急性心肌梗死病人血清微RNA-1283表达与中医证型的关系分析

林丹凤，陈艳俏，牛卫洲

急性心肌梗死是由冠状动脉病变导致心肌缺血而引起的心血管类疾病，属于中老年人常见疾病［1］。近年来随着社会发展，急性心肌梗死的发病人群逐步年轻化，且发病率和病死率逐渐升高，给人类生命健康带来极大威胁［2］。急性心肌梗死在中医学中被认为属于“真心痛”“卒心痛”“厥心痛”等范畴，其病位在心脏和血脉，病机为心脉痹阻，气血不通而引发心痛。中医证型复杂多样，可分为实证、虚证和虚实夹杂证三类，具体分为痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型、阴竭阳脱型七大证型［3］。中医常通过辨证分型了解不同病症的病因病机，在不同的辨证方法中找到最适合的解决方案，有利于进行针对性治疗。微核糖核酸（miRNA，miR）是一种内源性非编码单链小分子，转录后对基因表达具有调控作用，有研究表明miRNA 参与急性心肌梗死的生理病理过程，是急性心肌梗死病人潜在的诊断生物标志物［4］。miR-1283属于miRNA家族的一员，参与细胞凋亡和血管生成，在多种疾病中发挥重要作用［5］。有研究报道，miRNA在妊娠期高血压疾病中的表达差异与中医证型的不同分型的临床表现有关［6］。但目前关于急性心肌梗死病人血清miR-1283表达与中医证型的关系尚少有文献报道，鉴于此，本研究探究急性心肌梗死病人血清miR-1283表达与中医证型的关系，以为临床诊治提供方向，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2018 年12 月至2021 年11 月在北京市怀柔区中医医院治疗的急性心肌梗死病人236 例作为疾病组，其中男142 例，女94 例；年龄（67.61±12.15）岁，范围为32～81 岁；体质量（23.23±3.62）kg/m2，范围为19～28 kg/m2；ST 段抬高型心肌梗死154 例，非ST 段抬高型心肌梗死82 例；合并高血压113 例，合并高血脂78 例，合并糖尿病96 例。另选取同期在本院体检中心体检的健康人群230例作为健康组，其中男148 例，女82 例；年龄（67.22±12.18）岁，范围为32～81 岁；体质量（23.96±3.86）kg/m2，范围为21～28 kg/m2。两组研究对象的性别、年龄、体质量比较差异无统计学意义（P>0.05）。本研究已经通过北京市怀柔区中医医院医学伦理委员会批准（批号201811-004）。

纳入标准：均符合《急性心肌梗死诊断和治疗指南》［7］中急性心肌梗死的诊断标准；均经皮冠状动脉介入治疗（PCI）；对照组均经体检确认健康；所有对象均对本研究知情并签署同意书。

排除标准：合并先天性心脏病；急性肺栓塞、心肌炎等疾病；严重抑郁或其他精神病者；严重感染性疾病；严重肝、肾等器官功能损伤；患有恶性肿瘤。

1.2 方法血清miR-1283 的检测方法：疾病组病人于确诊时，健康人群于体检当天均空腹抽取外周血5 mL，置于无菌抗凝管中。采用TRIzol 裂解抽提法进行总RNA 的提取，确定符合逆转录标准，并用分光光度计法检测RNA 的完整性。根据Fermentas逆转录试剂盒（北京瑞尔欣德科技有限公司）进行逆转录。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRTPCR）按照All-in-oneTMmiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit 试剂盒进行PCR 扩增，PCR 反应条件：97 ℃反应10 min，95 ℃反应20 s、62 ℃反应1 min，共35个循环，每个反应重复3次以减少误差，采用2-∆∆Ct方法计算miR-1283 表达水平。引物序列：miR-1283正向：5´-CGCGCTCTACAAAGGAAAGCG-3´，反向：5´-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3´；内参U6 正向：5´-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，反向：5´-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3´。

中医辨证分型的诊断方法：均符合《急性心肌梗死中西医结合诊疗指南》［8］中急性心肌梗死中医证型的诊断标准，并由经验丰富的副高职称以上的资深中医医师确诊中医证型。

1.3 统计学方法采用SPSS 26.0 软件进行数据分析，计量资料以±s表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验，计数资料以例（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疾病组和健康组血清miR-1283 表达情况比较疾病组miR-1283 表达水平0.42±0.07 低于健康组0.98±0.18（t=44.47，P<0.001）。

2.2 疾病组中医证型辨证结果疾病组236 例病人经中医辨证分型，分为实证99例、虚实夹杂证111例、虚证26 例三类，其中痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型、阴竭阳脱型占比分别为38.98%（92/236）、2.97%（7/236）、27.12%（64/236）、11.86%（28/236）、8.05%（19/236）、8.90%（21/236）、2.12%（5/236）。

2.3 疾病组不同中医证型病人血清miR-1283 表达情况寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型病人血清miR-1283表达水平两两对比均差异无统计学意义（P>0.05）；痰瘀互结型病人血清miR-1283 表达水平0.36±0.06 低于寒凝心脉型0.41±0.05、气虚血瘀型0.42±0.07、气虚痰瘀互阻型0.43±0.06、气虚痰浊闭阻型0.44±0.07、气阴两虚型0.45±0.09 和阴竭阳脱型0.55±0.08（P<0.05），阴竭阳脱型病人血清miR-1283 表达水平均高于其他型（P<0.05），总体比较，差异有统计学意义（F=20.18，P<0.001）。

