曲妥珠单抗联合化疗方案治疗乳腺癌的疗效及其作用机制研究

陆佳团，王征，张浩

南阳市中心医院乳腺科一病区，河南 南阳 473200

乳腺癌(breast cancer，BC)主要发生于乳腺腺上皮组织，我国BC 筛查率较低，20%的BC 患者确诊时已处于局部晚期，5 年生存率约为24%[1]。目前尚未有统一治疗方案，部分患者存在多种耐药性或多线治疗失败，因而寻找合理有效BC 治疗方案具有重要意义。TP 化疗方案常用于治疗BC，仅采用TP 化疗方案未达到临床预期[2-3]。曲妥珠单抗是一种重组人源化单克隆抗体，可提高HER2 阳性转移性BC 治疗效果[4-5]。但曲妥珠单抗联合TP 化疗方案治疗BC 的临床价值尚未明确。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路异常活化与BC 预后不良有关，Akt 磷酸化可调节丝状肌动蛋白、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达，促进BC 细胞转移[6]，而PI3K/Akt 信号通路是否可作为治疗BC 的潜在靶点尚未明确。本研究探讨其联合治疗BC 的疗效、生存率、毒副反应发生率，并分析其对PI3K/Akt 通路的影响，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年3月至2021年1月南阳市中心医院收治的68 例女性BC 患者为研究对象。纳入标准：符合BC 诊断标准[7]；经组织病理学检查确诊为BC；生存时间≥6 个月；卡氏功能状态(KPS)评分≥60 分；无化疗禁忌证；签署知情同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；精神障碍者；既往放化疗史者；非原发性BC；合并全身感染性疾病者。采用奇偶分组法将患者分为单一组和联合组，每组34 例。两组患者的一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，见表1。本研究经我院医学伦理委员会批准。

表1 两组患者的一般资料比较[，例(%)]Table 1 Comparison of general information between the two groups[,n(%)]

表1 两组患者的一般资料比较[，例(%)]Table 1 Comparison of general information between the two groups[,n(%)]

组别例数年龄(岁)月经情况TNM分期单一组联合组t/χ2值P值34 34 56.24±3.03 57.13±3.15 1.187 0.239绝经22(64.71)20(58.82)未绝经12(35.29)14(41.18)0.249 0.618Ⅲ期23(67.65)24(70.59)Ⅳ期11(32.35)10(29.41)0.069 0.793

1.2 治疗方法

1.2.1 单一组 该组患者予以TP 方案(紫杉醇+顺铂)化疗，化疗前12 h口服地塞米松20 mg(昆药集团股份有限公司，国药准字H53020826，规格：0.75 mg)，前30 min内分别肌内注射苯海拉明50 mg(湖北科伦药业有限公司，国药准字H42021175，规格：1 mL∶20 mg)、西咪替丁300 mg(江苏朗欧药业有限公司，国药准字H32025601，规格：2 mL∶0.2 g)，第1 天静脉滴注紫杉醇150 mg/m2(海南紫杉园制药有限公司，国药准字H20066558，规格：5 mL∶30 mg)，持续3 h；第2 天静脉滴注顺铂25 mg/m2(云南生物谷药业股份有限公司，国药准字H20043889，规格：2 mL∶10 mg)，1 次/d，21 d为一个周期，连续治疗3个周期。

1.2.2 联合组 该组患者予以曲妥珠单抗+TP方案化疗，TP化疗方案同单一组，同时予以曲妥珠单抗(上海复宏汉霖生物制药有限公司，国药准字S20200019，规格：150 mg/瓶)治疗，初始剂量8 mg/kg，1.5 h/次，21 d为一个周期，每周期给药一次，连续治疗3个周期。

