尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断价值分析
2023-07-27王鑫杨柳王潇翊
王鑫 杨柳 王潇翊
(1.商丘市第一人民医院分子生物实验室,河南 商丘 476000;2.商丘市第一人民医院输血科,河南商丘 476000)
巨细胞病毒感染由人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染引起,我国为HCMV感染高发地区,多于儿童时期获得。早期多数感染者无明显症状,但先天感染和免疫抑制个体可引起严重疾病,婴幼儿期感染常累及肝脏,故及时诊断对患儿治疗具有重要意义[1]。由于HCMV感染无典型的临床症状,仅靠临床表现无法完全明确诊断,需结合其他方法进行诊断。随着实验室检验技术发展,用于HCMV检测方法也在与时俱进,主要包括血液学检查、尿液检查、脑脊液检查。但由于国内大部分医院并未完全普及病毒分离培养法诊断HCMV感染;同时婴幼儿儿童产生免疫球蛋白(IgM)抗体能力薄弱,使用酶联免疫吸附法检测HCMV-IgM准确率低,而IgM阴性不代表患儿无HCMV感染的可能性[2]。这些因素给HCMV感染的诊断带来了一定难度。
国外有学者认为由于病毒DNA的出现通常早于病毒感染的临床症状或血清学反应,因此,荧光定量PCR技术目前已成为一种能早期、敏感地发现HCMV感染的诊断方法[3]。基于此,本文旨在分析尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断效能。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取本院2019年7月-2022年8月收治HCMV感染患儿112例为研究对象。112例感染患儿中,男55例,女57例,年龄3d-12 m,平均年龄99.17±10.59d。根据主诉、体格检查及第一临床诊断可将HCMV感染患儿进一步分为肺炎组(n=68)、肝炎组(n=26)及其他组(n=18,主诉主要为发热、腹泻等)。其中肝炎组男36例,女32例,年龄3d-89 d,平均年龄76.53±8.16 d;肺炎组男11例,女15例,年龄30d-210 d,平均年龄(112.43±9.04)d;其他组男8例,女10例,年龄53d-360 d,平均年龄112.43±9.04 d。纳入标准:经临床确诊为HCMV感染;临床相关资料完整;排除标准:合并遗传性疾病者;合并其他器官并发症者;近期使用过抗HCMV药物者。本研究经本院伦理委员会批准,且患者及家属同意本研究。
1.2 方法
1.2.1 尿液HCMV-DNA
早上收集研究对象3-5ml的尿液,放入无菌离心管中,离心(12000 rpm,10 min),弃上清,加入50 μL核酸释放剂,与沉淀震荡混匀,备用。取备用样本10 μL,加入40μLPCR反应混合物中,扩增条件:93℃,2 min,预变性;93℃45 s-55℃,15 min,10个循环;93℃30 s—55℃45 s,30个循环。HCMV阳性参考2012年中华医学会儿科分会制订的《HCMV感染诊断和防治指南》,反应在上海宏石SLAN-96P全自动荧光定量PCR仪上进行,根据标准曲线分析并计算HCMV—DNA拷贝数[4]。
1.2.2 血清HCMV-IgM
研究对象于晨起抽取空腹静脉血2 mL,行离心(15000 rpm,10 min),取上清液,放置-20℃保存,采用化学发光法检测血清HCMV-IgM,试剂盒来自德国Roche公司提供,操作严格按照说明书进行。
1.3 观察指标
(1)HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM的检测结果;(2)不同性别HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果(3)不同疾病组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果;(4)不同年龄HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果。
1.4 统计学方法
本研究数据均采用SPSS21.0统计学软件进行分析,计量资料用(±SD)表示,比较采用t检验,计数资料以率(%)表示,比较采用卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HCMV感染患儿的尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果
尿液HCMV-DNA阳性率为30.35%,血清HCMV-IgM阳性率为33.03%,两者联合检测阳性率为87.50%;联合检测水平高于单一检测。表1。
表1 尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测阳性率比较
2.2 不同性别HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果
