miR-133b、ROS对高龄孕妇子痫前期发病的影响

彭志美, 薛 洁, 霍晓燕

(邯郸市第一医院产科, 河北 邯郸 056000)

子痫前期是一种妊娠期特发疾病,多发病于妊娠20周后,病情呈持续性进展,若未得到及时有效干预,可进展为子痫,甚至并发心脑血管疾病等[1-2]。研究显示,子痫前期在发达国家发病率约2%～5%,在发展中国家发病率高达10%左右,严重危害母婴健康[3-4]。基于分子生物学的相关研究发现,微小RNA(microRNA,miR)对胎盘生长发育、滋养细胞生长、侵袭及凋亡均有重要调控作用,其中miR-133b表达失调可诱发滋养细胞功能障碍,影响螺旋动脉重塑[5-6]。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)是氧代谢产生的单分子,对人体多项生理功能均有调节功能[7-8]。妊娠期间,胎盘富含线粒体,血管丰富,孕妇外周血ROS生成增加,以维持胚胎发育,但当ROS的产生超过抗氧化防御系统代偿能力时会诱发氧化应激损伤,且氧化应激参与子痫前期的多个病理阶段[9-10]。目前子痫前期尚缺乏特效治疗方案,而高龄是子痫前期的独立危险因素,因此探究子痫前期的发病机制及其有效预测指标尤为重要。基于此,本研究以邯郸市第一医院产检并分娩的高龄孕妇300例为研究对象,检测血清miR-133b、ROS水平,并初步分析二者对子痫前期发病的交互作用。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2020年1月-2022年5月邯郸市第一医院产检并分娩的高龄孕妇300例,根据是否发生子痫前期分为子痫前期组、无子痫前期组。(1)纳入标准:年龄≥35岁;单胎妊娠;入组孕周12～14周;子痫前期组符合子痫前期诊断标准[11];对本研究方案知情,并自愿签署同意书。(2)排除标准:染色体疾病;流产;急慢性感染;合并严重心脑血管疾病;严重肝肾功能障碍。年龄35～45岁,平均年龄(39.61±2.14)岁;孕前体质指数(Body mass index,BMI)19～30 kg/m2,平均BMI(24.32±2.10) kg/m2;孕产史:初产妇188例,经产妇112例。

1.2 检测方法入组时采集外周血3 mL,离心10 min后分离取上层清液。采用美国贝克曼库尔特AU5800型全自动生化分析仪测定ROS水平,试剂盒由仪器配套提供。miR-133b水平采用美国ABI公司7300型实时荧光定量PCR仪测定,内参选用U6,根据逆转录试剂盒说明书步骤将总mRNA逆转录成cDNA,35个循环。U6引物序列正向引物:5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′;反向引物:5′-APCGCTTCACGAPTTGCGT-3′。miR-133b引物序列正向引物:5′-UUUGGUCCCCUUCAPCCAG-CUA-3′;反向引物:5′-GCUGGUUGAPGGGGACCAPAUU-3′。采用2-ΔΔCt相对定量法计算miR-133b相对表达量。

1.3 观察指标(1)子痫前期发生率;(2)孕妇临床资料:年龄、孕前BMI、孕产史、子痫或子痫前期病史、高血压家族史、受孕方式、吸烟史、营养不良、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、尿酸(Uric acid,UA)、肌酐(Creatinine,Cr)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、三酰甘油(Triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、ROS、miR-133b;(3)miR-133b、ROS对子痫前期发生风险的评估价值;(4)miR-133b、ROS与子痫前期发病风险的关系;(5)miR-133b与ROS对高龄孕妇子痫前期发病的交互作用;(6)妊娠结局。

2 结果

2.1 两组孕妇临床资料比较300例高龄孕妇发生子痫前期41例,发生率为13.67%(41/300)。两组孕妇年龄、孕产史、受孕方式、吸烟史、营养不良比较,差异无统计学意义(P>0.05)。子痫前期组孕妇孕前BMI、子痫或子痫前期病史、高血压家族史、ALT、AST、UA、Cr、TC、TG、LDL-C、ROS高于无子痫前期组,HDL-C、miR-133b低于无子痫前期组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组孕妇临床资料比较

2.2 miR-133b、ROS对子痫前期发生风险的评估价值以子痫前期孕妇血清miR-133b、ROS水平作为阳性样本,以无子痫前期者miR-133b、ROS水平作为阴性样本,绘制各指标评估子痫前期发病风险的ROC曲线,结果显示,miR-133b、ROS水平评估子痫前期发病风险的AUC值分别为0.816、0.754,二者联合检测的AUC值为0.888,高于miR-133b、ROS单独评估的AUC值(Z/P=2.402/0.016,3.356/<0.001),见表2、图1。

图1 miR-133b、ROS评估子痫前期发病风险的ROC曲线图

表2 miR-133b、ROS对子痫前期发生风险的评估价值

2.3 miR-133b、ROS与子痫前期发病风险的关系miR-133b、ROS以cut-off值为界限,

表3 miR-133b、ROS与子痫前期发病风险的关系

2.4 miR-133b与ROS对高龄孕妇子痫前期发病的影响调整混杂因素后显示,miR-133b与ROS对高龄孕妇子痫前期发病存在拮抗作用(REPI=1.232,AP=0.320,S<1.000),见表4。

