百合远缘杂交胚拯救技术

吴 然 李振勤 薛少红 齐春霞 姚则羊 边光亚

（1 石家庄市农林科学研究院 河北 石家庄 050021； 2 石家庄市百合研究技术创新中心 河北 石家庄050021； 3 石家庄市花卉研究技术创新中心 河北 石家庄 050021）

百合(Lilium spp.)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)植物，兼具药、食、赏多种功能，是具有重要经济价值的球根花卉[1]。百合作为球根花卉的重要代表，其市场价值与需求与日俱增。百合育种至今大约有100 年的历史，培育出了数千个百合新品种。虽然近几十年来育种方法不断改进，但全球百合育种仍以常规杂交为主[2]。综合不同杂种系间的优良性状是百合育种中的一个重要目标，因此远缘杂交是百合育种的主要手段。但是，百合远缘杂交往往表现出不亲合现象，克服种间杂交障碍一直是百合杂交育种研究的热点。

胚拯救技术可以有效避免杂种胚的败育，并加快其成苗，从而提高育种效率。因此，笔者通过多年试验，总结百合远缘杂交胚拯救技术，以期降低胚败育率，为百合育种工作者提供技术参考。

1 材料选择

将杂交授粉后30～40 d 剪取的膨大的子房作为外植体，做好标签分类后，放入冰箱4 ℃冷藏保存。

2 组培准备

2.1 工具准备。将纯水、滤纸、接种刀、接种镊及培养皿等接种工具121 ℃高压灭菌40 min。然后将解剖镜及接种工具放入超净工作台，紫外线灭菌30 min。

2.2 培养基的制备。以MS 为基本培养基，调节pH值为5.8～6.0，121 ℃高压灭菌20 min。根据组培各阶段要求培养基需附加不同生长调节剂、琼脂和糖：启动培养基(1/2MS+6-BA0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+琼脂0.6 % + 糖30 g/L)，增殖培养基(MS + 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+琼脂0.6%+糖60 g/L)，生根培养基(1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+ 琼脂0.6%+糖60 g/L)。

3 胚拯救过程

3.1 外植体消毒。用毛笔蘸取洗洁精或洗衣粉仔细刷洗需要接种的子房，洗净后放在流水下冲洗2～3 h。随后，将材料移入无菌瓶，用75%酒精消毒1 min 后，再用无菌水冲洗3 次，每次浸泡1 min；倒入0.1%HgCl2，消毒10 min，期间需晃动无菌瓶，保证HgCl2充分接触材料，无菌水冲洗3 次，每次用无菌水浸泡1 min，以便充分洗去残留的HgCl2。

3.2 接种

3.2.1 子房切片培养。将消毒好的子房用无菌滤纸吸干水分，切取子房最为膨大的部分，每个切片厚度2 mm 左右，一般可切3～5 片，将切片接入启动培养基，温度24 ℃～26 ℃，光照12 h/d，光照强度2 000～3 000 lx，培养14 d。期间观察污染情况，及时将长菌材料移出培养室处理。培养40 d 后，将膨大的胚珠转入新的培养基。

3.2.2 胚珠培养。将消毒好的子房用无菌滤纸吸干水分，沿子房凹缝切开子房，然后剥取胚珠，将胚珠接入配制好的培养基，培养基及培养条件同子房切片培养。

3.2.3 胚培养。将消毒好的子房用无菌滤纸吸干水分，沿子房凹缝切开子房，选取有胚种子，在解剖镜下剥取种胚，接入配制好的培养基，培养基及培养条件同子房切片培养。

3.3 增殖培养。将子房培养(以膨大胚珠转入新培养基的时间计算)、胚珠培养和胚培养约60 d 的杂种苗，去除根部和叶片，转入增殖培养基，在24 ℃～26 ℃条件下暗培养约40 d，可诱导出大小不等的百合小鳞茎。

3.4 生根培养。将分化出的小鳞茎转入生根培养基中进行生根培养，每瓶接种5～6 株，置于培养室，24 ℃～26 ℃条件下暗培养，一般40～50 d 鳞茎直径可达0.5～1 cm，炼苗后即可大田移栽。