1.3 观察指标与评价(检测)方法 (1)临床疗效[8]：完全缓解(CR)，肿瘤病灶完全消失且至少维持4 周；部分缓解(PR)，肿瘤面积缩小≥50%且至少维持4 周；疾病稳定(SD)，肿瘤面积增加≤25%或缩小＜50%，且至少维持4 周；疾病进展(PD)，肿瘤面积增加＞25%或出现新病灶。总有效率=(CR 例数+PR 例数)/总例数×100%，疾病控制率=(CR 例数+PR 例数+SD 例数)/总例数×100%。(2)血清肿瘤标志物：于治疗前后分别采集两组患者的外周静脉血5 mL，离心10 min(3 000 r/min)后取血清。ELISA 法检测血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)水平，上海酶联生物提供检测试剂盒。(3)生化指标：于治疗前后分别采集两组患者的外周静脉血5 mL，离心10 min (3 000 r/min)后取血清。ELISA 法检测血清血小板第4 因子(PF4)、中期因子(MK)、脂质运载蛋白-2(LCN-2)水平，上海酶联生物提供PF4 检测试剂盒，武汉艾美捷科技提供MK 检测试剂盒，上海白益生物提供LCN-2 检测试剂盒。(4)外周血PI3K/Akt 通路相关蛋白表达量：使用非抗凝管分别采集两组患者治疗前后空腹肘静脉血2 mL，提取单核细胞。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白表达量：使用500 μL 裂解液提取单核细胞总蛋白，二喹啉甲酸法(BCA)检测蛋白浓度，取蛋白样品(30 μL)经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，分离蛋白转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，加入磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)一抗[美国Abcam公司，稀释比1∶1 000]、内参GAPDH 稀释液(稀释比1∶3 000)孵育24 h (4℃)，室温孵育山羊抗兔IgG 二抗(美国CST 公司，稀释比1∶5 000) 1 h，使用Quantity One 软件检测蛋白条带灰度值。(5)生活质量和生存率：治疗前后使用欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表(EORTC QLQ-C30)评估生活质量[9]，包括健康(1 项)、功能(5 项)、症状(9 项)，每项0～3 分，分值越高表明生活质量较好。治疗结束后以门诊复查、电话方式进行随访，随访时间为1 年，统计随访期间生存情况。(6)毒副反应：比较两组患者治疗期间的上消化道反应、中性粒细胞减少、蛋白尿、血红蛋白减少等不良反应发生情况。

1.4 统计学方法 应用SPSS24.0 统计学软件分析数据。计量资料以均数±标准差()表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的临床疗效比较 联合组患者的治疗总有效率、疾病控制率均高于单一组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组患者的临床疗效比较[例(%)]Table 2 Comparison of clinical efficacy between the two groups[n(%)]

2.2 两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物水平比较 治疗前，两组患者的血清CEA、CA125、CA153水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗后，两组患者的血清CEA、CA125、CA153 水平明显低于治疗前，且联合组明显低于单一组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物水平比较()Table 3 Comparison of serum tumor marker levels between the two groups()

表3 两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物水平比较()Table 3 Comparison of serum tumor marker levels between the two groups()

注：与同组治疗前比较，aP＜0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP＜0.05.

时间治疗前例数34 34治疗后组别联合组单一组t值P值联合组单一组t值P值34 34 CEA(ng/mL)17.26±3.75 17.41±3.82 0.172 0.864 4.58±1.02a 10.22±2.41a 12.567 0.001 CA125(U/mL)95.38±18.71 94.43±17.52 0.216 0.830 40.31±9.46a 72.39±14.13a 11.001 0.001 CA153(U/mL)74.36±15.86 75.03±16.13 0.173 0.863 35.17±8.72a 56.61±12.27a 8.305 0.001

2.3 两组患者治疗前后的生化指标比较 治疗前，两组患者的血清PF4、MK、LCN-2 水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗后，两组患者的血清PF4、MK、LCN-2水平均较治疗前降低，且联合组患者治疗后的血清PF4、MK、LCN-2 水平明显低于单一组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表4。

表4 两组患者治疗前后的生化指标比较()Table 4 Comparison of biochemical indexes between the two groups()

表4 两组患者治疗前后的生化指标比较()Table 4 Comparison of biochemical indexes between the two groups()

注：与同组治疗前比较，aP＜0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP＜0.05.

时间治疗前例数34 34治疗后组别联合组单一组t值P值联合组单一组t值P值34 34 PF4(ng/mL)0.36±0.08 0.34±0.07 1.097 0.277 0.19±0.04a 0.26±0.06a 5.660 0.001 MK(pg/mL)706.41±135.42 711.28±147.09 0.142 0.887 413.21±97.76a 577.09±112.36a 6.416 0.001 LCN-2(ng/mL)95.36±20.78 96.51±22.07 0.221 0.826 65.76±12.05a 74.09±19.63a 2.109 0.039

2.4 两组患者治疗前后的外周血PI3K/Akt 通路相关蛋白表达量比较 治疗前，两组患者的p-PI3K、p-AKT 蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。治疗后，两组患者的p-PI3K、p-AKT 蛋白表达量均较治疗前降低，且联合组明显低于单一组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表5。

表5 两组患者治疗前后的外周血PI3K/Akt 通路相关蛋白表达量比较()Table 5 The expression of PI3K/Akt pathway related protein in peripheral blood between the two groups()

表5 两组患者治疗前后的外周血PI3K/Akt 通路相关蛋白表达量比较()Table 5 The expression of PI3K/Akt pathway related protein in peripheral blood between the two groups()

注：与同组治疗前比较，aP＜0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP＜0.05.