观察组不同性别之间HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检测结果均无统计学差异(χ2=0.082,0.004,0.413;P>0.05)。
2.3 不同疾病组HCMV感染患儿尿液HCMVDNA、血清HCMV-IgM检测结果
肝炎组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于肺炎组和其他组;且其他组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率低于肺炎组(χ2=24.243,24.727,27.645;P<0.05)。见表3。
表3 不同疾病组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果[n(%)]
2.4 不同年龄HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果
>180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于<90 d和90 d-180 d;且90 d-180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMVIgM及两者联合检出阳性率均高于<90d(χ2=14.133,6.114,8.189;P<0.05)。见表3。
表4 不同年龄HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果[n(%)]
3 讨论
HCMV感染十分普遍,除少数原发性感染发生原发性单核细胞增多症外,极大多数为隐性感染;HCMV感染可导致多个器官出现损伤,如肝脏发生炎症、泌尿生殖系统感染、引发肺、中枢神经系统和血液循环发生病变[5]。然而HCMV感染临床表现缺乏特异性,仅靠其并不能完全提供诊断依据,需依靠实验室检查进行辅助诊断。
在出生最初3 w的新生儿尿液、呼吸道分泌物或者其他体液分离出HCMV是先天性感染最敏感和特异的确诊依据[6]。PCR在用于监测免疫抑制病人的HCMV感染时,其敏感性高于病毒分离和抗原血清检测,而尿液所含的病毒量较高,因此为首选的标本[7]。本次研究应用PCR技术对HCMV感染患儿检查尿液HCMV-DNA,发现观察组尿液HCMV-DNA阳性率为30.35%(34/112),说明HCMV感染普遍存在。有研究表明HCMVDNA阳性可早期预测HCMV感染存在,但仅此无法完全区别潜伏感染和活动性感染,其原因在于HCMV-DNA拷贝数重叠范围广,尚未明确DNA拷贝界限[7,8]。目前临床常检测血清HCMV IgM作为HCMV近期感染的重要依据。已有充分临床证据证实抗HCMV IgM抗体检测阳性表明机体近期存在活动性感染,如果同时抗HCMVIgG抗体阴性,则表明是HCMV原发性感染[7,8]。HCMV-IgG抗体阳性表明有既往感染,血清IgG抗体阳性转化表明是原发感染,而连续监测IgG滴度急剧升高表明存在HCMV活动性感染[7,8]。本次研究显示观察组血清HCMV-IgM阳性率为33.03%(37/112),说明其可准确判断HCMV感染状态,为治疗提供一定依据;但其抗体本身代谢规律及检测方法具有一定局限性。而本次结果显示尿液两者联合检测阳性率为87.50%,说明两者结合检测阳性率高于单一检测,且可全面评估患儿HCMV感染状态。HCMV的感染可通过改变宿主细胞的凋亡、增殖和免疫反应等方式来破坏内稳态平衡,进而参与多种疾病的发生。婴儿免疫系统薄弱,抑制HCMV入侵能力低下,极易受到感染,且感染后大部分患儿易出现不同程度的肝胆受损和间质性肺炎[9]。本次研究显示肝炎组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于肺炎组和其他组;说明肝脏极大可能是患儿易受到巨细胞病毒感染的器官。
有研究表明年龄越低的婴幼儿免疫系统不成熟,其产生IgM的能力也越低,故其假阴性多[7-9]。鉴于此,本文猜想通过尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测巨细胞病毒感染,发现>180d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于<90 d和90 d-180 d,且其中两者检测阳性率高于单一检测,提示尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM与年龄具有一定联系,且再次间接证实两者联合检测阳性率更高,原因可能是随着孩子年龄的增长,肾脏较强的浓缩能力与接触病原菌的概率增加相关[9,10]。
综上所述,尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断效能高,结合临床表现可全面判断患儿HCMV感染状态。