3 讨论

急性心肌梗死是临床常见的急、危重病症，也是世界范围内最主要的心血管疾病死亡原因之一［9］。临床主要表现为突发性胸骨或心前区压榨性疼痛，与中医学中“胸痹”和“真心痛”等过程相一致，《灵枢·厥病》中曾记载：“真心痛，手足青至节，心痛甚，旦发夕死，夕发旦死”［10］，由此可见急性心肌梗死病人病情的严重性。中医辨证分型治疗的方法由来已久，但在实际的诊断和治疗中，中医辨证中“证”属于动态变化，其主观、客观等影响因素繁杂多样，辨别困难［11］。因此，探讨能够辅助进行急性心肌梗死中医辨证分型的血清学客观指标对指导临床工作具有重要意义。

本研究结果显示疾病组miR-1283 表达水平低于健康组，提示血清miR-1283表达水平与急性心肌梗死的发生发展密切相关。各种生物体内都存在miRNA，当其与mRNA 非编码序列特异性结合时，可导致miRNA 降解或阻止蛋白编码基因表达与翻译成蛋白的过程，转录后调节基因和蛋白表达，从而调节机体的生长发育，在各种疾病的发生发展中发挥重要作用［12］。miR-1283属于miRNA 家族，能调节心肌细胞增殖与凋亡，有研究报道，miR-1283 表达水平在缺血/复氧损伤心肌细胞中降低，使心肌细胞活力下降并促进心肌细胞凋亡，表明miR-1283表达水平可能促进心血管疾病的发生发展［13］。

急性心肌梗死在中医中被认为发病位置在心脉，涉及肾、脾、肝等脏器，最常见的病理机制为本虚标实，本虚为发病基础，标实为发病条件［14］。由于病人发病时间和诱发病因的不同，会表现出不同的证型，且证型分布较为复杂。中医辨证分型是根据病人症状、舌脉象等依照中医的思维方式，得出证型，然后根据证型给予相应治疗，急性心肌梗死辨证分型也是通过病人发生心肌梗死时的症状、舌脉象等辨证得出。本研究通过中医辨证将疾病组236 例病人分为实证、虚实夹杂证、虚证三类共7 种证型，以虚实夹杂证占比最高，实证占比稍微次之，虚证占比最次之，其中痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型、阴竭阳脱型占比分别为38.98%、2.97%、27.12%、11.86%、8.05%、8.90%、2.12%，以痰瘀互结型，气虚血瘀型病人占比较高，与朱新峰［15］等研究结果一致。王琦的体质学说中提到气虚质易受寒邪和热邪，血瘀质易患血症、痛症，痰湿质易患中风、胸痹［16］。急性心肌梗死存在长期慢性病史，本虚突出，五脏气血亏虚，心气不足，心阳不振，气血运行不利，心脉推行无力，以致心脉瘀阻，出现血瘀；气血推行受阻，出现气滞；水液气化无力，聚而生痰，出现痰浊；痰浊重浊黏腻，久病难除，遇寒邪容易寒凝化寒湿，遇热邪容易化火转痰热，视为标实，痰浊瘀血互结，导致瘀血祛除更加困难［17-18］。据此可知，虚证为急性心肌梗死的病因，随着病程延长病情逐渐加重，血瘀贯穿整个急性心肌梗死的发病过程，达到痰浊瘀血互结时，病人病情更为危重。本研究比较痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型、阴竭阳脱型病人血清miR-1283表达水平，发现以阴竭阳脱型表达最高，以痰瘀互结型表达最低，而寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型两两比较无显著差异，说明急性心肌梗死不同证型病人血清miR-1283 表达水平存在差异，提示血清miR-1283表达水平可能对急性心肌梗死中医辨证分型提供一定的客观依据。分析原因：miRNA 在机体细胞生长、增殖、分化和凋亡等过程中发挥重要的调节作用，不同证型急性心肌梗死病人血清miR-1283表达水平不同，其表达水平越低，病人的病情越严重。杨泽民等［19］研究报道，血清miRNA 可作为脾虚证病人脾虚证临床辨证分型的潜在标志物，为脾虚证病人发病机制的研究提供依据，贾敏等［20］研究报道，循环microRNA 在急性冠脉综合征中可协助判断血瘀证的轻重。miR-1283来自miRNA 家族，急性心肌梗死气血虚弱是发病基础，阴阳失调是病变基础，痰瘀互结是最终产物，而miR-1283 参与细胞的生长发育及凋亡，调节心肌细胞增殖分化和血管内皮功能，且与急性心肌梗死发生发展密切相关，故其在不同证型急性心肌梗死病人中差异显著。既往何铃［21］研究也报道了miR-1283 在冠心病血瘀证、高血压血瘀证等心血管疾病中表达异常，通过调控PERK/ATF4 信号通路来影响血管内皮细胞的功能，参与糖脂代谢和动脉硬化的形成，并通过分泌炎性因子影响细胞的增殖、分化与凋亡，可能是冠心病血瘀证、高血压血瘀证等心血管疾病血瘀证形成的相关特异性miRNA。

综上所述，急性心肌梗死病人血清miR-1283 表达水平降低，在急性心肌梗死病人中医不同证型表达存在差异，有望成为急性心肌梗死病人不同中医证型的分型依据。