免疫磁珠分离技术对白色念珠菌所致阴道炎的检测价值分析

姚琼 徐岷

1河南中医药大学第五临床附属医院 郑州人民医院检验科，郑州 450000；2郑州大学第一附属医院检验科，郑州 450000

念珠菌性阴道炎为一种十分常见的阴道炎类型。有数据显示，临床约有80%阴道炎患者发病由白色念珠菌引起，且近年此病患病率呈逐步上升趋势［1］。临床实践表明，白色念珠菌感染较为顽固，受个人不良卫生习惯影响，绝大部分女性再次感染的风险较高。早期明确患者的感染类型并予以针对性抗菌治疗对改善女性生活质量有重要意义［2-3］。既往临床将阴道分泌物培养作为鉴别阴道炎感染类型的金标准，此方法耗时较长，临床应用存在一定局限性［4］。镜检法为一种病原微生物检测的常用方法，但其检测结果的准确性可受多种主观、客观因素影响［5］。免疫磁珠分离技术为一种新型微生物检测技术，通过制备致病菌血清抗体即可让靶物质中的抗原与免疫磁珠表面抗体相结合，从而分离靶物质［6］。目前，该技术已在多种环境、食品微生物及病原微生物检测中得到广泛应用。本研究主要探讨免疫磁珠分离技术对白色念珠菌所致阴道炎的临床检测价值。

资料与方法

1.一般资料

选取2021年6月至2023年1月于郑州人民医院接受阴道分泌物检查的190名女性作为研究对象，将102例阴道炎患者列为病例组，其余88 例行常规妇科检查的健康志愿者列为对照组。病例组年龄25～40（32.53±5.33）岁；婚姻情况：已婚80例，未婚22例；生育情况：已育62例，未育40例。对照组年龄27～38（36.14±5.27）岁；婚姻情况：已婚70 例，未婚18 例；生育情况：已育55 例，未育33 例。两组患者一般资料比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

纳入标准：⑴病例组患者均符合阴道炎临床诊断标准［7］，均伴有不同程度白带异常、阴部瘙痒症状，经分泌物培养确认为白色念珠菌所致阴道炎；⑵入组成员近2 d内无性生活；⑶近3 个月内未服用过任何抗生素药物；⑷均已知悉此次研究试验内容，同意获取既往临床资料。

排除标准：⑴处于妊娠期、哺乳期女性；⑵伴有免疫功能异常或其他感染性症状者；⑶存在心肺、肝肾功能障碍者；⑷恶性肿瘤者；⑸临床资料缺失者。

2.方法

2.1.阴道分泌物培养 ⑴样本采集：嘱受检者呈截石位，经窥阴器阴道下将无菌棉签置于阴道后端穹隆处，按顺时针方向旋转棉签蘸取阴道分泌物样本，旋转3～5 圈为宜，后将蘸取样本的棉签置入含有细胞保存液的无菌试管中，于试管外侧做好相应标记，保存待用。⑵培养方法：准备好恒温的沙堡弱培养基，培养基温度保持在34～36 ℃之间，将试管中的分泌物样本放置于培养基中培育7 d，观察并记录致病菌的生长情况，若7 d内发现有致病菌则判定为阳性。

2.2.湿片镜检法 样本采集方法同上，具体检测方法如下：⑴将阴道分泌物样本制作为样本涂片并在涂片上滴加1～2 滴浓度为10.0%的氢氧化钾溶液；⑵将显微镜调节为200 倍视野，观察样本涂片上的真菌类型及分布情况即可。本次镜检所采用的设备为上海铂悦仪器有限公司提供的XSP-BM-6C生物光学显微镜。

2.3.免疫磁珠分离法 ⑴免抗念珠菌血清的制备：①将浓度为0.50%的生理盐水滴入玻璃磨菌管中，采用接种环刮取培养物后置于磨菌管底部并将其捻为乳酪状，后加入含有1.00%浓度甲醛的生理盐水进行稀释，制备为1∶1菌悬液后于37 ℃恒温下的EP管内灭活24 h；②将菌悬液转移至烧杯封口后进行冰浴，应用超声细胞粉碎机破碎培养物，探头频率选择20 kHz，功率选择150 W，每破碎6 s后间隔4 s，持续破碎30 min 后将全菌抗原进行分装，-20 ℃保存待用；③经传统皮下多点注射方法对家兔进行基础免疫即免疫加强，经酶免法测定抗体小家后即可采用1∶100 包被缓冲液稀释酶标板，然后应用PBS 缓冲液进行多次稀释，待血清稀释度OD 值达1.000 后即可在颈动脉处放血进行血清分离。⑵抗体与免疫磁珠的偶联：①选择美国Vitrogen公司提供的甲苯磺酰基活化磁珠彻底混匀后取1 ml 转移至EP 管中并置入磁性分离架，等待1 min至磁珠吸附至管壁后吸出移液器中多余液体；②重复洗涤磁珠待其稀释至适宜浓度后于室温下取1 ml 重悬包被磁珠孵育18 h；③孵育完成后再次将磁架置入EP 管，同样于1 min 后取出并弃去多余液体，加入缓冲液于4 ℃下洗涤磁珠，重复2 次后加入磁珠封阻液，次日再次按上述步骤洗涤磁珠并加入浓度为0.02%三氮化钠，4 ℃下保存备用。⑶免疫磁珠分离：①应用磁珠洗涤缓冲液洗涤1次包被磁珠，待其恢复至原有体积，取50 μl包被磁珠加入至1 ml 念珠菌菌悬液，于30 转/min 旋转混匀仪上反应30 min，后采用磁架收集磁珠并洗涤3 次；②将阴道分泌物样本涂片进行干燥后分别滴加石碳酸复红染液、脱色剂和亚甲蓝复染液，根据涂片抗酸染色结果观察免疫磁珠分离后磁珠与菌体的结合情况。

