炼蜜的质量标准研究*

李梅花，刘灿辉，丁 野，吕 欣

(1 邵阳市食品药品检验所，湖南 邵阳 422000；2 湖南省药品检验检测研究院，湖南 长沙 410000)

蜂蜜入药最早见于《神农本草经》，被列为上品。可见，蜂蜜自古就被用作药材广泛使用，一直也被我国药典收载；同时也是一种重要的中药辅料，广泛用于中药材炮制及蜜丸制备，历史悠久。蜂蜜用作中药辅料需经过炼制，蜂蜜炼制的目的是为增加蜂蜜的粘度，以满足不同药材粉末的制剂需要。炼蜜目前有嫩蜜、中蜜、老蜜三个等级，其区分主要以炼蜜人按经验定。

现行中国药典(2020年版)及各省标准都没有明确的数据规定具体的炼蜜标准。本实验收集了不同厂家经验丰富的老工人炼制的嫩、中、老蜜，对其性状、相对密度、水分、5-羟甲基糠醛进行检验；以性状、相对密度、水分作为炼蜜粘度的具体指标，区分各种炼蜜；以5-羟甲基糠醛作为炼蜜的安全性指标，区分炼蜜的好坏；以期让嫩、中、老蜜的标准具体化，为蜂蜜的炼制提供依据。

1 材 料

1.1 主要仪器

LC-20A高效液相色谱仪(DAD检测器)，日本岛津公司；IR140温控自动折光仪，上海仪迈仪器科技有限公司；AUW 220电子天平(0.1 mg)，日本岛津公司；MS205DU/A电子天平(0.01 mg)，瑞士Mettler公司；超纯水仪，德国Sartorius 集团。

1.2 主要药品与试剂

鸟苷(111977-201501，纯度：93.6%)、5-羟甲基糠醛(11626-201509，纯度：97.8%)，中国食品药品检定研究院；19035087乙腈(色谱纯)，TEDIA公司；水为超纯水；其余所用试剂(甲酸、甲醇等)均为分析纯。

所有炼蜜样品分别由5个厂家的老药工炼制，嫩、中、老蜜各12批，分别编号nm01～nm12、zm01～zm12、lm01～lm12。

2 方法与结果

2.1 性 状

综合共36批炼蜜的性状特点，对嫩、中、老蜜的性状进行描述，区别点见表2。

2.2 相对密度

将大部分嫩蜜和中蜜分别按《中国药典》2020版一部蜂蜜项下相对密度的测定法[1]和《中国药典》2020年版四部通则0183煎膏剂(膏滋)项下相对密度的测定法[2]进行测定，结果见表1。

表1 炼蜜的相对密度(25 ℃)

由表1可知附温比重瓶法测定的相对密度均比韦氏比重秤法高，差值为0.02～0.04，分析其原因可能是蜂蜜通过炼制后粘度增加，流动性变差，倒进量筒内易产生气泡，且难以消除，导致比重秤法所得结果偏低。另因比重秤法在炼蜜密度测定中，浮锤下沉耗时长，难以达到平衡，测定难度大，且老蜜粘度太大，基本无法用比重秤测定，故比重称法不适用于炼蜜的相对密度测定。用煎膏剂项下相对密度的附温比重瓶法，解决了炼蜜粘度大，流动性差的问题，简单易操作，重复性好，样品用量小，测定效率高，可用于炼蜜的相对密度测定，也是本研究的一次新探索。

由上表可知，在比重瓶测定方法下，12批嫩蜜相对密度主要集中在1.430～1.460之间；9批中密相对密度主要集中在1.468～1.491之间；11批老蜜相对密度主要集中在1.492～1.534之间；忽略一些性状不符样品的结果数据，拟定各炼蜜相对密度指标见表2。

表2 3种炼蜜的数据指标

2.3 水 分

参照《中国药典》2020年版一部蜂蜜[检查]项下水分测定法，对共36批炼蜜样品进行测定，检测用仪器：仪迈IR140温控自动折光仪。

结果如下：12批嫩蜜的水分主要集中在17.1～20.4之间；12批中蜜水分主要集中在13.6～15.9之间；11批老蜜水分主要集中在9.2～12.9之间。拟定各炼蜜水分指标见表2。

2.4 5-羟甲基糠醛

蜂蜜中的5-羟甲基糠醛(5-HMF)是己糖经加热分解产生的降解物[3]，在新鲜蜂蜜中含量极其微少[4-5]，会随着加工或老化过程不断增加，有文献报道其对人体有一定的毒害作用，可引起动物横纹肌麻痹及内脏损害[6-7]。5-羟甲基糠醛作为一个安全性指标及是否过度加热的指示性指标，检测炼蜜中5-羟甲基糠醛的含量很有必要。但5-HMF性质不稳定，常温下极易潮解，高于30 ℃极难准确称量[7]，故选择结构相近，性质稳定的鸟苷为参照物，用校正因子法计算炼蜜中的5-HMF含量。

