光照破坏条件下样品主要成分相对百分含量（%）Tab.3 Relative percentage content of main components in samples under heating and lighting damage（%）

长期稳定性：将3 批样品在上市包装条件下室温存放36 个月，每2～3 个月取样1 次，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，计算其平均相对百分含量。结果共检测14 次，11 个主要成分中9 个无明显变化，α- 松油烯逐渐减少，伞花烃逐渐增加，3 批样品中二者总平均相对百分含量分别为（2.366 ± 0.048）% 、（2.325 ± 0.047）% 、（0.769 ±0.027）%，RSD分别为2.01%，2.01%，3.48%。提示2 种成分相对百分含量互相消长，合计无明显变化。详见表4 和图2。

表4 样品36个月内主要成分相对百分含量（%）Tab.4 Relative percentage content of main components of samples within 36 months（%）

图2 36个月内3批样品中α-松油烯和伞花烃相对百分含量变化趋势Fig.2 Trends of relative percentage content change of α - terpinene and cymene in three batches of samples within 36 months

3 讨论

健步消肿止痛油含丁香油、薄荷脑、冰片、桉油、松节油等药物。松节油的主要成分为α-蒎烯，能增进局部血液循环、缓解肿胀和轻微止痛作用，穿透力强，能渗入深部组织而引起刺激，进而促进血液循环。故松节油在临床中常作为皮肤刺激药，用于治疗肌肉痛或关节痛等［2］。薄荷脑具有多种药理活性，能选择性地刺激人体皮肤或黏膜的冷觉感受器，产生冷觉反射和冷感。有研究表明，低温有利于抑制炎性反应［3］。薄荷脑外用可抗炎、止痛、止痒、抗菌、促进血液循环、减轻浮肿等［4-9］。桉油主要成分为1，8 - 桉叶素，具有促进透皮吸收、抗炎、抗氧化、抗微生物、抗肿瘤等药理作用，对机体的呼吸系统、神经系统、循环系统和消化系统均有一定的保护作用［10］。冰片主要成分是龙脑和异龙脑，具有开窍醒神、消肿止痛、抗菌、抗炎等功效［11］。丁香油具有抗菌、消炎和止痛等功效［12］。上述药物合用，可发挥抗炎、消肿、止痛作用。临床可有效治疗腰腿痛、肩颈痛、风湿痛、关节痛、跌打肿痛、肌肉劳损等症。

本研究中根据健步消肿止痛油组方，采用GC-MS法分析其成分，鉴定其中的21个化学成分，其总相对百分含量＞98%。主要成分有11个，其总相对百分含量＞95%。其中薄荷醇占27%，α- 蒎烯占25%，1，8 - 桉叶素、龙脑、丁香酚各占10%，异龙脑占6%。其余5 个成分相对百分含量均低于2%。通过室温敞口放置、加热破坏、光照破坏、室温放置36个月考察样品的稳定性，结果前3种条件下，样品中主要成分相对百分含量均无明显变化。室温下放置36 个月后，其中9 个主要成分相对百分含量无明显变化，α- 松油烯和伞花烃互相消长，但总量无明显变化。研究中发现，α- 松油烯和伞花烃转化速率与二者的比值有关，比值越大转化越慢；且单一原料药中未见二者转化的现象。推测可能是其他药物成分促成这2 个成分的转化，具体原因有待进一步研究。

综上所述，本研究中所建立的方法操作简便，结果稳定可靠，可为健步消肿止痛油的质量评价提供参考；健步消肿止痛油的主要成分在室温放置（短期、长期）、加热、光照条件下基本稳定。