3.观察指标

3.1.检出情况 统计并对比不同检测方法下念珠菌阴道炎患者的检出情况，计算不同检测方法对白色念珠菌所致阴道炎的检出率，检出率=（对应方法检出例数/分泌物培养例数）×100%。

3.2.诊断效能 统计并对比不同检测方法对白色念珠菌所致阴道炎的诊断效能，设定白色念珠菌阴道炎患者为阳性，对照组为阴性，评估指标包括准确率、灵敏度、特异度，准确率=（总例数-误诊例数）总例数×100%，误诊例数=假阳性+假阴性；灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性），即有病诊断阳性的概率；特异度=真阴性/（假阳性+真阴性），即无病诊断阴性的概率。

4.统计学方法

数据均采用软件SPSS 22.0 处理，计数资料以例（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05差异有统计学意义。

结果

1.不同检测方法检出情况比较

免疫磁珠分离技术共检测出88 例白色念珠菌所致阴道炎，湿片镜检法共检测出70 例；免疫磁珠分离技术对于白色念珠菌所致阴道炎的检出率为86.27%（88/102），高于湿片镜检法的68.63%（70/102）（χ2=8.908，P=0.003）。

2.不同检测方法诊断效能比较

⑴190 例中共有102 例念珠菌性阴道炎阳性病例和88例阴性病例，结合分泌物培养结果，湿片镜检法下共检出70例白色念珠菌阴道炎阳性，75例阴性，假阳性13例，假阴性32 例，诊断准确率为81.58%（155/190），灵敏度为68.63%（70/102），特异度为85.23%（75/88）。见表1。

表1 接受阴道分泌物检查的190名女性湿片镜检法检测白色念珠菌阴道炎的结果（例）

⑵190 例中共有102 例念珠菌性阴道炎阳性病例和88例阴性病例，结合分泌物培养结果，免疫磁珠分离法下共检出88 例白色念珠菌阴道炎阳性，83 例阴性，假阳性5 例，假阴性14 例，诊断准确率为95.26%（181/190），灵敏度为86.27%（88/102），特异度94.32%（83/88），见表2。

表2 接受阴道分泌物检查的190名女性免疫磁珠分离法检测白色念珠菌阴道炎的结果（例）

⑶由结果⑴、⑵可知，免疫磁珠分离法对白色念珠菌阴道炎的诊断准确率、灵敏度、特异度均高于湿片镜检法（P＜0.05），见表3。

表3 不同检测方法对白色念珠菌阴道炎的诊断效能比较（%）

讨论

念珠菌为一种条件致病菌，在人体内含量较低，但当机体免疫力下降时，念珠菌可大量繁殖并引发一系列感染症状。白色念珠菌是人体最主要的念珠菌菌属，也是霉菌性阴道炎患者的常见致病原因［8］。念珠菌性阴道炎可通过多种御外法治愈，但此病极易反复，对女性生活质量及身心健康均可产生严重影响，明确患者感染类型并实施针对性抗菌治疗为其主要干预原则［9］。此前，临床常会通过阴道分泌物培养或镜检法明确阴道炎患者的感染类型。研究表明，传统分泌物培养法耗时较长，无法充分适应患者的随诊需求。镜检法具有简单易行、方便快捷等优势，但易受医生操作或外部环境影响，此检测方法也可存在一定漏诊、误诊情况［10］。

免疫磁珠分离为一种新型免疫学技术，在细胞分离及微生物检测中均具有较高应用价值。采用此技术进行临床检测的关键在于血清抗体的制备及纯化，制备纯化抗体及免疫磁珠并将其加入靶物质中，在强磁场作用下即可通过抗体、抗原的特异性结合机制实现对病原微生物的有效分离［11］。本研究结果显示，免疫磁珠分离技术对于白色念珠菌所致阴道炎的检出率为86.27%（88/102），高于湿片镜检法的68.63%（70/102）。研究基于传统皮下或多点注射方式，从家兔中提取并制成了念珠菌的血清抗体，将其与磁珠混合后实现了对念珠菌的磁场分离。磁珠分离后通过抗酸染色试验即可实现对磁珠与菌体结合情况的客观评估［12］。与此前临床常用的湿片镜检法相比，免疫磁珠分离可规避因检测人员操作不当或环境污染产生的影响，提升检测结果的准确性［13］。姚骅珊和陈悦科［14］应用免疫磁珠分离技术实现了对阪崎肠杆菌的快速检测，他们认为，此检测技术具有良好的特异度和稳定性，在多种病原微生物检测中均有较高应用价值。李雪利等［15］认为，经建立蜡样芽孢杆菌免疫磁珠，并与环介导等温扩增相结合后可显著提升食品中病原微生物的检测灵敏度和特异度。以阴道分泌物培养结果为金标准，本研究对比不同检测方法的诊断效能，结果显示，免疫磁珠分离法对白色念珠菌阴道炎的诊断准确率、灵敏度、特异度均高于湿片镜检法（均P＜0.05），提示免疫磁珠分离技术在念珠菌性阴道炎的鉴别诊断中也有较高应用价值。

综上所述，免疫磁珠分离技术可用于白色念珠菌阴道炎患者的临床检测中；与传统镜检法相比，此技术具有高效、快速、准确率高等优势，可更好地适应患者的临床需求。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明姚琼：酝酿和设计试验，实施研究，采集数据，分析解释数据，起草文案，统计分析；徐岷：对文章的知识性内容作批评性审阅、指导