2.4.1 对照品溶液

精密称取鸟苷对照品：(1)10.56 mg；(2)9.81 mg；(3)10.26 mg，分别置50 mL量瓶中，加10%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得鸟苷对照品储备液(1)、(2)、(3)。精密称取5-HMF对照品8.89 mg，置50 mL量瓶中，加10%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得5-HMF对照品储备液。精密量取5-HMF对照品储备液2 mL置100 mL量瓶中，加10%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得5-HMF对照品溶液，作为定位用。

2.4.2 供试品溶液

取本品约1 g，置烧杯中，精密称定，加10%甲醇适量溶解，并分次转移至50 mL量瓶中，精密加入鸟苷对照品储备液(2)或(3)1 mL，加10%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4.3 色谱条件

色谱柱：Ultimate C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%甲酸溶液(5∶95)；流速1.0 mL·min-1；5-HMF检测波长为284 nm；鸟苷检测波长为254 nm；柱温35 ℃；进样量：10 μL。

取鸟苷对照品储备液、5-HMF对照品溶液、供试品溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图(图1)。结果表明，样品中其他成分对鸟苷和5-羟甲基糠醛的测定无干扰。

图1 炼蜜HPLC图

2.4.4 线性关系考察

精密吸取鸟苷对照品储备液(1)0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0 mL，分别置100 mL量瓶中，再分别精密加入5-羟甲基糠醛对照品储备液2 mL，加10%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取10 μL进样测定。以鸟苷与5-HMF的质量浓度比值X为横坐标，以两者的峰面积比值Y为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：y= 0.3457x-0.0047，R2=0.9999。结果表明：鸟苷/5-HMF不同浓度比值(0.28～4.55)与峰面积比值的线性关系良好(R2=0.9999)，校正因子(Y/X)均值为0.340。

2.4.5 精密度试验

取同一中蜜供试品溶液(zm05)，连续进样6次，每次10 μL，记录色谱峰面积，计算RSD(n=6)为1.3%，表明仪器精密度良好。

2.4.6 重复性试验

取同一中蜜供试品(zm05)，依法制备6份供试品溶液，测定并计算，RSD为0.4%，表明本方法重复性良好。

2.4.7 回收率试验

取已测定含量的同一中蜜供试品(zm05)(含5-HMF 50.70 μg/g)约0.5 g(6份)，精密称定，置烧杯中，精密加入5-HMF对照品溶液6 mL，依法制备供试品溶液，测定并计算，结果平均加样回收率为96.8%，RSD为3.24%，表明回收良好。

2.4.8 各炼蜜5-HMF含量测定结果及限度拟定

对共36批炼蜜样品进行了含量测定，结果如下：12批嫩蜜的5-HMF含量主要集中在0.0021%～0.0044%之间；11批中密主要集中在0.0046%～0.0800%之间，其中一批为0.0140%；9批老蜜主要集中在0.0050%～0.0179%之间，lm10～lm12样中5-HMF含量特别高(0.0388%、0.0674%、0.1331%)，可能跟加热时的温度有关，此3批老蜜均可见不同程度的黑色糊状物。本实验拟定的限度以药典蜂蜜(限度0.004%)为参照，计划嫩、中、老蜜每等级增0.004%，老蜜相对密度及水分没设上限，所以老蜜适度放宽，根据实际测定数据，忽略其中的明显偏离值，拟定各炼蜜5-HMF含量见表2。

3 结 论

所有炼蜜样品均是凭经验炼制，难免会出现部分样品不能达到既定要求的现象，比如lm04样品两手指捻之分开时无长白丝出现，未达到老蜜要求，故其各数据未纳入老蜜指标考虑。

本研究拟定的水分限度，嫩蜜与中蜜限度与中药药剂学的描述比较接近；老蜜限度稍有出入。在我们收集到的样品中含水量10%以下的流动性极差，几成固体，且含水量在12.9%的样品性状上也能满足要求，两手指捻之分开时有较长白丝出现；另中药药剂学[8]中关于中蜜和老蜜的水分断层(14%与10%的断层)也找不到相关说明，故在限度拟定中根据实际情况补足断层。另外，我们也考查了烘干法做水分，很难达到恒重，折光法操作简单，重复性好，样品用量小，适用于炼蜜的水分测定。

综上所述，总结3种炼蜜的各数据指标于表2，今后将继续扩大样本，收集数据，制定更加科学严谨的标准。