2.5 两组妊娠结局比较与无子痫前期组比较,子痫前期组剖宫产(73.17%vs41.70%)、产后出血(9.76%vs1.16%)、 胎膜早破(19.51%vs7.72%)、低出生体质量(24.39%vs10.04%)、胎儿窘迫(21.95%vs8.49%)、新生儿窒息(24.39%vs11.58%)发生率均升高(P<0.05),见表5。

表5 两组妊娠结局比较/例(%)

3 讨论

随着年龄增长,女性腹部脂肪逐渐堆积,机体代谢能力降低,多存在葡萄糖耐受不良、脂质代谢紊乱等现象,加之心理压力、精神压力较大,高龄孕妇子痫前期发病风险相对更高[12]。本研究发现,高龄孕妇子痫前期发生率达13.67%。目前子痫前期的发病机制尚未明确,多认为与遗传、免疫失衡、过度炎症、氧化应激、血管内皮损伤等因素有关。虽然已有多项研究分析子痫前期的危险因素[13-14],但由于个体化差异明显,其对高龄孕妇发生子痫前期的发病风险的判断价值仍不确切,亟需寻找有效的生化指标。

孕妇绒毛内滋养细胞侵袭性降低导致子宫内膜浸润不足是子痫前期的病理机制之一。miR-133b是miR-133家族中的一员,可通过抑制抗凋亡基因BCL-W基因表达诱导细胞凋亡。既往关于其研究多集中在恶性肿瘤及心血管疾病方面[15-18],而胎盘滋养细胞的增殖行为与肿瘤细胞行为有诸多相似之处。有研究指出,miR-133b在子痫前期胎盘中表达下调,与胱氨酸β合成酶和胱氨酸γ-裂解酶水平相关,而经胱氨酸β合成酶siRNA和胱氨酸γ-裂解酶siRNA转染的合胞滋养细胞可逆转l-半胱氨酸对sFlt-1 mRNA表达的抑制作用[19]。有研究报道,miR-133b在子痫前期的发病中可能通过负向调节可溶性血管内皮生长因子受体1蛋白表达参与子痫前期的发生,子痫前期及重度子痫前期孕妇血清及胎盘组织miR-133b表达均低于正常妊娠者,miR-133b表达与疾病严重程度呈负相关[20]。本研究中子痫前期患者血清miR-133b较低,与上述结果相似。miR-133b可抑制内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮通路,降低滋养细胞浸润功能,从而造成子宫螺旋动脉重塑障碍,诱发子痫前期[21]。由此推测,miR-133b在子痫前期的发病中具有重要作用。

氧化应激与子痫前期的关系已在多项研究中得到证实[22-23]。本研究检测结果发现,子痫前期患者血清ROS高于无子痫前期者,与文献[24-25]研究结果一致。ROS诱发子痫前期的机制包括:(1)机体ROS产生过多可损伤抗氧化酶,致使其活性降低,氧化-抗氧化系统动态平衡遭到破坏,引发细胞功能障碍,从而造成滋养细胞过度凋亡;(2)过多的ROS会抑制一氧化氮活性,造成内皮细胞功能障碍,抑制滋养层细胞侵袭;(3)大量的ROS会进一步加剧脂质过氧化过程,介导胎盘血管发育不良及胎盘功能障碍[26-27]。调整混杂因素后发现,miR-133b、ROS高水平者子痫前期发病风险分别是miR-133b、ROS低水平者0.360倍、2.860倍。miR-133b与ROS对高龄孕妇子痫前期发病存在拮抗作用,在miR-133b与ROS共存的子痫前期发病风险中,有32.0%是由两者交互作用引起的。通过绘制ROC显示,miR-133b、ROS联合评估高龄孕妇子痫前期的AUC值高于单一指标评估值,提示临床可通过测定二者水平判断子痫前期发病风险,对疾病防治提供指导。

子痫前期患者因体内氧自由基明显增加,导致血管内皮损伤、微循环障碍,诱发胎盘缺血缺氧,从而大大增加不良妊娠结局风险。本研究统计结果显示,子痫前期患者剖宫产、产后出血、胎膜早破、低出生体质量、胎儿窘迫、新生儿窒息发生率均升高。因此,对于高龄孕妇,尤其是存在多项子痫前期高危因素的高龄孕妇应加强妊娠期宣教,强化防治意识,除常规产检项目外可及时检测外周血miR-133b、ROS表达情况,及早诊断,及早治疗,以促进妊娠结局改善。

综上所述,高龄子痫前期孕妇miR-133b低水平,ROS高水平,二者均参与高龄孕妇子痫前期的发病,且呈现拮抗作用,临床可通过检测miR-133b、ROS水平判断子痫前期发病风险,但是否可以通过抗氧化治疗促进miR-133b表达进而改善妊娠结局尚未明确,可作为今后研究的方向之一。