时间治疗前例数34 34治疗后组别联合组单一组t值P值联合组单一组t值P值34 34 p-PI3K 0.85±0.19 0.82±0.18 0.686 0.495 0.33±0.08a 0.79±0.14 16.635 0.001 p-AKT 0.78±0.13 0.80±0.15 0.588 0.559 0.28±0.04a 0.76±0.10 25.987 0.001

2.5 两组患者治疗前后的生活质量比较 治疗前，联合组和单一组患者的EORTC QLQ-C30 评分分别为(75.43±5.03)分、(74.03±4.91)分，差异无统计学意义(t=1.161，P＞0.05)。治疗后，联合组患者的EORTC QLQ-C30 评分为(116.32±9.13)分，明显高于单一组的(101.24±8.46)分，差异具有统计学意义(t=7.064，P＜0.05)。

2.6 两组患者的生存率和毒副反应发生率比较 随访1年后，联合组失访2例、单一组失访5例，联合组患者的总生存率为93.75%(30/32)，明显高于单一组的72.41%(21/29)，差异有统计学意义(χ2=5.053，P=0.025)。而两组患者的毒副反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表6。

表6 两组患者的毒副反应发生率比较[例(%)]Table 6 Comparison of the incidence of side effects between the two groups[n(%)]

3 讨论

紫杉醇、顺铂化疗可促进微管聚合，抑制微管网重组，诱导细胞周期停滞于M 期，降低肿瘤细胞增殖能力[10]。曲妥珠单抗可结合HER2，减缓肿瘤生长进程，提高侵袭性无病生存期[11-12]。本研究中联合组总有效率、疾病控制率高于单一组，表明联合治疗可提高BC 治疗效果，有效控制BC 发展进程。CEA、CA125、CA153 属于肿瘤标志物，可用于监测病情发展、评估预后[13]。本研究结果与其相似，联合治疗可降低CEA、CA125、CA153水平，表明TP方案加入曲妥珠单抗后全面抗BC作用更为高效，可能与细胞增殖、血管生成得以抑制有关。PF4、MK 可参与BC 血管生成过程，LCN-2 可调节EMT 相关蛋白表达，促进BC 浸润转移[14]。本研究比较治疗前后两组患者的血清PF4、MK、LCN-2 水平，结果发现治疗后联合组患者的血清各指标水平低于单一组，表明联合治疗可降低酪氨酸激酶活性，抑制肿瘤生长、转移。分析原因可能为联合治疗可抑制DNA 合成、HER2 及其相关受体表达，调节肿瘤细胞增殖、分化，有效抑制BC 病情进展。

PI3K/Akt 通路可调节肿瘤淋巴结转移、淋巴管形成，HER2等细胞外信号刺激PI3K后Akt发生膜转位，进入细胞内可参与肿瘤迁移、黏附、细胞外基质降解过程[15]。本研究说明联合治疗可降低p-PI3K、p-AKT蛋白表达。由此推测抑制PI3K/Akt 通路活化可能是联合组疗效显著的原因之一。曲妥珠单抗对HER2具有高度亲和力，可竞争性与恶性细胞或正常细胞HER2 胞外激酶结合，抑制PI3K 磷酸化、PI3K/Akt 通路活化，导致细胞周期停滞于G0/G1期，阻断肿瘤细胞生长进程，促进细胞凋亡[16]。同时本研究分析结果显示，治疗后联合组患者的EORTC QLQ-C30 评分高于单一组，这是由于大部分BC 患者经长期治疗后出现不同程度耐药性，降低生活质量；TP 化疗联合曲妥珠单抗可控制BC 进展，表明联合治疗有助于提高生活质量、生存率。BC 治疗过程中可产生不同程度的毒副作用，本研究结果显示，两组患者的上消化道反应、中性粒细胞减少、蛋白尿、血红蛋白减少发生率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，表明联合治疗并不会增加毒副反应。

综上所述，曲妥珠单抗联合TP 化疗方案治疗BC效果显著，可降低肿瘤标志物和生化指标水平，提高生存率，改善生活质量，且具有一定安全性，其可能通过抑制PI3K/Akt通路活化发挥作用。